Н.А. Юрина, А.И. Радостина - Гистология (1112199), страница 29
Текст из файла (страница 29)
Какие морфологические и функциональные особенности характерны для проводящих сердечных миоцитов различных частей проводящей системы? 16. Что представляет собой эпикард? Каково его строение? МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ КРОВЕНОСНЫХ СОСУДОВ И СЕРДЦА Комбинированный метод окраски, Рекомендованный Ромейсом. Приготовление растворов.
1. Распюррезорцин- фуксина. Раствор А: 0,5 г основного фуксина и 1 г резорцнна распю- 127 ряют в 50 мл дистиллированной воды. Раствор Б: 2 г кристаллического хлорида железа растворяют в 10 мл дистиллированной воды. Раствор А нагревают до кипения в колбе объемом 200 мл, прибавляют раствор Б и на малом пламени кипятят еще 5 мин при помешивании. После охлаждения до комнатной температуры осадок собирают на маленький фильтр, затем вместе с фильтром помещают в колбу, заливают 70 — 100 мл 96% спирта и доводят до кипения. При этом осадок переходит в раствор. Остудив, прибавляют 0,7 мл концентрированной хлористоводородной кислоты и фильтруют.
Раствор годен в течение нескольких месяцев. 2. Железный гематоксилин Вейгерта. Раствор А: 1 г гематоксилина растворяют в 100 мл 96% спирта. Раствор Б: Офнцинальный раствор полуторахлорисгого железа (50% раствор водного хлорного железа)„1 мл крепкой хлористоводородной кислоты и 95 мл воды. Растворы А и Б хранятся месяцами. Непосредственно перед употреблением соединяют равные количества растворов А и Б. Смесь может храниться 8 дней.
3. Раствор азофлоксина: азофлоксина 0,5 г, дистиллированной воды 100 мл, ледяной уксусной кислоты 0,2 мл. (Вместо азофлоксина: ксилидинового пунцового 0,2 г, кислого фуксина 0,1 г, дистиллированной воды 300 мл, ледяной уксусной кислоты 0,6 мл.) 4. Фосфорно-молибденовая кислота — оранжевый: фосфорно- молибденовой (или фосфорно-вольфрамовой) кислоты 3 — 5 г, дистиллированной воды 100 мл, оранжевого О 2 г. 5. 1% раствор уксусной кислоты. 6. 1% водный раствор светлого зеленого.
М е т о д и к а о к р а ш и в а н и я: 1) препараты из 80/О спирта помещают на 15 мин в резорцин-фуксин; 2) ополаскивают водопроводной и дистиллированной водой; 3) окрашивают ядра железным гематоксилином Вейгерта 2 — 3 мин; 4) ополаскивают дистиллированной водой, затем промывают в проточной воде 10 мин; 5) окрашивают азофлоксином (или пунцовым кислым фуксином) 5 мин; 6) ополаскивают в 1% уксусной кислоте; 7) дифференцируют в фосФорно-молибденовой кислоте — оранжевом до обесцвечивания коллагеновых волокон; 8) быстро ополаскивают в 1% уксусной кислоте; 9) подкрашивают светлым зеленым 5 мин; 10) промывают в 1% уксусной кислоте 5 мин; 11) переносят в абсолютный спирт (3 порции), ксилол, бальзам. Р е з у л ь т а т: ядра черные, цитоплазма красная, коллагеновые волокна зеленые, эластические — черные, миоциты красные.
Окрашиванне артерий эластического типа орсеииом. П р и г от о в л е н и е р а с т в о р а: 1 г орсеина растворяют в 100 мл 70% спирта и добавляют 1 мл концентрированной хлористоводородной кислоты. М е т о д и к а о к р а ш и в а н и я: 1) парафиновые срезы без наклейки и депарафинирования пускают плавать на поверхности красителя в течение 30 — 60 мин, после чего по1псватывают на пред- 128 метное стекло; 2) быстро ополаскивают в дистиллированной воде и 96'/» спирте; 3) дифференцируюг в 100% спирте до почти полного исчезновения фона; 4) просветляют в ксилоле, заключают в бальзам.
Р е з у л ь т а т: эластические волокна и мембраны окрашены в красно-коричневьш цвет. Все остальное почти бесцветно. После фиксации в жидкости Буэна ядра остаются окрашенными в красивый фиолетовый цвет. Выявление серебреиием границ эидотелиоцитов сосудов и эндокарда. М е т о д и к а 1. Отмытые от крови разрезанные сосуды переносят в 0,550 водный раствор нитрата серебра и оставляют в нем до тех пор, пока кусочки не начнут становиться мутно-белыми и непрозрачными (приблизительно на 5 мин). Далее материал промывают в большом количестве дистиллированной воды и оставляют на солнечном свету до появления коричневой окраски.
После этого несколько раз промывают дистиллированной водой, растягивают (например, натягивая на пробку и закрепляя шипами колючих кустарников), обезвоживают, просветляют в ксилоле и заключают в бальзам. М е т о д и к а 2. Сосуды наркотизированного и обескровленного путем отрезания верхушки сердца животного промывают 3,3% раствором сульфата натрия до полного удаления крови. Затем иньецируют 1 — 5% раствор нитрата серебра до заполнения всей сосудистой системы. После этого берут кусочки брыжейки, мочевого пузыря и т. д.„распластывают, ополаскивают дистиллированной водой, фиксируют спиртом и заключают в бальзам.
Р е з у л ь т а т: границы эндотелиоцитов импрегнируются в черный цвет, а цитоплазма и ядра бледно окрашены или не окрашены. Выявление волокон Пуркины окраской гликогена кармином по методу Беста. Проводящие миоциты сердца богаты гликогеном, поэтому хорошо выявляются кармином по методу Веста. Приготовление растворов. 1. Основнойраствор кармина Беста: 2 г кармина, 1 г карбоната калия и 5 г хлорида калия растворяют 60 мл дистиллированной воды н кипятят на малом пламени в течение нескольких минут (осторожно, сильно пенится!).
После охлаждения прибавляют 20 мл аммиака. Раствор сразу годен к употреблению. В темноте и в хорошо закупоренном сосуде хранится 1 — 2 мес. Перед употреблением раствор следует профильтровать. 2. Перед употреблением готовят рабочий раствор: основного раствора кармина Беста 20 мл, аммиака 30 мл, метнлового спирта 30 мл. 3. Смесь для дифференцировки: метилового спирта 40 мл, абсолютного спирта 80 мл, дистиллированной воды 100 мл. Методика окрашивания. Материал фиксируют в жидкости Карнуа, спирт-формалине (1 часть формалина, 3 части 129 80% спирта) или другом фиксаторе, не содержащем воды, в которой гликоген растворяется.
Заливка более пригодна целлоидиновая, так как целлоидин делает гликоген нерастворимым. После этого: 1) интенсивно окрашивают ядра гематоксилином Эрлиха; 2) основательно промывают; 3) окрашивают в рабочем растворе кармина Беста 5 — 20 мин; 4) переносят в дифференцируюшую смесь метнлового и абсолютного спирта с дистиллированной водой (срок дифференцировки от нескольких секунд до нескольких минут, пока не перестанут отходить облачка краски — 2 порции жидкости); 5) ополаскивают 80% спиртом, обезвожнвают, просветляют в ксилоле, заключают в бальзам. Р е з у л ь т а т: гликоген интенсивно-красный, ядра синие.
Благодаря обилию гликогена проводящие миоциты сердца отчетливо выделяются. Если необходима количественная оценка содержания гликогена, вместо окраски кармином по Бесту следует использовать ШИК-реакцию (см. главу 2). Для получения обзорных препаратов сердца и сосудов подходит любая методика, в частности окрашивание гематоксилин-эознном. Глава Т4 ОРГАНЫ КРОВЕТВОРЕНИЯ И ИММУНОПОЭЗА Формирование этих органов начинается в эмбрногенезе, со 2-й недели развития, в стенке желточного мешка (кровяные островки), затем последовательно кроветворными органами становятся печень (с 5-й недели), тимус, селезенка, лимфатические узлы (с 8 — 10-й недели), красный мозг (с 12-й недели). После рождения центральным органом кроветворения становится красньй костный мозг, а центральным органом иммуноцитопоэза — тимус, периферическими — селезенка, лимфатические узлы и лимфоидные узелки пищеварительного, дыхательного трактов и других органов.
КОСТНЫЙ МОЗГ Красный костный мозг уэмбрионазаполняетбольшинспю костей, в том числе трубчатые. У взрослых он находится в полостях плоских костей, позвонков н эпифизах трубчатых костей, составляя 4 — 5% от общей массы тела (около 2,5 — 4 кг). Он имеет полужидкую консистенцию, основу его образует ретикулярная ткань — специальный вид соединительной ткани, которая состоит из ретикулярных клеток (фибробластоподобных), макрофагов, небольшого числа жировых клеток. Ретикулярные (фибробластоподобные) клетки синтезируют коллаген 1Ъ' типа, который формирует ретикулярные волокна, образующие вместе с клетками сеть гейсп1шп, в которой расположены гемопоэтические элементы.
Рис. 48. Строение костного мозга (скема). Окраска азур 11-зозниом. 1 — синусоидныа канилллр; 2 — регакуллрнал ткань с гемоноэтаческими элементам» (миелоиднав ткань); 3 — мегакариоииты; 4 — жировые клетки (ио И. В. Алмазову, Л. С. Сузунову, 1978). Красный костный мозг — основной источник спзволовых клеток крови, большинство которых локализуется около эндоста. Поэтому в клинике используют пересадки костного мозга для лечения нарушений кроветворения, особенно у людей, получивших большие дозы радиации. Введение смертельно облученным людям стволовых клеток крови из косгного мозга восстанавливает кроветворение и спасает им жизнь.
В красном костном мозге расположены формирующиеся из СКК островки эритропоэза, гранулоцитопоэза, мегакариоцитопоэза, где представлены соответствующие клетки крови на различных стадиях дифференцировки. Зрелые клетки крови поступают в капилляры синусоидного типа, стенка которых состоит из эндотелиоцитов, имеющих щелевидные отверстия или поры. В костном мозге кровеносные сосуды имеют характерное расположение (рис. 48).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
