Автореферат (1102504), страница 5
Текст из файла (страница 5)
Наложение средних по траекторииструктур показало, что значительных изменений в конформации хромофора и его окружения непроизошло, однако имеются некоторые геометрические отличия, которые, видимо, отвечают засдвиги в спектрах поглощения и флуоресценции у мутантов. В результате анализа структурхромофоров мутантов выяснено, что наиболее вариабельными участками являются областьсоединения фенольного и имидозалидонового колец хромофора, а также зона присоединениямутированного радикала.5.Методомолигонуклеотид-направленногосайт-специфическогомутагенезагенамономерного красного флуоресцентного белка (mRFP1), клонированного в модифицированнойплазмиде pQEM, получен набор мутантных генов с заменами кодона Gln66.
Экспрессия в E.coli ипоследующая аффинная очистка позволили получить серию препаратов из 20 мутантных белковmRFP1. Проведена наработка и выделение целевого белка. Проведенный электрофорез пробпоказал наличие во всех белка с массой 26 кДа, что соответствует целевому продукту. Измереныоптические свойства препаратов. Из 20 белков окраской и способностью флуоресцировать ввидимой области обладают 12. Выявлена корреляция между объемом бокового радикала а.о.
по 66положению и оптическими свойствами полученного белка.6.Определены индивидуальные оптические характеристики белка mRFP1 и его мутантов(Q66C и Q66S), что позволило определить концентрации «зеленой» и «красной» форм хромофоровв растворе. Выявлена зависимость индивидуального коэффициента экстинкции красной формыбелка (в максимуме полосы поглощения) от объема аминокислоты по 66 положению, что можетбыть применено для прогнозирования свойств новых мутантов флуоресцентных белков и синтезабелков с наперед заданными свойствами.25Список работ, опубликованных по темедиссертацииСтатьи1. Банишев АА, Маслов ДВ, Ширшин ЕА, Фадеев ВВ, Вржещ ЕП, Дмитриенко ДВ, ДруцаВЛ, Вржещ ПВ, Пащенко ВЗ.
Метод определения индивидуальных оптических характеристикпосттрансляционныхфлуоресцентныхформфлуоресцентныхбелковсиспользованиемнелинейной лазерной флуориметрии. Биофизика, 2007, 52(5), 792-798.2. Khrameeva EE, Drutsa VL, Vrzheshch EP, Dmitrienko DV, Vrzheshch PV. Mutants ofmonomeric red fluorescent protein mRFP1 at residue 66: structure modeling by molecular dynamics andsearch for correlations with spectral properties Biochemistry, 2008, 73(10), 1085-1095.3. Dmitrienko DV, Vrzheshch EP, Drutsa VL, Vrzheshch PV.
Red fluorescent protein DsRed:parametrization of its chromophore as an amino acid residue for computer modeling in the OPLS-AAforce field. Biochemistry, 2006, 71(10), 1133-1152.4. Вржещ ЕП, Дмитриенко ДВ, Руданов ГС, Загидуллин ВЭ, Пащенко ВЗ, Разживин АП,Салецкий АМ, Вржещ ПВ.
Оптические свойства мономерного красного флуоресцентного белкаmRFP1. Вестник Московского Университета, серия биология, 2008, 3, 21-24.5. Banishev AA, Vrzheshch EP, Shirshin EA. Application of laser fluorimetry for determining theinfluence of a single amino-acid substitution on the individual photophysical parameters of a fluorescentform of a fluorescent protein mRFP1. Quantum Electronics, 2009, 39(3), 273-278.26Тезисы докладов на конференциях1. Ширшин ЕА, Банишев АА, Вржещ ЕП. Фотофизические параметры и механизмыфлуоресценции белка.
Международная научная конференция студентов, аспирантов и молодыхученых «Ломоносов-2006», секция «Физика», Москва, 2006, Тезисы докладов, с. 157.2. Фадеев ВВ, Вржещ ПВ, Маслов ДВ, Банишев АА, Вржещ ЕП, Дмитриенко ДВ, ШиршинЕА. Флуоресцентные характеристики и молекулярные фотофизические параметры красногофлуоресцентного белка mRFP1. Труды конференции «Альманах клинической медицины»,издается МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского, Москва, 2006. Том ХII, с. 42.3. Вржещ ЕП, Дмитриенко ДВ, Вржещ ПВ. Компьютерное моделирование трехмерных структурфлуоресцентных белков.
Труды конференции «Альманах клинической медицины», издаетсяМОНИКИ им. М.Ф. Владимирского, Москва, 2006. Том ХII, с. 51.4. Цой О, Вржещ ЕП. Изучение физико-химических свойств мутантов красного флуоресцентногобелка mRFP1. XIII международная конференция студентов, аспирантов и молодых ученых«Ломоносов-2006», Секция «Биоинженерия и биоинформатика», Москва, 2006, Тезисы докладов,с. 10.27.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
