Диссертация (1139740), страница 11
Текст из файла (страница 11)
При этом чаще всего определяется аплазия ушных раковин иатрезиянаружныхслуховыхпроходов,глухонемота.Множественныеврожденные пороки развития составляют характерную особенность пациентов срасщелиной верхней губы и неба. По этой причине расщелина верхней губы инебапредставляетодинизосновныхсимптомовбольшинствасимптомокомплексов [24,54,118].ИзменениесопутствуютактивностимногимММПзаболеваниям(какувеличение,человекатак(опухоли,иснижение)фиброзирубщиезаболевания сердца, легких печени, почек, артрит, язвенная болезнь желудка ит.д.) [199].В развитии неба ММ2, ММП3 играют важную роль. Возрастание ММП-2обнаружил Brown et al. (2002) с помощью иммунофермнетного анализа напротяжении формирования неба у мышей [139].Во время эмбрионального развития ММП и их ингибиторы широкоэкспрессируются.
Эти протеиназы ответственные за обновление внеклеточнойматрицы и могут быть вовлечены в процесс образования расщелины неба.Фермент ММП2, так же известный как желатиназа А, достоверно известно, что73способствует развитию неба у мышей, аномальное функционирование которогоможет привести к пороку развития, такому как расщелина верхней губы и неба[195].Были проведены ряд исследований о нарушениях в структуре генетическогокода матриксных металлопротеиназ. Полиморфизм в ММП3 (rs522616) и ТИМП2(rs8179096) показал значительною ассоциацию с различными видами расщелины(все расщелины, расщелина губы/неба, и расщелина неба).
(P≤0.002). Анализвзаимодействия ген-ген предполагает, что ММП3 и ТИМП2 может интерактивноспособствовать развитию фенотипа с расщелиной неба [186].Далее изучили функциональное значение этих полиморфизмов. Былобнаружен специфический ДНК-белковый комплекс для ММП3 rs522616 А,данная аллель сама по себе показала большую активность промотора, чем Gаллели. Тем не менее, влияние rs522616 в конечном счете регулируется на фонеrs3025058 аллелью. Для ТИМП2 rs8179096, аллель Т показала 2,5-кратноеувеличение активности промотора по сравнению с аллелью С, в то время как обеC и T аллели были найдены связывающие ядерный фактор каппа B. Результатыобеспечивают новые доказательства, что полиморфизм промотора в ММП3 иТИМП2 функциональны и могут повлиять на транскрипцию гена с возможнымвоздействием на черепно-лицевое развитие, ведущей к развитию расщелиныверхней губы и неба [205].Нами была определена взаимосвязь между ММП3 в мягких тканях в зонепатологии с мягкими тканями из очага без патологии.
Мы установилидостоверное увеличение экспрессии ММП3, в зоне патологии по сравнению сзоной без патологии. Следует добавить, что уровень ММП3 был наивысшим придвусторонней расщелине губы и неба.В наше исследование включены 84 пациента с разными типами расщелиныгубы и неба такими как, расщелина губы, расщелина губы и неба односторонняя,расщелина неба частичная, расщелина губы и неба двусторонняя.
Дляиммуноферметного анализа пациенты были разделены на 4 группы в зависимостиот нозологии.74С двусторонней расщелиной губы и неба нами обследовано 35 пациентов, содносторонней расщелиной губы и неба обследовано 34 пациента, с частичнойрасщелиной неба 7 пациентов и с частичной расщелиной губы обследовано 8пациентов.По возрасту и полу пациенты различались – мальчиков было 49 (58,3%), девочек35(42,7%), а возраст составлял от 3 дней до 9 лет. Уранопластика была проведенау 47 пациентов 56%, а хейлопластика была проведена у 37 пациентов 44%.Всем пациентам во время хирургического вмешательства была проведенабиопсия мягких тканей, окружающих зону патологии и мягких тканеймаксимально отдаленных от зоны патологии в пределах операционного поля.Контролем послужила биопсия мягких тканей, взятая из зоны максимальноудаленной от зоны патологии.
Повышение или снижение оценивалось присравнительном анализе данных полученных в результате иммуноферментногоанализа в обоих случаях при всех рассматриваемых видах патологии.Все пациенты были обследованы и прооперированы нами в «Научном ЦентреЗдоровья Детей» РАМН.Содержание ММП2, ММП3, ТИМП2, TGFβ2 определяли современнымивысокочувствительными иммуноферментными методами с помощью реактивовведущих зарубежных и отечественных фирм (см. главу 2 «Материалы и методы»).Полученные результаты анализировали с помощью однофакторного имногофакторного метода. Согласно нашим данным повышение уровня ММП2,ММП3, ТИМП2, TGFβ2 с одинаковой частотой встречалось при всех типахрассматриваемой нозологии, причем среднее значение были достоверно выше вгруппе с двусторонней расщелиной губы и неба и составили ММ2 5,09 нг/мл,ММП3 3,37 нг/мл, ТИМП2 8,098 нг/мл, TGFβ2 20,12 пг/мл.
Высокий уровеньММП2, ММП3, ТИМП2, TGFβ2 встречался так же при расщелине губычастичной, расщелине неба частичной и расщелине неба односторонней. Дляодносторонней ММП3 3 нг/мл, ТИМП2 5,475 нг/мл, ММП2 3,95 нг/мл, TGF-Β213,69 пг/мл. Для частичной расщелины неба ММП3 1,49 нг/мл, ТИМП2 4,04175нг/мл, ММП2 1,4 нг/мл TGF-Β2 8,084 пг/мл. Для частичной расщелины губыММП3 2 нг/мл, ТИМП2 7,021 нг/мл , ММП2 1,01 нг/мл , TGF-Β2 4,625 пг/мл.Установлено, что показатели содержания ММП2, ММП3, ТИМП2, TGFβ2 вобразце патологии не связаны друг с другом, соответственно данные показателине связаны и в мягких тканях получены из зоны вне очага патологии.Установлена достоверная корреляция между отношением ММП2, ММП3,ТИМП2, TGFβ2 в мягких тканях из очага патологии к отношению в мягких тканяхвне очага патологии.Нами было установлено, что нет достоверной связи между полом,возрастом, весом при рождении, весом на момент операции, родами, характеромоперативного вмешательства.Клетки соединительной ткани, содержащие ТИМП-2 были обнаружен вбольшем количестве в собственной пластинке слизистой оболочке полости рта это доказывает снижение уровня местного апоптоза у пациентов с ВРН.
Заметнаяэкспрессия ММП-2 в пораженной расщелиной мягкой ткани показывает навозможное увеличение ремоделирования ткани [245].В исследовании мы также подтвердили повышенную экспрессию ТИМП 2 вмягких тканях из зоны расщелины по сравнению с мягкими тканями вне зоныпатологии, при том мы определили, что максимальный выброс ТИМП 2отмечается у пациентов с двусторонней расщелиной губы неба. Кроме того, мыопределили кратное увеличение выброса ММП2.В своем исследовании Blaha K1, Borsky J и соавт. (2013) изучили изменениеуровня ММП9 и ТИМП1 в тканях, взятых во время операции, проведенной ввозрасте 1 недели и 2-4 месяцев. Значительного изменения уровня ММП9 не былообнаружено, напротив уровень ТИМП1 был значительно выше в тканях, взятыхво время операции, проведенной в возрасте 1 недели чем в возрасте 2-4 месяцев.В исследовании Nikopensius T, Kempa I.
(2011) получены результаты,доказывающие причастность TGF1 в возникновении расщелине верхней губыи/или неба поддерживаемые ТИМП2 и WNT9B, как принципиально новыйпровоцирующийрасщелиневерхнейгубыи/илинеба.Такжебыла76воспроизведена в клинических исследованиях значительная связь междувариантами в или близко к FOXE1 и расщелине верхней губы и/или неба.Результаты исследования Gagliano N1, Carinci F. et al.
(2010) показали, чтопри расщелине губы/ неба фенотип фибробластов характеризуется тенденцией кинтерстициальномумодификаций,такихотложениюкакколлагенаснижениеиз-задеградациипосттрансляционныхколлагенаматрикснымиметаллопротеиназами и увеличение поперечно-связанного коллагена [161].В физиологических условиях семейство металлопротеиназ синтезируется как пре- белки, и секретируются как проферменты в очень незначительных количествах[149].Синтез и секреция ММП находится под контролем таких факторов, какинтегрины действующие на поверхности клетки, цитокины TGFβ1, TGFβ2 и рядахимических соединений, таких как форболовы эфиры, липополисахариды (LPS),колхицин, простогладин Е. Однако в основном они секретируются под действиемпровоспалительных цитокинов, а главными источниками их продукции считаютсяактивированные макрофаги, нейтрофилы, фибробласты [188].TGFβ2–этомультифункциональныйцитокин,впервыеидентифицированный при выделении из тромбоцитов.
Свое название TGF-βполучил благодаря способности стимулировать рост клеток и вызывать ихтрансформацию in vitro. TGF-β является важным регулятором клеточнойпролиферации, дифференцировки, апоптоза, иммунного ответа, ремоделированияЭЦМ [138].В исследовании мы определили достоверное повышения уровня TGFβ2наряду с повышением с ММП2, ММП3, ТИМП2. Уровень TGFβ2 определялсянаиболее высоким, у пациентов с двусторонней расщелиной губы и неба, так жеуровень TGFβ2 был повышен при расщелине губы, расщелине губы и небаодносторонней и срединной.Выделениеданныхферментовпозволилонампредположить,чтоэкспрессия связана с патологическими процессами, протекающими в зонерасщелины такими как воспаление.
Наше предположение подтверждается77данными Li J., Scwimmbeck P.L. et al. (2002) в которых указано, что секрецияММПнаходитсяподконтролем цитокинов,активированныемакрофагинейтрофилы и фибробласты.ММП9 Baliver et al. 2001 обнаружил выборочное выделение ММП-9 в зоныоссификации по срединной линии развивающейся верхней челюсти [133].Тканевой ингибитор матриксных металлопротеиназ (ТИМП) – способенактивировать матриксные металлопротеиназы, активность клеточного роста иангиогенез. ТИМП может так же содействовать активности клеточного роста ирегулировать клеточный апоптоз. ТИМП-2 принимает участие в активации проММП-2 и стимулирует пролиферацию пульпы зуба, фибробластов – таких какклетки, фибробласты десны, а также эпителиальных клеток. Кроме того, ТИМП-1и ТИМП-2 так же обладают замедляющим апоптоз действием [60].Letra и соавт.
(2012) обнаружили связь между геном ТИМП-2 и расщелиной губыи неба [205].ТИМП многофункциональные протеины, физиологические ингибиторыММП, широко распространенные в тканях организма. Тканевое ремоделированиеважный процесс, происходящий на протяжении эмбриогенеза. Баланс междуактивациейММПиТИМПконтролируетстепеньремоделированияэкстрацеллюлярного матрикса [205].В исследовании было доказано, что изменения вММП3 можетспособствовать развитию несиндромальной расщелины губы и/или неба и далееподдерживает участие ТИМП2 как гена влияющего на развитие расщелины губыи /или неба.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
