Отзыв официального оппонента - 1 (1091761)
Текст из файла
ОТЗЫВ официального оппонента доктора биологических наук, Згоды В. Г. на диссертационную работу Зверевой Ирины Олеговны «ПРОГНОЗИРОВАНИЕ МЕТАБОЛИТОВ РИЛИЗИНГ-ПЕПТИДОВ ГОРМОНА РОСТА В ОРГАНИЗМЕ ЧЕЛОВЕКА ДЛЯ РАЗРАБОТКИ МЕТОДИКИ ИХ ОПРЕДЕЛЕНИЯ В ЦЕЛЯХ АНТИДОПИНГОВОГО КОНТРОЛЯ», представленную к защите в диссертационный совет Д 212.131.0б при ФГБОУ ВО «Московский технологический университет» на соискание ученой степени кандидата химических наук по специальностям 02.00.10 — «Биоорганическая химия» и 02.00.02- «Аналитическая химия» Актуальность темы диссертации Выявление злоупотребления соединений пептидной природы с допинговым эффектом нередко представляет собой нетривиальную задачу ввиду стремительной и, нередко, полной их биотрансформацией в человеческом организме.
В таких случаях антидопинговые методики нацелены на определение как допинговых препаратов из Запрещенного списка Всемирного антидопингового агентства (ВАДА), так и как можно большее число метаболитов и маркеров их приема. Включение.метаболитов и маркеров приема допинга в аналитические методики в некоторых случаях позволяет значительно увеличить окно детектирования после приема препаратов, обеспечивает большую специфичность методик. Однако не всегда у научного антидопингового сообщества есть данные по метаболизму интересующих соединений. В частности, информация о метаболитах одного из набирающего популярность вида пептидного допинга, рилизинг-пептидов гормона роста (ОНЯР), ограничена.
ОНЙР представляют собой стимуляторы выработки эндогенного гормона роста через альтернативный механизм регуляции — рецептор грелина. Они применяются спортсменами для повышения выносливости, силовых показателей, ускорения восстановления после травм и физических нагрузок. Несмотря на то, что в настоящее время только один из представителей ОНКР разрешен к приему в качестве лекарственного препарата при лечении болезней дефицита гормона роста на территории Японии, СНКР доступны для приобретения через различные интернет-сайты спортивного питания и спортивных добавок.
Статус неразрешенных к приему препаратов ограничивает изучение метаболизма 1п ~Ыо в человеческом организме. Поэтому изучение метаболизма на примере данных соединений, поиск диагностически ценных метаболитов и выбор эффективного подхода для этого являются актуальными задачами, которые важны не только для разработки методики их определения в целях антидопингового контроля, но могут быть применены в других областях.
Степень обоснованности научных положений, выводов и рекомендация Основные положения, выносимые на защиту, и выводы работы являются хорошо обоснованными и подкрепляются публикациями в международных журналах. В работе диссертанту удалось показать, что наиболее эффективными моделями 1п й1го для изучения метаболизма СНЙР являются почечная микросомальная фракция и 89 фракция печени человека, при инкубации с которыми было получено 61 и 58 метаболитов для восьми наиболее известных ОНКР, соответственно. Полученные данные в исследовании 1п ~ Ьо позволили автору выявить 17 метаболитов для пяти наиболее популярных ОНКР, 8 из которых были признаны диагностически значимыми и включены в разрабатываемую методику определения бНКР по их метаболитам в моче человека методом СВЭЖХ-МС/МС в целях антидопингового контроля.
При разработке методики автором рассмотрены 4 варианта подготовки образцов мочи перед инструментальным анализом. Разработанная методика определения С~НК.Р и их метаболитов валидирована со всеми предложенными вариантами подготовки образцов. При валидации диссертантом установлен ряд метрологических характеристик: специфичность/селективность, линейность, прецизионность в условиях одного дня и между днями, предел обнаружения, степень извлечения и влияние матрицы.
Эффективность разработанной методики оценена при ее апробации. Важно отметить значимость данного исследования для оценки времен детектирования ОНКР и их метаболитов разработанным способом и влияния индивидуальных особенностей человека и способов приема на метаболизм ОНКР. Достоверность и новизна научных положений, выводов и рекомендаций Автором используется комплекс современных высокоточных приборов и синтезированные сертифицированные референсные образцы, поэтому достоверность полученных результатов, обоснованность научных положений и выводов, сформулированных в рецензируемой работе не вызывает сомнений.
Полученные автором данные с одной стороны подтверждают уже сложившиеся представления о метаболизме соединений пептидной природы и возможностях различных 1п м1го моделей, а с другой стороны, предоставляют новую информацию о ранее неизвестных метаболитах ОНКР и эффективности использования ряда моделей 1п м1го для прогнозирования метаболитов ОНК.Р, которая также может быть полезной при прогнозировании метаболитов других пептидов. Полнота изложения основных результатов диссертации в научной печати Диссертационные материалы получили адекватное отражение в 10 публикациях автора, в числе которых 4 статьи, опубликованные в профильных зарубежных периодических изданиях с высокими индексами цитирования.
Результаты работы И.О. Зверевой многократно представлялись на международных и отечественной научных конференциях. Оценка содержания диссертации, ее завершенность в целом„замечания по оформлению диссертации Диссертация И.О. Зверевой имеет традиционную структуру и включает введение, лит ературный обзор, экспериментальную часть, три части с обсуждением собственных результатов, выводы„список литературы и одно приложение. Текст изложен на 1б1 страницах, сопровождается 24 рисунками и 16 таблицами.
Список литературы включает 180 публикаций. Во введении И.О. Зверева раскрывает актуальность проведенного исследования и подводит к постановке цели и задач исследования. Также автором обозначены научная значимость, теоретическая и практическая значимость, положения, выносимые на защиту, степень достоверности и апробация работы. В первой части обзора литературы И,О.
Зверева с необходимой польютой отражает предпосылки разработки ОНКР, их механизм действия, перспективность использования в качестве препаратов стимулирующей терапии при дефиците гормона роста и в качестве допинга среди спортсменов. Во второй главе диссертантом рассматриваются наиболее популярные модификации полипептидных соединений и их особенности метаболизма. В третьей части литературного обзора автором рассматриваются основные подходы и платформы изучения метаболизма биологически активных соединений. В заключительной части И.О.
Зверевой проведен детальный анализ современного состояния методов определения ЙНКР в зарубежных антидопинговых лабораториях. Учитывая достоинства и ограничения рассмотренных методов, показано, что наиболее перспективной платформой для анализа является высокоэффективная жидкостная хроматография в сочетании с тандемной масс-спектрометрией.
Таким образом, первая глава работы свидетельствует о глубине теоретической подготовки диссертанта. Во второй главе приводится описание реактивов, экспериментального оборудования и применяемых методов. Раздел «Результаты и осуждение» состоит из 3-х частей и построен по четкой и логичной схеме. В первой части заключительной главы представлены данные по метаболизму соединений ш ларго и ш иапо, полученные методом наноСВЭЖХ-МСВР. Одним из центральных мест этой части работы было установление причины увеличения молекулярной массы метаболита на 1 Да. Из-за невозможности произвести детектирование образцов МБ" при использовании масс-спектрометрического детектора модели Я Ехас6ие диссертантом предложено доказательство реакции дезамидирования с использованием рекомбинантной амидазы. Вторая часть главы посвящена разработке, оптимизации и валидации методики определения (лНКР в образцах мочи методом СВЭЖХ-МС/МС.
Стоит отметить, что методика валидирована в соответствии с требованиями ГОСТ ИСО/МЭК 17025 и рядом технических документов ВАДА. В заключительной части главы собственных результатов представлены данные по выведению бНКР-2 после назального и внутривенного приемов и 6НКР-6 после назального приема. Несмотря на относительно небольшую выборку, один из важных результатов данной части исследования - выявление межиндивидуальных особенностей метаболизма на примере соединений (лНКР-2, которое показало преимущество образцов мочи в качестве матрицы для исследований и необходимость включения как можно большего числа аналитически ценных метаболитов в методики определения пептидных соединений.
Выводы работы диссертантом сформулированы четко и логично вытекают из приведенных результатов исследования. Исследование проведено на высоком методическом уровне, проделан большой объем работы. Полученные результаты обладают несомненной новизной и значимостью для антидопингового контроля и фармакологии; могут быть использованы в различных исследованиях по изучению фармакодинамики соединений пептидной природы, а также способствовать совершенствованию методов выявления злоупотребления допинга.
Рукопись написана логично, последовательно и доступно для понимания специалистам широкого профиля в смежной области биологии и химии. Диссертационная работа носит полноценный и завершенный характер как в научном плане, так и в оформлении. В целом диссертация заслуживает высокой оценки, является весьма актуальной и не содержит существенных недостатков. Тем не менее, при ознакомлении с диссертацией возникли следующие вопросы и замечание: 1) Не совсем понятен выбор микросомальной фракций почек и печени, а также Я9 фракции печени для изучения метаболитов пептидных соединений.
Известно, что микросомальная фракция печени используется для изучения метаболизма низкомолекулярных гидрофобных соединений, в то время как белки и пептиды — гидрофильной природы. 2) Интересует вопрос этичности проводимых исследований 1п м1чо. Насколько это следует из диссертации, за исключением внутривенного приема, волонтерам вводили, фактически, стандартные образцы, химически синтезированные «на заказ». 3) При изучении скоростей выведения (3НКР и их метаболитов проводился ли учет общего объема мочи, образовавшейся за сутки? Ведь на концентрацию соединений в моче могут влиять различные факторы, в том числе и особенности питьевого режима волонтера.
В диссертации этот момент исчерпывающе не освещен. Также, в автореферате диссертации И.О. Зверева две таблицы имеют заголовки «Таблица 4». Следует отметить, что вопросы и сделанное замечание ни в коем случае не умаляют актуальность и значимость рецензируемой работы и носят в основном дискуссионный характер. Соответствие содержания автореферата основным положениям диссертации Автореферат диссертации полностью отвечает требованиям ВАК Минобрнауки России и оформлен в соответствии с ГОСТ Р 7.О,11-2О11. Автореферат достаточно полно отражает содержание диссертационной работы и соответствует ее основным положениям. Заключение Диссертационная работа Зверевой Ирины Олеговны является логически завершенной актуальной научно-квалификационной работой, характеризующейся несомненной новизной и практической значимостью. Основные научные результаты диссертационной работы опубликованы в ведущих научных журналах.
Достоверность и обоснованность полученных результатов, сделанных выводов и заключений не вызывает сомнений. Таким образом, диссертационная работа Зверевой Ирины Олеговны соответствует требованиям «Положения о порядке присуждения ученых степеней», утвержденного постановлением Правительства Рф от 24.09.2013 г. № 842 с поправками Правительства РФ от 21.04.2016 г, №335 и от 02.08.2016 г., а ее автор, И.О. Зверева заслуживает присуждения ученой степени кандидата химических наук по специальностям 02.00.10 «Биоорганическая химия» и 02.00,02 — «Аналитическая химия». Заведующий отделом Протеомных исследований и масс-спектрометрии Федерального государствешюго бюджетного научного учреждения «Научно-исследовательский институт биомедицинской химии имени В.Н.
Ореховича» д.б.н. Згода Виктор Гаврилович почтовый адрес: 119121, Россия, Москва, ул. Погодинская, д. 10, стр.8 моб. Тел 89163592656 е-тпа11 у1с.'ая1л1 Ь.гпь1с,тя наименование организации: ФГЬНУ «Научно-исследовательский институт биомедицинской химии имени В.Н. Ореховнча» должность: заведующий отделом 23 июня 2015 г. Подпись д.б,н, В.Г. Згоды завернин Ученый секретарь ФГБН У «Научно-исследовательский инстиз биомедицинской химии имени В.Н. к.б.н.
Ь.А. Карпова .
Характеристики
Тип файла PDF
PDF-формат наиболее широко используется для просмотра любого типа файлов на любом устройстве. В него можно сохранить документ, таблицы, презентацию, текст, чертежи, вычисления, графики и всё остальное, что можно показать на экране любого устройства. Именно его лучше всего использовать для печати.
Например, если Вам нужно распечатать чертёж из автокада, Вы сохраните чертёж на флешку, но будет ли автокад в пункте печати? А если будет, то нужная версия с нужными библиотеками? Именно для этого и нужен формат PDF - в нём точно будет показано верно вне зависимости от того, в какой программе создали PDF-файл и есть ли нужная программа для его просмотра.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
