Создание наноструктурных систем для транспорта лекарственных препаратов на основе смеси тритерпеноидов бересты (1091952), страница 25
Текст из файла (страница 25)
Изрезультатов в табл. 16видно, что размеры САНЧ, загруженныхкарбамазепином с содержанием субстанции от 5 до 10%, находятся в допустимом пределе, а132САНЧ, загруженные карбамазепином с концентрацией 15%, имеют большой размер и несоответствуют целям исследования. Размер САНЧ, содержащих карбамазепин увеличивался сувеличением концентрации загруженной субстанции.
Кроме того,для оценки влиянияиспользования добавки СHS на размер частиц, также сравнивали размер наночастиц САНЧ,содержащих 5 % карбамазепина в двух различных дисперсиях: c использованием 2% CHS ибез его использования. Данные в табл. 16 также показали, что при одной и той жеконцентрации препарата, добавление СHS приводило к значительному уменьшению размерачастиц (157нм ) по сравнению с образцом, не содержащим СНS (253нм).Таблица 16. Средний размер частиц САНЧ , загруженных карбамазепином (КБЗ) с различными концентрациямилекарства.НанодисперсииРазмер частиц,нмCАНЧ без КБЗ и СНS193САНЧ + 5% КБЗ (0.025 мг/мл буфера) и без СНS253САНЧ без КБЗ + 2% СHS (0.01 мг/мл буфера)143CАНЧ + 5% КБЗ (0.025 мг/мл буфера) + 2% СHS(0.01 мг/мл буфера)157CAНЧ + 10% КБЗ (0.05 мг/мл буфера) + 2% CHS(0.01 мг/мл буфера)184CAНЧ + 15% КБЗ (0.075 мг/мл буфера) + 2% CHS(0.01 мг/мл буфера)3281Морфология наночастиц САНЧ с различными концентрациями карбамазепинапредставлена на электронных микрофотографий на рис.
87.133вабРис. 87. Электронные микрофотографии дисперсий наночастиц САНЧ с различными концентрацямикарбамазепина: а - САНЧ без КБЗ + 2% СHS (0.01мг/мл буфера) ; б - САНЧ, загруженные 5% КБЗ (0.025 мг/млбуфера) + 2% CHS (0.01мг/мл буфера); в - САНЧ, загруженные 10% КБЗ (0.05 мг/мл буфера) + 2% CHS(0.01мг/мл буфера).Оценка возможности загрузки САНЧ с карбамазепином была проведена с помощьюУФ-спектроскопии, регистрируя карбамазепин в полученных дисперсиях САНЧ.
Результат нарис. 88 подтверждается наличием карбамазепина с различными концентрациями в дисперсияхСАНЧ, исходя из спектров поглощения вещества при длине волны 285 нм.Рис. 88. УФ спектры поглощения карбамазепина в нанодисперсиях САНЧ: нанодисперсия CАНЧ, содержащая5% КБЗ (0.025 мг/мл буфера) (1), нанодисперсия CАНЧ, содержащая 10% КБЗ (0.05 мг/мл буфера)(2),нанодисперсия CАНЧ, содержащая 15% КБЗ (0.075 мг/мл буфера) (3).Такимобразом,показанавозможностькарбамазепина в составе САНЧ.134полученияводорастворимойформы5.
Экспериментальная часть5.1. Материалы и методыВ работе использовали следующие коммерческие реактивы и растворители: СТБпредоставлена ООО «Березовый мир» (Москва) (60±5% бетулин, 30±4% лупеол и 9±3%кофеат бетулина), холестерил гемисукцинат (СHS) (≥99%) (Sigma - Aldrich), дигидрофосфатнатрия, гидрофосфат натрия, тетрагидрофуран, гидрид кальция (Химмед), додецилсульфатнатрия (SDS) (≥99%) (Sigma - Aldrich).Тетрагидрофуран перегоняли над гидридом кальция.Синтетические амфифильные мезо-арилпорфирин были синтезированы на кафедре химии итехнологии биологически активных соединений имени Н.А. Преображенского - МИТХТ им.М.В.
Ломоносова. Препарат генистеина был получен в Федеральном медико-биологическоеагентстве научно производственный центра «Фармзащита», г. Химки, Московская область.Субстанцию карбамазепина (серия– BP 88 Batch N.100131412) была любезно предоставленаОАО «Акрихин» (г. Старая Купавна). Дистиллированную воду, используемую приприготовлении буфера для получения нанодисперсий предварительно фильтровали черезфильтр с размером пор 220 нм (МПНроге, США).В работе использовались испаритель ротационный Laborota 4000 (Heidolph, Германия),магнитная мешалка Ika RH basic (Ika Labortechnik, Германия), ультразвуковая баня SonorexTK-52 (Bandelin, Германия), вортэкс Lab Dancer (IKA®, Германия), центрифуга CM-6M (ELMI,Латвия).
УФ-спектры поглощения записаны на спектрофотометре «Biowave II» (Biochrom US,США) при 25°С. Спектры флуоресценции записаны на спектрофлуориметре Cary Eclipse(Agilent Technologies, США)Распределение частиц по размерам (метод динамического светорассеяния) и дзетапотенциал определяли с помощью анализатораразмера субмикронных частиц и дзета-потенциала Delsa™ Nаnо (Вескmаn Coulter, Inc) и автокорелляционного спектрофотометра"На-носайзер" (Submicron Particale Sizer Nicomp 380, США) в центре коллективногопользования МИТХТ им.
М.В. Ломоносова. Микрофотографии нанодисперсий получали спомощью электронного микроскопа Joel 100СХ (Япония) при инструментальном увеличении10 или 20 тыс.1355.2. Получение САНЧКомпоненты для приготовления САНЧ:Раствор СТБ в ТГФ (5мг/мл) (A)Фосфатный буфер 10mM, pH 7.5В круглодонной колбе на 100 мл смешивали 1 мл раствора А и 25 мл фосфатногобуфера (рН 7.5; 10mM) и перемешивали дисперсиюв течение 10 мин при комнатнойтемпературе. После перемешивания, растворитель ТГФ удаляли на роторном испарителе притемпературе350Сдоконечногообъема10мл.Конденсированнуюдисперсиюцентрифугировали для удаления осадка и получения нанодисперсии САНЧ.5.3.
Получение САНЧ с холестерил гемисукцинатомКомпоненты для приготовления САНЧ с холестерил гемисукцинатом (CНS):Раствор СТБ в ТГФ (5мг/мл) (A)Раствор CHS в ТГФ (1 мг/мл) (Б)Фосфатный буфер 10mM, pH 7.5В круглодонных колбах на 100 мл смешивали 1 мл раствора А и поочерёдно 0.05мл;0.1мл; 0.25мл и 0.5мл (соответственно 1;2;5;10% по отношению с массой СТБ) раствора Б (4образца).
При интенсивном перемешивании пипеткой быстро добавляли 25 мл фосфатногобуфера (рН 7.5; 10mM) для каждого образца и перемешивали дисперсии в течение 10 минпри комнатной температуре. После перемешивания, растворитель ТГФ удаляли на роторномиспарителе при температуре 350С до конечного объема 10 мл. Конденсированные дисперсиицентрифугировали для удаления осадка и получения нанодисперсий.5.4. Получение САНЧ с мезо-арилпорфирилнамиКомпоненты для приготовления САНЧ с мезо-арилпорфирилнами:Раствор СТБ в ТГФ (5мг/мл)Растворымезо-арилпорфирилновпорфирина)136вТГФ(1мг/мл)(длякаждогоРаствор CHS в ТГФ (1 мг/мл)Фосфатный буфер 10mM, pH 7.5В круглодонных колбах на 100 мл смешивали раствор СТБ в ТГФ (1 мл, 5 мг/мл) ирастворы порфиринов в ТГФ (1мг/мл). Для стабилизации мембраны САНЧ и исследованиястабильной способности, добавляли раствор CHS в ТГФ (1мг/мл).
Были проведены 2 серииэкспериментов:a) При фиксировании концентрации раствора (2% от массы СТБ) порфиринов в ТГФ(0.1 мл, 1мг/мл) и изменении концентрации раствора CHS (0, 1, 5 % от массы СТБ) в ТГФ.б) При фиксировании концентрации раствора (2% от массы СТБ) CHS в ТГФ (0.1 мл,1мг/мл) и изменении концентрации раствора (5, 10 % от массы СТБ) порфиринов в ТГФПри интенсивном перемешивании пипеткой быстро добавляли 25 мл фосфатногобуфера (рН 7.5; 10mM) и перемешивали дисперсии в течение 7 мин при комнатнойтемпературе.
Растворитель ТГФ удаляли на роторном испарителе при температуре 350С доконечного объема 10 мл. Конденсированные дисперсии центрифугировали для удаленияосадка и получения нанодисперсий.5.5. Получение САНЧ с генистеиномКомпоненты для приготовления САНЧ с генистеином:Раствор СТБ в ТГФ ( 5мг/мл) (A)Раствор генистеина в ТГФ ( 1мг/мл) (Б)Раствор CHS в ТГФ (1 мг/мл) (В)Фосфатный буфер 10mM, pH 7.5В круглодонной колбе на 100 мл смешивали 1 мл раствора А и0.5мл (10% поотношению с массой СТБ) раствора Б. Для стабилизации мембраны САНЧ и повышениястабильности наночастиц, добавляли 0.1 мл (2% по отношению к массе СТБ) раствора В. Приинтенсивном перемешивании пипеткой быстро добавляли 25 мл фосфатного буфера (рН 7.5;10mM) и перемешивали дисперсию в течение 10 мин при комнатной температуре. Послеперемешивания, растворитель ТГФ удаляли на роторном испарителе при температуре 350С доконечного объема 10 мл. Конденсированную дисперсия центрифугировали для удаленияосадка и получения нанодисперсии.1375.6.
Получение САНЧ с карбамазепиномКомпоненты для приготовления САНЧ с карбамазепином:Раствор СТБ в ТГФ (5мг/мл) (А)Раствор карбамазепина в ТГФ (1мг/мл) (Б)Раствор CHS в ТГФ (1 мг/мл) (В)Фосфатный буфер 10mM, pH 7.5В круглодонных колбах на 100 мл смешивали 1 мл раствора А и поочерёдно 0.25мл;0.5мл; 0.75мл (соответственно 5,10,15% по отношению к массе СТБ) раствора Б (3 образца).Для стабилизации мембраны САНЧ и повышения стабильной способности наночастиц,добавляли 0.1 мл (соответственно 2 % по отношению к массе СТБ) раствора В в каждуюдисперсию.
При интенсивном перемешивании пипеткой быстро добавляли 25 мл фосфатногобуфера (рН 7.5; 10mM) и перемешивали дисперсиив течение 10 мин при комнатнойтемпературе. После перемешивания, растворитель ТГФ удаляли на роторном испарителе притемпературе350Сдоконечногообъема10мл.Конденсированныедисперсиицентрифугировали для удаления осадка и получения нанодисперсий.5.7.
Биологические испытания САНЧ с генистеиномЭкспериментальные исследования выполнены на кафедре военной токсикологии имедицинской защиты - Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова, Санкт-Петербург набелых беспородных мышах разводки питомника РАМН «Рапполово» (пос. РапполовоЛенинградская область) по методам [244-246].1386. Заключение1.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
