Изучение и опеделение оптимальных условий проведения денситометрического сканирования (1113659), страница 3
Текст из файла (страница 3)
Это связано с тем, что в описываемом методе возбуждающее излучениеобычно не подстраивают к максимуму поглощения определяемого вещества [8]. Однакотаким методом можно определить все ароматические вещества и вещества, содержащиесопряженные C=C двойные связи. Предел детектирования в зависимости от веществасоставляетдо0,5мкгнахроматографическуюзону.Возможнопроведениеколичественных измерений с использованием спектрофотометров.
В этом случае явлениефуоресценции представляет собой лишь косвенное измерение поглощения и этот методможет быть таким же чувствительным, как и прямое измерение поглощения вещества.Поэтому лишь в некоторых случаях предпочтение может быть отдано измерениюпоглощения непосредственно в максимуме поглощения [9].С точки зрения количественного детектирования метод прямого измеренияинтенсивности флуоресценции обладает рядом существенных преимуществ по сравнениюс методом ослабления флуоресценции:∗ повышенной селективностью, так как в смесях веществ детектируют толькофлуоресцирующие вещества; по сравнению с методами измерения интенсивностипоглощения имеется более широкий выбор условий возбуждения флуоресценции идетектирования флуоресцентного излучения;∗ более высокой чувствительностью (предел обнаружения ниже в 10 – 1000 раз);∗ широким интервалом линейной зависимости между количеством вещества впятне и интенсивностью флуоресценции;10∗ результаты детектирования флуоресцентного излучения не зависят от формыпятна [8].Независимость результатов детектирования от формы зоны является важнымфакторомпри исследовании экстрактов.
В этих условиях становится возможнымполучение дополнительной информации за счет сравнения пятен, полученных приодномерном и двумерном разделении.Оптимальная величина воспроизводимости зависит от метода фотометрическогодетектирования, точности функционирования механической системы сканирования,уровня электрических шумов в электронной схеме фотометра, воспроизводимостинанесения пробы и хроматографического разделения, включая в случае необходимостиоперацию проявления хроматограммы.Исходя из этих условий, денситометр для сканирования хроматограмм долженудовлетворять ряду требований:∗ в его конструкции следует предусмотреть возможность быстрого настраивания напроведение нужного метода детектирования: в отраженном свете, в отраженном ипроходящем свете (одновременно), флуоресценции;∗ денситометр должен иметь монохроматор для того, чтобы оператор при решенииочередной задачи мог выбрать соответствующую длину волны излучения и выделитьучасток спектра излучения веществ, находящихся на пластинке;∗ механическая система денситометра должна быть точно отлажена для получениявоспроизводимого сканирования проб;∗ оптическая система должна быть тщательно отрегулирована, в электронныхсхемах с низким уровнем шума следует предусмотреть значительное усилениеизмеряемого сигнала;∗ управление прибором должно быть простым и занимать мало времени [8].3.
2. Объединение ТСХ с другими хроматографическимиметодамиВ настоящее время объединение аналитических методов является перспективным.В этом случае, благодаря сочетанию преимуществ этих методов, возможно повыситьточность и чувствительность анализа. Сочетание ТСХ с другими хроматографическимиметодами оказывается очень результативным.11В связи с многообразием аналитических задач перспективны методы сочетаниягазовойхроматографии,колоночнойхроматографиииТСХдляразделения,идентификации и количественного определения состава анализируемых веществ.При сочетании ТСХ и ГХ производят термическую десорбцию анализируемыхвеществ и детектируют образовавшиеся газовые смеси детекторами, используемыми в ГХ.Однако переводить анализируемые вещества в газовую фазу можно и в процессепроведения разделения.
Был предложен оригинальный метод непрерывного отбора элюатаиз ТСХ-систем и одновременного его испарения за счет создания разрежения.При анализе некоторых смесей веществ в случае изменения экспериментальнойустановки сочетанием ТСХ - ГХ можно не только окончательно детектировать вещества,но и дополнительно разделять их. Сочетанием ТСХ – ГХ можно количественнодетектировать, а также идентифицировать и подтверждать присутствие в смесяхопределенных компонентов [2,3].Эффективность газохроматографического разделения подчас снижается, когда ванализируемых смесях присутствуют компоненты с близкими свойствами, что приводит кналожению ГХ-пиков.
В ТСХ, электрофорезе и хроматографии на бумаге частоиспользуют двумерное разделение, позволяющее эффективно разделить большинствовеществ. Использование в ГХ двух или более стационарных фаз в одном определениитакже можно рассматривать, как дву- или многомерное разделение.Разделение методом ТСХ анализируемых веществ слабо зависит от давления ихпаров. Следует учитывать, также, что полярность адсорбентов намного выше, чемполярность большинства стационарных жидких фаз, используемых в ГХ. Поэтомуразделение на тонком слое зависит в основном от типа функциональных групп,стерических затруднений, а молекулярный вес играет второстепенную роль. В ГЖХ прииспользовании неполярных стационарных фаз разделение в первом приближенииосновывается на различии в молекулярном весе и на дисперсионном взаимодействиимолекул [6].Использование ГЖХ в качестве подготовительной стадии для ТСХ открываетдополнительные возможности для разделения и идентификации сложных смесейразнородныхвеществ.Послеэтогокомплексногоразделенияможноизвлекатьопределяемые соединения из слоя сорбента и, случае необходимости, дальше разделять наГХ-колонках с другой системой селективных стационарных фаз.
В дополнение к обычнымметодикамдетектированиявописываемомсочетаниивозможноиспользованиекристаллографического определения природы того или иного выделенного компонентасмеси.12Одной из сложных проблем, возникающих при сочетании двух методов, являетсяколичественный перевод вещества из парообразного состояния в адсорбированное прикомнатной температуре в условиях значительного перепада температур. При сочетанииКЖХ с ТСХ также возникает проблема, связанная с малой емкостью ТСХ-пластины поотношению к объему элюата, выходящего из колонки; эту проблему пытаются разрешить,нанося на ТСХ-пластину только часть потока элюата или оперативно испаряя элюент.Соединительные линии между двумя системами должны иметь минимальный объем дляуменьшения размывания. Поэтому используют капиллярные трубки, по которым сбольшой скоростью движется элюат.
Температура коммуникации должна быть такой,чтобы в ней не происходило фазовых переходов низко- или высококипящих веществ.Должны отсутствовать также местные перегревы, ведущие к разложению определяемыхсоединений. Материал капилляра должен быть инертным по отношению к веществам,проходящим через него[2,8].ТСХ также используют для быстрого подбора состава элюента и сорбирующегоматериала применительно к КЖХ или для дополнительного разделения фракцийанализируемых веществ, отбираемых из колонки. Однако эти два метода могут сочетатьсяв плане взаимного использования детектируюших систем.
Методы детектирования ТСХорганически сочетаются с предварительным колоночным разделением. Такое сочетаниепредставляется перспективным в связи с широкими аналитическими возможностямидетектирующих систем в ТСХ. Во многих случаях тонкий слой сорбента являетсяидеальным транспортным средством для объединения колонки с детектором, именно этимспособом наиболее просто решаются проблемы сочетания двух систем в одну[2].Соединение методов ТСХ и КЖХ позволяет использовать преимущества обоихметодов(экспрессивностьичеткостьколоночногоразделенияивозможностинепосредственного воздействия на разделенные соединения в методе ТСХ) дляколичественного определения веществ и их идентификации [3].При сочетании ТСХ и последующих ГХ или ЖХ основными отрицательнымичертами являются: возможные потери веществ; высокая температура анализа; часто неколичественный перевод вещества из слоя сорбента в газовую фазу или раствор.Человеческий глаз может обнаружить на ТСХ-пластинке в лучшем случае около 1 – 10мкг окрашенных компонентов с воспроизводимостью не более чем 10 – 30 %.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
