Автореферат (1141298), страница 2
Текст из файла (страница 2)
Вклад автора является определяющим и7заключается в непосредственном участии во всех этапах исследования: от постановки задач, ихтеоретической и практической реализации до обсуждения результатов в научных публикациях,докладах и внедрения их в практику.Внедрение результатов исследования.По результатам исследования разработан проект ФС «Арония черноплодная плодывысушенные» для ГФ РФ XIII изд., принятые ФГБУ «НЦ ЭСМП» к рассмотрению(Приложение 1).Материалыдиссертационнойработыиспользуютсявучебномпроцессекафедрыфармакогнозии и фармацевтической технологии ГБОУ ВПО «Ярославский государственныймедицинский университет» Минздрава России (акт внедрения от 02.04.2016 г.); кафедрыуправленияиэкономикифармацииифармакогнозииФГБОУВО«Воронежскийгосударственный университет» (акт внедрения № 1500-134 от 06.04.2016 г.).Соответствие диссертации паспорту научной специальности.Научные положения диссертации соответствуют формуле специальности14.04.02 – фармацевтическая химия, фармакогнозия.
Результаты проведенного исследованиясоответствуют области исследования специальности, конкретно пунктам 2, 3 паспортаспециальности фармацевтическая химия, фармакогнозия.Связь исследования с проблемным планом фармацевтической науки.Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематическим планом по научнойпроблеме «Разработка современных технологий подготовки специалистов с высшиммедицинским и фармацевтическим образованием на основе достижений медико-биологическихисследований (No государственной регистрации 01.2.006 06352.) университета (Воронеж, 20122016 гг.).Объем и структура диссертации. Работа изложена на 162 страницах машинописноготекста, содержит 35 таблиц и 32 рисунок.
Работа состоит из введения, обзора литературы, 5экспериментальных глав, выводов, списка литературы из 153 наименований, из которых 40 наиностранных языках.Публикации. Основное содержание, результаты исследования и выводы отражены в 23публикациях, из них 7 – в изданиях, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ.ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫОбъекты и методы исследования. Объект исследования: высушенные плоды рябинычерноплодной (Aronia melanocarpa (M i с h x.) Elliot.) четырех сортов, заготовленные натерритории Воронежской области, Алтайского края, республики Адыгея и Калининградской8области, а также образцы свежезаготовленных плодов, хранившиеся в течение 3 и 6 месяцев(свежие – в замороженном состоянии при Т = - 18оС).Объекты заготавливались в сухую погоду в сентябре-октябре за один прием в течение 20132015 гг.Сушку образцов осуществляли в естественных условиях (воздушно-теневая сушка).Замораживание образцов сырья проводили согласно ГОСТ Р 53956-2010 «Фруктыбыстрозамороженные».
Образцы упаковывали в полиэтиленовые пакеты и хранили взамороженном состоянии в морозильной камере при Т = - 18оС.Сушку заготовленных образцов сырья проводили в сушильном шкафу при температуре 60-80оС. Высушенное сырье хранилось в бумажных пакетах в чистом, сухом, хорошо вентилируемомпомещении в соответствии с требованиями ГФ XIII, ОФС «Хранение лекарственногорастительного сырья».Изготовление водных извлечений из высушенных образцов сырья проводили согласнообщей фармакопейной статье ГФ XIII изд., «Настои и отвары». Водные извлечения из свежих изамороженных плодов получали из измельченного сырья в соотношении сырье : экстрагент1:10, расчет навески сырья и объема экстрагента проводили с учетом влажности исходногосырья и коэффициента водопоглощения.Настойки из высушенных плодов рябины черноплодной различных сортов получалиметодом дробной мацерации в соотношении сырье – экстрагент 1:5. В качестве экстрагента приизготовлении настойки из высушенного сырья использовали 70 % спирт.Жидкие экстракты из высушенных плодов аронии различных сортов изготавливали методомперколяции в соотношениее сырье – экстрагент 1:1.
Концентрацию спирта использовали такуюже, (подбирали так же), как и в настойках.Исследования качественного состава антоцианов, флавоноидов, дубильных веществ,органических кислот проводили методом тонкослойной хроматографии с использованиемсиликагеливых пластинок «Sorbifil ПТСХ-АФ-А-УФ» и«Sorbifil ПТСХ-АФ-А».Дляприготовления хроматографических систем использовали растворители марки «ч.» и «х.ч.».В качестве стандартных образцов в работе были использованы коммерческие доступныеиндивидуальные вещества: DL-Яблочная кислота ИМП, D (-) – Фруктоза ИМП, коричнаякислота Ч, кверцетин ЧДА, галловая кислота 99 % PA – ACS, рутин 97 %.Метод титриметрии применяли для количественного определения суммы органическихкислот (ГФ XI, ГФ XIII), дубильных веществ (ГФ XIII, «Определение содержания дубильныхвеществ в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах»).Спектрофотометрический метод использовали для определения суммы флавоноидов визучаемых объектах исследования.
Исследование проводили на спектрофотометре «Hitachi U-91900» ulvis spectrophotometer 200V модель 3JO-0003 (Hitachi High-Technologies CorporationTokyo Japan).Спектрофотометрическое определение дубильных веществ проводили в извлечении,полученномпутемэкстрагирования70%спиртомэтиловым.Выполнивсериюпоследовательных разведений, измеряли величину оптической плотности в кювете с толщинойслоя 10 мм при длине волны от 274,5 до 277,5нм относительно спирта этилового 70 %.Параллельно измеряли оптическую плотность раствора стандартного образца танина.Для определения содержания ряда индивидуальных органических кислот, а также дляопределения макроэлементов использовали метод капиллярного электрофореза на приборемарки «Капель-105/105М». Детектирование компонентов после предварительной подготовкипробы проводили по косвенному поглощению при длине волны 267нм.Количественное содержание пестицидов, радионуклидов и тяжелых металлов определяли спомощью атомно-абсорбционной спектроскопии «ААС Квант-2а».Для качественного и количественного анализа ряда индивидуальных антоциановыхсоединений использовали метод ВЭЖХ - МС с тройным квадропульным «Agilent 6410 series» cмасс-спектрометрическими детекторами.
В качестве подвижной фазы использовали : А – 1%водный раствор муравьиной кислоты (pH=2,13-2,17), В - ацетонитрил. Колонка PhenomenexLuna C18 250*4,6 mm 5 µ. Скорость потока растворителя 0,5 мл/мин. Температура колонки40оС, объем вводимой пробы 20 µл. Общее время анализа 60 минут.Результаты исследования подвергались статистической обработке согласно общей статье ГФXIII, объем выборки составил 6 образцов.Результаты исследования1. Сравнительное изучение микродиагностических признаков плодов рябинычерноплодной различных сортовВ связи с тем, что работ, касающихся изучения анатомических признаков высушенногосырья рябины черноплодной в литературе найдено не было, нами были подобраныоптимальные условия для проведения микродиагностического анализа высушенных плодоврябины черноплодной различных сортов.В виду того, что рекомендуемое кипячение лекарственного растительного сырья в 5 %растворе щелочи приводит к деформации некоторых диагностически значимых элементов, длясравнительного анализа микродиагностических признаков были получены водные извлечения.После обработки лекарственного растительного сырья водой полученные извлечения помещалина сутки в раствор хлоралгидрата и затем анализировали.10На основании проведенного микроскопического анализа было установлено, что всеисследуемые объекты имеют сходное анатомическое строение.Полученные данные представлены на примере плодов сорта «Мичуринская» (рис.1 итаблице 1):простой одноклеточный волосок (х400)каменистые клетки (х400)Мякоть с друзами оксалата кальция (х400)Клетки эпидермиса (х100) икаменистые клетки (х100)Рис.1.Анатомические признаки плодов аронии черноплодной сорта «Мичуринская»Таблица 1Сравнительная характеристика биометрических особенностей плодов аронии черноплоднойразличных сортовИсследуемыйпризнак«Мичуринская»Сорта аронии черноплодной«Алтайская«Вениса»«Викинг»11КлеткиэпидермисаОдноклеточныеволоски4,60х1,75мкмкрупноплодная»4,90х1,96мкм2,94х2,98мкм8,82х8,82 мкм117,60х2,94 мкм176,40х3,92мкм107,80х1,96мкмДрузы11,76 мкм11,76 мкм12,74мкм0,98-8,82 мкм8,82х8,82 мкмМонокристаллы 4,30х8,70 мкм4,90х9,80 мкм 3,70х8,50 мкмКаменистые13,72х4,9013,72х8,82 мкм13,72х8,82 мкм 15,68х5,88 мкмклетки14,54х11,78 мкмПроанализированы основные анатомические признаки высушенных плодов арониичерноплодной разной сортовой и климатической принадлежности.
Визуализированы основныедиагностические признаки.Выявлены отличия некоторых морфологических особенностей плодов аронии черноплоднойсорта «Мичуринская», «Алтайская крупноплодная», «Викинг», «Вениса».Показано, что вариабильности анатомических признаков плодов аронии в зависимости отсорта и климатического фактора подвергаются практически все микродиагностическиеэлементы.2. Сравнительное изучение биологически активных веществ плодов рябинычерноплодной различных сортовВ соответствии с поставленными задачами было проведено сравнительное изучение составаи содержания БАВ (антоцианов, флавоноидов, дубильных веществ и органических кислот) всвежих и высушенных плодах аронии.Для качественного анализа БАВ исследуемых плодов был использован метод тонкослойнойхроматографии.Предварительнобылиподобраныоптимальныеусловиядляхроматографическогоразделения основных групп биологически активных веществ плодов аронии: антоциановыхсоединений (н-бутанол- кислота уксусная ледяная – вода (4:1:1), флавоноидов (этилацетат –кислота муравьиная – вода (10:3:2), дубильных веществ (этилацетат- кислота муравьиная – вода(8:1:2) и органических кислот (этилацетат – кислота уксусная – кислота муравьиная – вода(100:11:11:25).Лекарственноерастительноесырьеизмельчалидооптимального,установленного экспериментально, размера частиц 0,5-1,0 мм, соотношение сырье: экстрагентпри извлечении БАВ 1:10.Полученные данные представлены в таблице 2:Таблица 2Результаты качественного анализа групп БАВ высушенных плодов аронии черноплоднойметодом ТСХАнализируемыеРезультаты качественного анализа групп БАВ методом тонкослойной12сорта аронииАнтоцианы«Мичуринская»0,14±0,020,27±0,020,43±0,020,51±0,020,59±0,020,85±0,02«Викинг»0,43±0,020,51±0,020,59±0,020,85±0,02«Вениса»0,43±0,020,51±0,020,59±0,020,85±0,02«Алтайскаякрупноплодная»0,43±0,020,51±0,020,59±0,020,85±0,02хроматографии, значение Rf±0,02ФлавоноидыДубильныеОрганическиевеществакислоты0,23±0,020,89±0,02 (галловая 0,28±0,02 (кислота(рутин)кислота)лимонная)0,96±0,020,54±0,02 (пятно не 0,56±0,02 (кислота(кверцетин)идентифицировано) аскорбиновая)0,53±0,02(лютеолин-7гликозид)0,23±0,020,89±0,02 (галловая 0,14±0,02 (кислота(рутин)кислота)щавелевая)0,96±0,020,54±0,02 (пятно не 0,28±0,02 (кислота(кверцетин)идентифицировано) лимонная)0,53±0,020,56±0,02 (кислота(лютеолин-7аскорбиновая)гликозид)0,23±0,020,89±0,02 (галловая 0,14±0,02 (кислота(рутин)кислота)щавелевая)0,96±0,020,54±0,02 (пятно не 0,28±0,02 (кислота(кверцетин)идентифицировано) лимонная)0,53±0,020,56±0,02 (кислота(лютеолин-7аскорбиновая)гликозид)0,23±0,020,89±0,02 (галловая 0,14±0,02 (кислота(рутин)кислота)щавелевая)0,96±0,020,54±0,02 (пятно не 0,28±0,02 (кислота(кверцетин)идентифицировано) лимонная)0,53±0,020,56±0,02 (кислота(лютеолин-7аскорбиновая)гликозид)На основании данных, представленных в таблице 2, можно сделать заключение о сходномкачественном составе флавоноидов и дубильных веществ для всех исследуемых сортов.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
