Biokhimia_T3_Strayer_L_1984 (1123304), страница 62
Текст из файла (страница 62)
On the antibacterial of action of b-lactam antibiotics, Proc.action of cultures of a penicillinium, with Nat. Acad. Sci., 74, 5239-5243.special reference to their use in theisolation of B. influenzae, Brit. J. Exp. Сигнальные последовательности и лоPathol., 10, 226-236.кализация белковChain E., 1971.
Thirty years of penicillin Chang C.N., Model P., Blobel G., 1979.therapy, Proc. Roy. Soc. London (B), Membrane biogenesis: cotranslational179, 293-319.integration of the bacteriophage f1 coatStrominger J.L.,Blumberg P.M., protein into an Escherichia coliSuginaka H., Umbreit J., Wickus G.G., membrane fraction, Proc. Nat. Acad.1971. How penicillin kills bacteria: Sci., 75, 4891-4895.progress and problems, Proc. Roy. Soc.
Inouye S., Wang S., Sekizawa J., HalejLondon (B), 179, 369-383.oua S., Inouye M., 1977. Amino acidYocum R.R., Waxman D.J., Rasmussen sequence for the peptide extension on theJ.R.,Strominger J.L.,1979. prolipoprotein of the Escherichia coliMechanisms of penicillin action: outer membrane, Proc. Nat. Acad. Sci.,penicillin and substrate bind covalently 74, 1004-1008.to the same active serine in two bacterial Bedouelle H., Bassford P.J., Fowler A.V., Zabin I., Beckwith J., Hofnung M.,1980. Mutations which alter the functionof the signal sequence of the maltosebinding protein of Escherichia coli,Nature, 285, 78-81.Emr S., Hedgpeth J., Clement J.-M.,Silhavy T.J.,Hofnung M.,1980.Sequence analysis of mutations thatprevent export of λ receptor, anEscherichia coli outer membraneprotein, Nature, 285, 82-91.Bassford P.,Beckwith J.,1979.Escherichia coli mutants accumulatingthe precursor of a secreted protein in thecytoplasm, Nature, 277, 538-541.Emr S.D., Schwartz M., Silhary T.J.,1978.
Mutations altering the cellularlocalization of the phage λ receptor, anEscherichia coli outer membraneprotein, Proc. Nat. Acad. Sci., 75,5802-5806.Lin J.J.C., Kanazawa H., Ozols J.,Wu H.C., 1978. An Escherichia colimutant with an amino acid alterationwithin the signal sequence of outermembrane prolipoprotein, Proc. Nat.Acad.
Sci., 75, 4891-4895.ГЛАВА 33ИммуноглобулиныК началу этого столетия были выявленымногие важнейшие свойства иммунного ответа. Однако представление о защитных механизмах возникло гораздо раньше, о чемсвидетельствуют записи Фукидида о чуме,поразившей Афины в 430 до н.э.:«Пусть другие рассуждают о ее происхождении и причинах, вызвавших ее появление, если только для такого страшного бедствия могут быть найдены достаточные причины... что до меня, я простоопишу ее природу и объясню, по какимсимптомам ее можно распознать, еслиона когда-нибудь разразится снова. Темлучше я смогу это сделать, что болел сами видел, как развивалась болезнь у других...Именно у тех, кто выздоровел послеэтой болезни, больные и умирающие вызывали особенное сочувствие. Пережившие болезнь знали по своему опыту, чтоэто такое, и не боялись более за себя, ибоодин и тот же человек никогда не заболевал вторично или по крайней мере не умирал при этом.
И таких людей не толькопоздравляли другие, но и сами они в радости преисполнялись тщетной надеждой,что отныне они спасены от какой-бы тони было болезни».Называя надежду на спасение тщетной,Фукидид явно имел в виду специфичностьзащиты, свойственную иммунной системе.сродством к стимулировавшему его синтезчужеродному веществу. Антиген (или иммуноген) - чужеродная макромолекула, способная вызвать образование антител.
Эффективными антигенами обычно служатбелки, полисахариды и нуклеиновые кислоты. Антитела проявляют специфичностьв отношении определенного участка молекулы антигена; этот участок называют антигенной детерминантой.Чужеродные молекулы малого размеране вызывают образования антител. Однакоесли они присоединены к макромолекулам,то может иметь место синтез специфическихантител. В этом случае макромолекула выполняет функцию носителя присоединеннойхимической группы, называемой гаптеннойдетерминантой.
Сама по себе чужероднаямолекула малого размера называется гаптеном.33.1. Основные определенияАнтитела (или иммуноглобулины) - это белки, синтезируемые в организме животногов ответ на присутствие чужеродного вещества. Антитело обладает специфическим234Часть V.Молекулярная физиологияРис. 33.1.Электронная микрофотография кристалла молекул антитела. [Labaw L. W., Davies D. R.,J. Ultrastruct. Res., 40, 349(1972).]Рис. 33.2.Электронная микрофотография В-лимфоцита.
(ПечатаетсяслюбезногоразрешенияL. Mercer.)Рис. 33.3.Электронная микрофотография плазматической клетки.Виден очень хорошо развитыйшероховатый эндоплазматический ретикулум. (ПечатаетсяслюбезногоразрешенияL. Mercer.)Рис. 33.4.Динитрофенильное производное бычьего сывороточногоальбумина(ДНФ-БСА) - эффективного антигена.Молекулы антител секретируются плазматическими клетками, образовавшимисяиз В-лимфоцитов (рис. 33.2). Другой класслимфоцитов, а именно Т-лимфоциты, обусловливает клеточный иммунный ответ, который дополняет гуморальный ответ, выражающийся в появлении растворимых антител. В этой главе мы рассмотрим толькогуморальный ответ, поскольку его молекулярные основы изучены значительно лучше.Однако нужно подчеркнуть, что молекулыантител - всего лишь один из компонентовбольшой, согласованно функционирующейсистемы молекул и клеток, распознающихи удаляющих чужеродные вещества.33.2.
Синтез специфических антителв ответ на антигенЖивотные способны синтезировать специфические антитела против практически любой химической группы. Особенно эффективно стимулирует образование антителдинитрофенол (ДНФ), и потому его широкоиспользуют в качестве гаптенной детерминанты. Антитела против ДНФ получаютследующим образом.1. ДНФ-группы присоединяют ковалентно к белку-носителю, например к альбуминусыворотки быка (БСА), используя взаимодействие фтординитробензола с боковымицепями лизина или других нуклеофильныхостатков белка (рис. 33.4).2.
ДНФ-БСА вводят кролику в качествеиммуногена (антигена). Спустя несколько33. Иммуноглобулины235Рис. 33.5.Кинетика появления иммуноглобулинов М и G (IgM и IgG)в сыворотке после иммунизации.дней содержание антител против ДНФ-альбумина начинает возрастать (рис. 33.5). Этипервыми появляющиеся антитела принадлежат к классу иммуноглобулинов М (IgM)массой около 1000 кДа.3. Спустя примерно 10 дней после введения антигена количество иммуноглобулинаМ начинает уменьшаться, но одновременнорастет содержание антител другого класса,а именно иммуноглобулинов G (IgG) массойоколо 150 кДа.4.
Спустя примерно 3 недели после введения антигена содержание анти-ДНФ-антител класса иммуноглобулинов G достигаетплато. Введение в этот период новой порцииДНФ-БСА вызывает дальнейшее увеличение содержания антител против ДНФ в сыворотке кролика.5. Собирают кровь иммунизированногокролика и получают сыворотку (называемую антисывороткой, поскольку она получена после иммунизации). Содержание антител против ДНФ в этой сыворотке можетдостигать 1 мг антител в расчете на 1 млсыворотки.
ДНФ исключительно эффективен как агент, стимулирующий образованиебольших количеств специфических антител.Почти все эти антитела принадлежат к классу иммуноглобулинов G - основному классуиммуноглобулинов сыворотки.6. Следующий этап - отделение антителпротив ДНФ от антител с другой специфичностью и от прочих сывороточных белков.Антитела против ДНФ отличаются отостальных белков антисыворотки очень вы236Часть V.Молекулярная физиологиясоким сродством к ДНФ. Следовательно, ихможно выделить методом аффинной хроматографии. Для этого готовят колонку, содержащую динитрофенильные группы, ковалентно связанные с нерастворимым углеводным носителем.
На колонку наносятантисыворотку и затем промывают буферным раствором. Большая часть белковантисыворотки проходит сквозь колонку,поскольку их сродство как к ДНФ-группам,так и к углеводному носителю ничтожномало или вовсе отсутствует. В то же времяантитела против ДНФ прочно связываютсяна колонке. Далее эти антитела снимаютс колонки. Для этого на колонку наносятДНФ в высокой концентрации: добавленный ДНФ связывается с антителами,вытесняя их из связи с динитрофенильнымигруппами нерастворимого углеводного носителя. Растворимый комплекс, состоящийиз ДНФ и антител против ДНФ, выходитс колонки. Далее ДНФ удаляют путем диализа или ионно-обменной хроматографии,и в результате остается препарат очищенных антител.33.3.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
