Отзыв оппонента Горелика В.С. (1105104)

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла

ОТЗЫВофициального оппонента на диссертационную работу Кулешовой АнныАлександровны«Флуоресцентныехарактеристикинаномаркеровсемейства флуоресцеина в растворах сывороточных альбуминов»,представленную на соискание ученой степени кандидата физикоматематических наук по специальностям 01.04.05 – оптика и 03.01.02 –биофизика.Сывороточные альбумины человека (САЧ) и быка (БСА) входят всостав плазмы крови и выполняют важную функцию, связанную странспортом метаболитов, переносимых кровью. Молекулы сывороточныхбелков САЧ и БСА имеют похожую молекулярную структуру и состоят избольшого числа аминокислотных остатков, реагирующих на кислотностьокружающей среды и на присутствие различного рода молекулярныхсоединений в плазме крови.

Важной проблемой молекулярной биофизикиявляется установление молекулярной структуры сывороточных белков ихарактера их взаимодействия с окружающей средой. Для полученияинформации о взаимодействии белков с окружающими их молекулами можетбытьиспользованметодфлуоресцентныхметок-флуоресцентныхнаномаркеров (зондов), очень чувствительных к присутствию вблизимолекул белков посторонних молекул. В качестве такого рода зондов вмолекулярнойбиофизикеиспользуютмолекулыразличныхтиповкрасителей. В диссертационной работе Кулешовой Анны Александровныисследовались характеристики спектров фотолюминесценции и поглощениянаномаркеров семейства флуоресцеина в буферных растворах и в водныхрастворах САЧ и БСА.

Была поставлена задача экспериментальногоисследованиявидаспектровфотолюминесценции,спектрально-поляризационных характеристик и абсорбционных свойств сывороточныхбелков и наномаркеров в зависимости от рН окружающей среды и типафлуоресцентного маркера. Решались конкретные задачи установления1спектрально-флуоресцентныххарактеристикнаномаркеровсемействафлуоресцеина (флуоресцеин (Ф), эозин (Э), эритрозин (Эр) и бенгальскийрозовый (БР)) в водных растворах белков САЧ или БСА при варьированиизначения pH и нахождения констант связывания этих наномаркеров белком.Решение таких задач является весьма актуальным, так как на основе данныхо флуоресцентных маркерах, мгновенно реагирующих на изменения вокружающей среде, устанавливаются закономерности взаимодействия белкас лигандом или с лекарственным препаратом, представляющие интерес дляприложений.Такимобразом,задачи,решаемыевдиссертационнойработеКулешовой Анны Александровны, представляются весьма важными как дляразвитиятеориивзаимодействиямолекулбелковсактивнымимолекулярными соединениями, так и с практической точки зрения, дляразвития метода флуоресцентных наномеркеров с целью диагностикисостояния биологических сред.Экспериментальныеисследованияспектровпоглощенияифотолюминесценции были проведены для буферных растворов, содержащихнаномаркеры Ф, Э, Эр и БР, и для наномаркеров в водных растворах САЧ иБСА при различных концентрациях наномаркеров (10-150 мкм) и приразличных значениях pH (3,5-8,0).

Для оценки изменений pH под влияниемСАЧ, БСА и наномаркеров были проделаны специальные эксперименты, врезультате которых было показано, что это влияние крайне незначительно.Измерения спектров поглощения наномеркеров, введённых в растворыСАЧиБСА,былипроведенысиспользованиемсовременнойэкспериментальной установки на основе спектрофотометра типа Perkin ElmerLambda 35. Спектры поглощения наномаркеров регистрировались вдиапазоне 300-700 нм с применением стандартных кварцевых кювет. Анализнаблюдаемых спектров поглощения осуществлялся с использованиемапробированной цифровой программы UVWINLAB.2Длярегистрацииспектровфотолюминесценциииспользовалсясовременный спектрофлуориметр Perkin Elmer LS 55. При этом возбуждениеспектровфотолюминесценцииосуществлялосьмонохроматическимизлучением с различными длинами волн: 440, 520, 530 и 540 нм.Соответственно спектры флуоресценции регистрировались в диапазоне 450700 нм.

Анализ спектров флуоресценции проводился с использованиемапробированной цифровой программы UVWINLAB.Таким образом, экспериментальные результаты, представленные вдиссертации, получены на современной спектральной аппаратуре. Ихнадёжностьидостоверностьневызываетсомнений.Полученныеэкспериментальные результаты являются оригинальными и дополняютаналогичные исследования по спектроскопии наномаркеров в биологическихструктурах, опубликованные ранее.Основные научные результаты диссертационной работы КулешовойАнны Александровны состоят в следующем.1. Обнаружено, что интенсивность фотолюминесценции красителей Ф, Э, Эри БР в водных растворах САЧ и БСА уменьшается, по сравнению ссоответствующей интенсивностью в буферных растворах.

При этомустановлено, что с увеличением pH тушение флуоресценции под действиембелков для наномаркеров Э, Эр и БР в растворах, содержащих САЧ и БСА,уменьшается.2. Показано, при введении наномаркеров Ф, Э, Эр и БР в водные растворы,САЧ и БСА, наблюдается длинноволновый сдвиг максимума спектрафотолюминесценции, по сравнению с аналогичными спектрами в буферныхрастворах.3. На основе анализа спектров поглощения растворов, содержащихнаномаркеры Ф, Э, Эр и БР, показано, что при достаточно большойконцентрации наномаркеров формируются ассоциаты. При этом обнаружено,3что в водных растворах САЧ и БСА степень ассоциации наномаркеровуменьшается, по сравнению с соответствующими значениями в буферныхрастворах.4.Наосновеанализаполяризационныххарактеристикспектровфотолюминесценции определены коэффициенты вращательной диффузии Ф,Э, Эр и БР и обнаружено их уменьшение в водных растворах САЧ и БСА вшироком диапазоне pH (3,5-8,0), по сравнению с буферными растворами.5.

Показано, что спектральные характеристики наномаркеров Э, Эр и БР,введённых в водные растворы САЧ и БСА, имеют близкие значения,отличающиесяотсоответствующихспектральныххарактеристикфлуоресцеина.Полученные экспериментальные результаты интерпретированы врамках развитой к настоящему времени теории. Представленные выводыявляются оригинальными, достоверными и хорошо обоснованными.Остановимся на некоторых недостатках, присутствующих в даннойработе.1. В диссертации выполнена большая экспериментальная работа, нодетали проведенных экспериментов отсутствуют.

В частности, неприведенысхемыэкспериментальныхустановок,отсутствуютсведения о характеристиках возбуждающего излучения, о типахиспользуемых поляризационных устройств и др. В результатевоспроизведение результатов, полученных в данной диссертации,оказывается затруднительным.2. В автореферате выводы об основных результатах в виде пунктов 3 и 7об уменьшении коэффициентов вращательной диффузии в водныхрастворах САЧ и БСА, по сравнению с буферными растворами,практически совпадают.4Оценивая диссертацию Кулешовой А.

А. в целом, следует отметить, чтонесмотря на приведённые недостатки, носящие технический характер, вданнойработеполученыважныенаучныерезультатыоспектрахфотолюминесценции и поглощения наномаркеров Ф, Э, Эр и БР, введённых вводные растворы САЧ и БСА. Полученные экспериментальные результаты отушенииидлинноволновомсдвигеспектровфотолюминесценции,зависящих от характеристик окружающей среды, открывают практическиевозможностидляиспользованияобсуждаемыхнаномаркеровпридиагностике патологий и типов молекулярных структур, присутствующих висследуемых биофизических объектах.

Установленные условия образованияассоциатовнаномаркеровпозволяютнайтидиапазонконцентрацийнаномаркеров, при котором их спектр соответствует мономолекулярнымструктурамкрасителейтеоретическиевподходыфотолюминесценциифотолюминесценциирастворе.дляиИспользуемыеописаниясдвигапредставляютсядальнейшего развития теории процессовдиссертациипроцессовдлинноволновогонаномаркероввтушениявспектрахважнымидлявзаимодействия белков снаномаркерами.Таким образом, диссертационная работа Кулешовой А. А., выполненнаяна «стыке» оптики биофизики, представляет как общенаучный, так ипрактический интерес. Полученные в этой работе результаты опубликованыв ведущих научных изданиях, апробированы на научных конференциях имогутбытьиспользованыширокимкругомучёныхипрактиков,занимающихся оптическими исследованиями биофизических объектов.Текст автореферата достаточно точно отражает содержание диссертации.На основании вышеизложенного считаю, что диссертационная работаКулешовой А.

А отвечает всем требованиям ВАК РФ и требованиямПоложенияоПостановленияпорядке№842присужденияПравительства5учёныхстепенейРФ24отвсентябряредакции2013 г.,.

Характеристики

Тип файла PDF

PDF-формат наиболее широко используется для просмотра любого типа файлов на любом устройстве. В него можно сохранить документ, таблицы, презентацию, текст, чертежи, вычисления, графики и всё остальное, что можно показать на экране любого устройства. Именно его лучше всего использовать для печати.

Например, если Вам нужно распечатать чертёж из автокада, Вы сохраните чертёж на флешку, но будет ли автокад в пункте печати? А если будет, то нужная версия с нужными библиотеками? Именно для этого и нужен формат PDF - в нём точно будет показано верно вне зависимости от того, в какой программе создали PDF-файл и есть ли нужная программа для его просмотра.

Список файлов диссертации