Курс лекций в ворде (1121143), страница 13

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 13)

В ряде случаев индукционные процессы следуют один за другим, образуя как бы цепи индукций. Например, энтодерма дорсальной стороны зародыша индуцирует из прилежащего к ней района крыши бластоцеля хордомезодерму; последняя индуцирует из покровной эктодермы центральную нервную систему, а выделившийся как ее часть промежуточный мозг — хрусталик; продолговатый мозг индуцирует слуховой пузырек, а последний — слуховую капсулу.

Но далеко не все этапы органогенезов связаны с индукциями. Например, несмотря на многочисленные поиски, так и не обнаружен индуктор закладки парных конечностей позвоночных в их нормальном развитии, а в экспериментальных условиях в роли индуктора выступает, совершенно чужеродная закладка — слуховой пузырек.

Практически ни в одном случае структура индуцируемой закладки не задается индуктором: она зависит в первую очередь от свойств индуцируемой ткани. Индукторы, как правило, — только пусковые, или «снимающие запрет», факторы («индукция по умолчанию»).

Механизмы индукции.

Несмотря на утверждения ряда исследователей, что индукция хрусталика глазной чашей определяется некоторым химическим фактором, выделяемым чашей, такой фактор с достоверностью не обнаружен. В случае индукции метанефрогенной мезенхимы чужеродным индуктором — нервной трубкой — показано, что для успешного результата необходимо наличие контактов между клеточными отростками индуктора и реагирующей ткани. Таким образом, в данном случае индукция осуществляется благодаря контактным межклеточным взаимодействиям.

Наиболее определенные результаты получены для мезенхимно-эпителиальных взаимодействий при развитии желез энтодермального происхождения. Здесь воздействие мезенхимы на эпителий осуществляется через посредство компонентов внеклеточного матрикса, в первую очередь коллагена, продуцируемого мезенхимными клетками. Именно выделяемый ими и подстилающий эпителий коллаген повышает пролиферативную активность эпителиальных клеток и сообщает эпителию способность ветвиться.

Возможно, что перестройки внеклеточного матрикса играют ключевую роль и в других индукционных процессах. Так, индукция мочевых канальцев в метанефрогенной мезенхиме связана с деградацией присутствующего в ней ранее коллагена II типа и с последующим синтезом другого, IV типа коллагена. Одна и та же стволовая клетка может дать начало соединительной ткани при добавлении в среду фибронектина и коллагена 1типа, хрящу — при добавлении коллагена II типа и эпителию — при добавлении коллагена IV типа. Возможно, что и индукция плакод органов чувств в покровной эктодерме связана с такими перестройками подстилающего их матрикса, в результате которых данные клетки перестают распластываться вдоль поверхности, как обычный покровный эпителий, и приобретают свойство поляризоваться.

9. Дифференциация клеток

Дифференцировка клеток как синтез специфических белков и сборка надмолекулярных структур. Дифференцирующая роль движений внутриклеточных компонентов. Дифференцировка клеточных мембран.

Современные представления о механизмах регуляции синтезов специфических белков.

Возможные уровни регуляции: уровень соматических мутаций, транскрипционный, трансляционный, посттрансляционный. Что дают опыты по пересадкам клеточных ядер для суждения об уровнях регуляции?

Дифференциальная экспрессия генов, ее основные пространственные закономерности у зародышей насекомых и позвоночных. Химические и физические регуляторы клеточной дифференцировки.

Каждый эмбриональный зачаток дает различные типы дифференцированных клеток. По современной номенклатуре в организме высших животных и человека насчитывается около 210 различных типов дифференцированных клеток, из которых более 60% возникают из различных эмбриональных эпителиев. Однако с учетом клонов В-лимфоцитов общее количество типов дифференцированных клеток в организме высших животных и человека должно превышать миллион.

Клеточная дифференцировка основана на синтезе специфических белков, т.е. клетки, дифференцированные в разных направлениях, отличаются друг от друга хотя бы по одному специфическому белку. Специфичность здесь понимается в совершенно определенном химическом смысле как специфичность последовательности аминокислот (первичной структуры) белковой молекулы. Обычно постулируется, что вторичная, третичная и четвертичная (если она есть) структуры белковой молекулы однозначно выводятся из первичной.

Специфичные белки иногда еще называют «белками роскоши», поскольку они требуются не для самого существования клетки, а связаны с выполнением ею определенной специализированной функции. Перечислим некоторые типы специфических белков («белков роскоши»), которые синтезируются в дифференцированных клетках: фибробласты синтезируют коллаген; клетки покровного эпителия — кератин; миобласты — миозин; фоторецепторы — опсин («зрительный белок»); эритроидные клетки (впоследствии превращающиеся в эритроциты) — гемоглобин; клетки эпителия пищеварительного тракта —- пепсин и трипсин (пищеварительные ферменты); В-лимфоциты различных клонов как уже говорилось, миллионы специфичных антител.

Синтез специфических белков далеко не исчерпывает всего, что связано с дифференцировкой. Дифференцированная клетка менее всего похожа на бесформенный мешок с белками. Еще первые гистологи и цитологи отмечали удивительно сложную структурную организацию многих дифференцированных клеток. В наибольшей мере это относится, пожалуй, к рецепторным клеткам. Сложной архитектурой обладают и другие типы клеток, например эпителиально-мышечные клетки кишечнополостных, выполняющие одновременно опорные, сократительные и иногда чувствующие функции.

Исследования недавнего времени позволили установить молекулярные и надмолекулярные основы столь сложной клеточной организации. Надмолекулярная организация клетки связана прежде всего со структурами их плазматических мембран и с элементами цитоскелета.

Основное свойство плазматических мембран дифференцированных клеток — наличие специфических мембранных рецепторов. Они представляют собой встроенные в липидный матрикс мембран молекулы гликопротеинов (комплексов белков с углеводами). На внешних, обращенных в межклеточное пространство концах рецепторов расположены строго определенные последовательности остатков углеводных молекул, изменяющих свою конформацию при связывании с эффекторами — молекулами гормонов, медиаторов, витаминов, вирусов, антигенов и других факторов, действующих извне на клетку. Эти конформационные изменения передаются по молекуле рецептора сквозь мембрану в субмембранные слои клетки, где начинаются каскады внутриклеточных реакций, осуществляющихся благодаря активации так называемых вторичных посредников— циклических нуклеотидов, звеньев инозитолфосфатной системы и др. В ряде случаев первым звеном, на которое оказывает влияние возбужденный (связанный с молекулой эффектора) внутриклеточный рецептор, является активация фермента аденилатциклазы, синтезирующего циклическую аденозинмонофосфорную кислоту (цАМФ).

Кроме специфических мембранных рецепторов в плазматическую мембрану встроены специальные «белковые машины», обеспечивающие транспорт ионов либо по градиентам их концентрации (ионные каналы), либо против градиентов (ионные помпы, или насосы). Из последних для жизнедеятельности клеток особое значение имеет Na⁺, К⁺-насос (или Na⁺, К⁺-АТФаза), откачивающий, при затрате энергии АТФ, ионы натрия и клетки во внешнюю среду, а ионы калия — внутрь клетки.

Мембранные рецепторы, ионные каналы и насосы — подвижные образования. Они могут перемещаться, концентрироваться или диспергироваться в плоскости плазматической мембраны (явление латеральной подвижности), а также выходить из плоскости мембраны, деградировать и заменяться новыми. Например, в миобластах каждую минуту деградирует и заменяется новыми молекулами примерно 1 мкм² поверхности. Латеральная подвижность и деградация элементов плазматической мембраны связаны между собой и имеют определенную направленность: у ползущего фибробласта элементы мембраны постоянно встраиваются на переднем конце движущейся клетки, перемещаются по поверхности фибробласта назад и деградируют (интернализуются) на заднем конце клетки. Встраивание элементов мембраны связано с процессами экзоцитоза, а деградация — с процессами эндоцитоза. Надмолекулярная организация плазматической мембраны и клетки в целом имеет динамический характер.

В поддержании полярности дифференцированных клеток важную роль играют микротрубочки. При искусственном разрушении микротрубочек клетка, как правило, деполяризуется. Микротрубочки способствуют также определенному расположению в цитоплазме аппарата Гольджи и осуществляют направленный транспорт ряда белков. Микротрубочки — высоколабильные образования, способные разрушаться и вновь собираться в течение нескольких минут.

Существенную роль в поддержании характерной формы клетки, а также в передвижениях внутриклеточных органелл и мембранных пузырьков играют сократительные волоконца — микрофиламенты, состоящие из белка актина и других, связанных с ним белков (в первую очередь миозина). Микрофиламенты также способны быстро собираться, разбираться и перемещаться по клетке. Ряд сложных клеточных дифференцировок (всасывающие клетки эпителия почек и кишечника, рецепторные клетки) связан со сборкой мощных пучков актиновых микрофиламентов, образующих структурную основу микроворсинок, размеры и структура которых весьма точно регулируются. Например, в глазах головоногих моллюсков над поверхностью каждой клетки сетчатки плотно упакованы сотни тысяч микроворсинок, причем в соседних клетках ряды ворсинок взаимно перпендикулярны, что позволяет животным распознавать плоскость поляризации света. Еще более точно организованы микроворсинки на поверхности волосковых клеток внутреннего уха: в пределах каждой клетки имеются микроворсинки различной длины, расположенные в строгой последовательности. Таким образом, в ходе дифференцировки волосковой клетки должны регулироваться число, длина и расположение микроворсинок.

Особо сложные типы клеточных дифференцировок осуществляются путем координированной активности многих внутриклеточных образований — мембраны, микротрубочек (и центров их организации, связанных с центриолями), аппарата Гольджи и ряда других. Один из замечательных примеров такой цитодифференцировки — образование стрекающих клеток (нематоцист) кишечнополостных из тотипотентных интерстициальных клеток. Процесс начинается с того, что поблизости от аппарата Гольджи (вероятно, из его цистерны) формируется капсула, содержащая мелко гранулированный материал. Затем размеры капсулы увеличиваются, она удлиняется и по форме становится похожей на тыкву. Ее удлинение на этой стадии явно контролируется микротрубочками, которые образуют спиральный пучок, обволакивающий верхушку капсулы. После этого на верхушке капсулы ее внутренняя стенка начинает вворачиваться, образуя длинную свернутую нить. В непосредственном окружении нити формируется серия «шипов», образующих вооружение нематоциста; у некоторых видов нематоцист кроме шипов формируется еще и мощный стилет. Центриоль нематоцисты дает начало чувствующему волоску — книдоцилю, в основе которого лежит пучок микротрубочек. Книдоциль представляет собой механорецептор стрекательной клетки, в ответ на возбуждение которого происходит ее разрядка, представляющая собой быструю эвагинацию (выворачивание наружу) содержимого стрекательной капсулы — сначала стилета, а затем шипов и нити: «катапультирование» стилета осуществляется менее чем за 10 мс, причем за это время стилет развивает ускорение в 40 ООО g и достигает средней скорости 2 м/с. Предполагается, что движущей силой этого процесса является сброс высокого осмотического давления внутри капсулы.

Уровни регуляции клеточной дифференцировки:

1. Уровень соматических мутаций. Предположим, что в разных клетках зародыша произошли различные изменения в первичной структуре ДНК— выпадения, повторы, повороты (инверсии) или перемещения отдельных ее участков (генов). Эти изменения будут наследоваться в соматическом потомстве (клоне) данной клетки. Поэтому такие события можно назвать соматическими мутациями.

Разберем немногочисленные, но важные исключения из общего правила эквивалентности геномов соматических клеток. Одно из них — явление амплификации генов. Мы уже говорили об амплификации рибосомных генов в оогенезе многих видов животных. Установлено, что амплифицироваться могут и нерибосомные гены, например гены, кодирующие структуру белков хориона яйца у дрозофилы. Другие случаи амплификации генов в нормальном развитии неизвестны, однако амплификация описана при злокачественном росте.

Другой яркий пример клеточной дифференцировки на основе соматических мутаций — дифференцировка В-лимфоцитов, продуцирующих антитела. В эмбриональном развитии при дифференцировке клонов В-лимфоцитов в тех участках их генома, которые кодируют белки антител (иммуноглобулины), происходят перемещения (транслокации) определенных групп генов.

Иммуноглобулины состоят из так называемых легких и тяжелых аминокислотных цепей. Гены для легких цепей содержат 2вариабельных сегмента ДНК— V и J — и константный сегмент С. Сегмент V содержит около 300 различных нуклеотидных последовательностей, а сегмент J — 4-5 таких последовательностей. На нитях ДНК еще недифференцированных клеток участки V, J и С пространственно разделены. В ходе дифференцировки промежуточная ДНК элиминируется, и любая из V-последовательностей может сблизиться с любой из J- последовательностей, а их комбинация — с константным С-сегментом. Таким образом, возникает 300*5 = 1500 различных комбинаций генов. Гены для тяжелых цепей содержат вариабельные сегменты V, D и J, состоящие соответственно из 200, 10-15 и 4 последовательностей, а также константный участок С. Их комбинирование добавляет еще примерно 200*10*4 = 8000 вариантов. Произведение 1500 * 8000 = 10 млн достаточно велико, чтобы обеспечить потребности организма в различных типах антител.

Близкое к соматическим мутациям явление — инактивация одной из половых (X)-хромосом у эмбрионов самок млекопитающих (у самок мыши такая инактивация наступает на 3-6-й день эмбрионального развития). Для установления необходимого генетического баланса должна быть инактивирована одна из имеющихся Х-хромосом, причем выбор между инактивацией материнской или отцовской хромосомы осуществляется в каждой соматической клетке случайно. Инактивированная хромосома обнаруживается под микроскопом в виде плотного скопления хроматина — тельца Барра, присутствие которого используется для установления пола эмбриона.

Дифференцировка путем соматических мутаций наблюдается у фотосинтезирующих бактерий Anabaena, образующих многоклеточные колонии. Если эта бактерия живет в условиях избытка азотистых соединений, во всех клетках происходит фотосинтез, и все они похожи друг на друга. Но когда азота начинает не хватать, появляются специализированные клетки - гетероцисты, лишенные хлорофилла, но синтезирующие фермент нитрогеназу, с помощью которой атмосферный азот превращается в усвояемую форму. Оказалось, что при формировании гетероцист в них происходит перестройка ДНК, в результате которой возникает последовательность нуклеотидов, кодирующая одну из субъединиц нитрогеназы. Последнее позволяет предположить, что дифференцировка клеток путем соматических мутаций — эволюционно древний способ, который в дальнейшем ходе эволюции оказался почти полностью вытесненным другими способами, обеспечивающими большую пластичность клеточного состава организмов и легче доступных пространственно-временному управлению.

Характеристики

Список файлов лекций