Диссертация (1140954), страница 11
Текст из файла (страница 11)
DeAngelo и соавт.показали низкую эффективность этих препаратов. Наши исследования показали75высокий уровень снижения экспрессии EGFR под действием CXCL12 в МНК отпациентов с ОМЛ до химиотерапии через 10 минут от начала эксперимента, послепроведения химиотерапии экспрессия вышеуказанного рецептора выше поддействием CXCL12 выше чем в контроле. Снижение экспрессии EGFR поддействием CXCL12 является одной из возможных причин неотвечаемостипациентов с ОМЛ на ингибиторы EGFR.Динамика экспрессии TLR9 под действием в МНК пациентов с ОМЛ дохимиотерапии соответствует динамики экспрессии в МНК здоровых доноров.76ЗАКЛЮЧЕНИЕНа сегодняшний день остро стоит вопрос о лечении онкологическихзаболеваний, в том числе и лейкозов.
Роль факторов врожденного иммунитета вопухолевомпроцессеактивноизучаетсяпоследнеедесятилетие,иизмногочисленных исследований показано, что эта роль является немаловажной.Немалое количество онкологических заболеваний связано с инфекцией илис хроническим воспалительным процессом, вызванным инфекцией. Большинствоинфекционных агентов является для организма PAMPs, которые распознаютсяTLRs, которые относятся к фактором врожденного иммунитета.Существует значительное количество работ, направленных на изучениевлияния TLRs на онкогенез, результаты которых достаточно неоднозначны:показана как отрицательная так и положительная роли рецепторов в развитииопухолевого процесса.Известно, что отрицательная роль связана с активацией антиапоптотическихсигнальныхпутей,атакжеактивнойвыработкойхемокинов,которыеспособствуют миграции опухолевых клеток и может приводить к иммуннойтолерантности.Таким образом, TLRs и хемокины, а так же их рецепторы, активноучаствуют в онкогенезе, при том, что окончательная роль выяснена не доконца.Касаясь особой группы онкологических заболеваний, таких как лейкозы,при анализе данных исследований последних десятилетий, было выявлено, чтоотносительно них роль факторов врожденного иммунитета в своей совокупностиизучена в меньшем объеме, чем в других группах онкологических заболеваний.В связи с вышесказанным, целью настоящего исследования стало изучениевлияния факторов врожденного иммунитета, таких как CXCL12 и лиганда TLR9на хемотаксис опухолевых клеток, а также экспрессию CXCL12, EGFFR, TLR9,CCR4, так как указанные факторы предположительно значимо влияют нахемотаксис опухолевых клеток, в дальнейшем на метастазирование, но при этомих взаимовлияние друг на друга не было изучено.77В связи с этим был проведен комплексный подход.
Нами были выбраныопухолевые линии Reh и К562, набраны пациенты с миеломонобластнымлейкозом до и после химиотерапии, здоровые доноры.На первом этапе изучался хемотаксис опухолевых линий К562 и Reh понаправлению к DNA_lig, который является лигандом TLR9, и по направлению кCXCL12 с использованием камеры Бойдена с разными размерами пор (5 и 8 мкм).Было выявлено, что лиганд TLR9 значимо снижает хемотаксис клеток обеихлиний, в то время как CXCL12 усиливает хемотаксис Reh и К562.На втором этапе исследования хемотаксиса установлено, что вводимыйизвне CXCL12 in vitro снижает хемотаксис МНК, выделенных от пациентов сОМЛ (М4) до химиотерапии, после воздействия химиотерапиии хемотаксисчастично восстанавливается, однако не до значений хемотаксиса МНК,выделенных по от здоровых доноров.На третьем этапе оценивалась экспрессия таких факторов врожденногоиммунитета как CCR4, CXCL12, TLR9, EGFR в мигрировавших клетках МНК отпациентов с ОМЛ до химиотерапии, после химиотерапии и здоровых доноров понаправлению к CXCL12.По результатам третьего этапа исследования было выявлено, что в МНКпациентов в ОМЛ экспрессия CXCL12 конститутивно высокая, что объясняетнизкую миграционную активность при введении извне CXCL12 в связи сдесенсибилизацией рецепторов и неотвечаемости на данный хемокин.
Послевоздействия химиотерапии уровень конститутивной экспрессии CXCL12 значимоснижался, что указывает на высокую значимость проведенной химиотерапии вхемотаксисе опухолевых клеток. Также было выявлено, что экспрессия CCR4увеличивается под действием СXCL12 как в МНК здоровых пациентов, так и вМНК пациентов от пациентов с ОМЛ до и после химиотерапии.
Полученныеданные указывают на активацию гетерологичных рецепторов как в здоровыхклетка, так и опухолевых. Проведенный анализ экспрессии EGFR в МНКпациентов с ОМЛ до химиотерапии показал, что экспрессия данного рецепторапод действием CXCL12 значимо снижается относительно контроля, в то времякак в МНК от пациентов с ОМЛ после терапии прямо противоположная картина,78что указывает на сильное подавление данным хемокином на экспрессию EGFR вклетках лейкоза. Что касается экспрессии TLR9 под действием CXCL12, тозначимых отличий между экспрессией в МНК здоровых доноров и МНК отпациентов с ОМЛ не обнаружено, в то время как в МНК от пациентов с ОМЛ дохимиотерапии результаты недостоверны.По данным литературы проведены многочисленные исследования, которыеуказывают на возможность использования препаратов ингибиторов рецепторовCXCL12 и EGFR для достижения снижения метастазирования.
Если на настоящиймомент достаточно исследований, направленных на ингибирование рецепторовCXCL12, которые рассматривают данные препараты как один из дополнительныхэтапов лечения, то, к сожалению применение ингибиторов EGFR до сих пор носитнеоднозначный характер. И нами продемонстрирован один механизм сниженияотвечаемости на ингибиторы EGFR - влияние CXCL12 снижает экспрессиюданного рецептора. Также нами показано ингибирование хемотаксиса путемиспользования лиганда TLR9 в клеточных опухолевых линиях, что также можетиспользоваться как дополнительная мишень воздействия.Из вышесказанного следует, что хемотаксис лейкозных клеток не такоднозначен, как считалось еще пять лет назад. Существуют дополнительные путирегулировкиданногопроцесса,такиекакперекрестнаядесенситизациярецепторов, что может приводить к нечувствительности данных клеток такимиметодамилечениякакприменениепептидныхингибитороврецепторовхемотаксиса, в частности CXCR4 и EGFR.
Вследствие этого перед применениемдополнительных методов лечением, направленных на блокировку рецепторовврожденного иммунитета, необходимо проводить персонализированный подход ккаждому пациенту с исследованием уровня экспрессии данных рецепторов ихемокина CXCL12.79ВЫВОДЫ1.Создана модель для исследования хемотаксиса, которая позволяет оценить ивыявить индивидуальные особенности миграционной активности как клеточныхлиний, так и опухолевых клеток.2.Установлено разнонаправленное действие CXCL12 и лиганда TLR9 на хемотаксисклеток различных опухолевых культур (К562 и Reh), так CXCL12 активировалхемотаксис клеточных линий, в то время как лиганд TLR9 приводил кингибированию миграционной активности.
Таким образом, полученная системаможет быть использована для оценки препаратов, влияющих на хемотаксисопухолевых клеток.3.Показан индуцированный хемотаксис мононуклеарных клеток здоровых доноровотносительно лиганда TLR9 и CXCL12 в 1,5 и более раз в динамике.4.Определено снижение хемотаксиса МНК, выделенных от пациентов с ОМЛ доначала химиотерапии, по направлению к CXCL12, при этом миграция к лигандуTLR9 – не отличалась относительно контроля. После проводимой терапиидинамика миграции МНК пациентов с острым миелобластным лейкозомпрактически не отличалась от показателей в группе здоровых доноров.5.В спонтанно мигрировавших мононуклеарных клеток, выделенных от пациентов сОМЛ(М4)показанапрямаякорреляционнаязависимостьуменьшенияхемотаксиса от экспрессии гена CXCL12, что говорит о потенциальной ролиэтого фактора врожденного иммунитета в качестве прогностического маркераэффективности терапии.6.
Показаныувеличение экспрессии гена гетерологичного рецептора CCR4 иснижение экспрессии гена EGFR в МНК пациентов с ОМЛ (М4) дохимиотерапии под воздействием СXCL12, при этом следует отметить, что послепроводимой терапии экспрессионные профили меняют свое направление, чтокоррелировало с эффективностью проводимого лечения.80СПИСОК СОКРАЩЕНИЙОМЛ – острый миелоидный лейкозМДС – миелодиспластический синдромВ - ХЛЛ – В-лимфоцитарный хронический лейкозПРГШ – плоскослеточный рак головы и шеиT-ОЛЛ Т-клеточный острый лимфобластный лейкозAOM/DSS – azoxymethane / dextran sulfate sodiumCAF - cancer-associated fibroblastCLA - cutaneous lymphocyte antigenDAMPs – damage-associated molecular patternsDCs – dendritic cells (дендритные клетки)EGFR – epidermal growth factor receptorERK1/2 – еxtracellular signal-regulated kinase 1/2CpG-ODN – oligodeoxynucleotide agonistsHSPC – hematopoietic stem and progenitor cellsJAK/STAT – Janus kinase/signal transducers and activators of transcriptionPAMPs – pathogen-associated molecular patternTLRs – Toll-like receptorsVEGF –vascular endothelial growth factorIL-1β – Interleukin 1 betaIRAK –interleukin-1 receptor-associated kinasesiRNA – small interfering RNATIR –The Toll/interleukin-1 receptor81СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ1.Гланц Стентон.
Медико-биологическая статистика. – М.: Практика, 1998. –С. 459.2.Ковальчук Л. В., Игнатьева Г. А., Ганковская Л. В. Иммунология:практикум: учеб. пособие. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010. – С. 176.3.Льюин Б. Клетки. – М.: БИНОМ. Лаборат. Знаний, 2011. – С. 951.4.Сташкевич, Д. С., Филиппова Ю. Ю., Бурмистрова А. Л. Актуальныевопросы иммунологии: система цитокинов, биологическое значение,генетический полиморфизм, методы определения: учеб.
пособие. –Челябинск: Цицеро. – С. 82.5.Фрешни, Р.Я. Культура животных клеток: практическое руководство –М.:БИНОМ. Лаборат. Знаний, 2010 – С. 691.6.Ярилин, А.А. Иммунология. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010 – С. 752.7.Airoldi I. CXCR5 may be involved in the attraction of human metastaticneuroblastoma cells to the bone marrow / I. Airoldi, C. Cocco, F.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
