Реовирусная инфекция овец     (КАТАРАЛЬНАЯ ЛИХОРАДКА)                             

       Bluetongue, Mouth sickness (англ.); Soremuzzle (амер.); Blauzungenkrankchiet (нем.);

       Fievre cattarrhale (франц.); Lengua azul (исп.)

Инфекционная катаральная лихорадка овец ("синий язык" КЛО) - вирусная трансмиссивная инфекция, передающаяся кровососущими насекомыми из рода Culicoides, характери­зующаяся лихорадочным состоянием, воспалительно-некротическими поражениями ротовой полости, особенно языка, пищеварительного тракта, эпителия венчика и основы кожи ко­пыт, а также дегенеративными изменениями скелетных мышц.

Распространение. КЛО впервые зарегистрирована в Южной Африке в 1876г. Вначале она поражала овец мес.тных пород и чаще протекала бессимптомно. С ввозом в Африку вы­сокочувствительных овец европейских пород болезнь приняла злокачественный характер. С 1943 г. болезнь стали регистрировать за пределами Африканского континента. В 1943 г. на­блюдали тяжелую эпизоотию её на о. Кипр, в том же году в Палестине и Сирии. С 1944 г. эту инфекцию диагностировали в Турции и Иране. В 1948 г. - появилась в Америке, а в 1956 г. - на юге Португалии, в Испании, и в 1962-1964 гг. - в странах Южной Америки. В 1972 г. она была зарегистрирована в Египте. AT обнаружены не только у овец, но и у КРС, буйволов и коз. В РФ не­благополучными с 1993 г. могут считаться  районы Бурятии.

Патогенез. Вирус выделил Тейлер в 1960 г.Проникает через пла­центу, итог-мумификации эмбрионов, нарушению развития плодов, рождению нежизнеспособных ягнят.

ХАРАКТЕРИСТИКА ВИРУСА

Морфология и химический состав. Возбудитель содержит 2-нитевую неинфекцион­ную РНК, состоящую из 10 сегментов с мол.м. от 0,28*10⁶ до 2,7-10⁶ Д. РНК нечувствительна к РНК-азе. Вирус содержит 80% белка и 20% РНК. Капсид гексагональной формы, однослойный, состоит из 32 капсомеров, расположенных в симметрии 5:3:2. Два полиипептида в виде диффузного белкового слоя, окружают капсид. Наружный (экстракапсидный) слой маскирует капсомеры и увеличивает диаметр вириона по сравнению с нуклеокапсидной формой. Он, вероятно, "маскирует" и вирусную транскриптазу, которая может быть обна­ружена после его удаления. Диаметр полных частиц 65-77 им (вмес.те с экстракапсидным слоем). Диаметр нуклеокапсидов 61-67 нм.

Обнаружены вирусные частицы 2-х типов: легкие и тяжелые. Первые частицы обладают большей инфекционностью, плавучая плотность их в CsCL 1,36 г/см³, коэффициент седи­ментации 550 S, диаметр 69,2 нм. Они содержали 4 основных (мол.м. 110000, 11000, 58000 и 32000 Д) и 3 минорных капсидных белка (мол.м 155000, 72000 и 38000 Д). Тяжелые частицы так же инфекционны, плавучая плотность их в хлористом цезии 1,38 г/см³, коэффициент седиментации 470 S, диаметр 63,2 нм. На поверхности четко различимы 32 капсомера. Тяжелые частицы обладают РНК-зависимой РНК-полимеразной ак­тивностью, которая в присутствии Mg²⁺ увеличивается и становится максимальной при 28°С. Полагают, что in vitro и in vivo вирусный геном транскрибируется при помощи энзи­ма, присутствующего в капсиде. Легкие частицы - это зрелые вирионы, а тяжелые - их предшественники или продукты деградации под действием лизосомальных ферментов.

Различают вирионы без оболочки и с оболочкой. Первые не имеют наружного слоя по­лых капсомеров, но покрыты слоем тонких поверхностных выступов. Вторые обнаружены на поздних стадиях инфекции. Оболочка приобретается, очевидно, в процессе выхода виру­са из клетки и включения клеточной мембраны. Частицы без оболочки, но заключенные в мембранный мешок, и частицы с оболочкой защищены от нейтрализующего действия спе­цифических AT. Этим объясняется факт одновременной циркуляции в крови вируса и AT. Расщепление наружного капсидного белка VP2 вируса сопровождается образованием 1-капсидных частиц с высокой инфекционностью и утратой ГА-активности. Они форми­руют наружный капсид вириона; а полипептиды VP1, VP3 и VP4 находятся в поверхност­ном слое нуклеокапсида. Главными капсидными (наружными) белками данного вируса являются белки VP2 иУР5. Капсидные протеины - основные для различных серотипов ви­руса КЛО и перспективны для создания рекомбинантной вакцины. Длина РНК 10-го сегмента у всех 6-ти изолятов составляет 822 нуклеотида. Степень гомологии нуклеотидных последовательно­стей у разных изолятов РНК 10 сегмента генома составляла от 82 до 99%. Все гены данного вируса, детерминирующие неструктурные белки (NSI, NS2, NS3), а также большин­ство полипептидов внутреннего капсида (VP1, VP3, VP4) являются консервативными, дру­гие же два гена, детермирующие 2 компонента внутреннего капсида (VP6 и VP7) менее кон­сервативны. Возможен эффективный обмен 5-ю сегментами (из 10 сег­ментов 2-нитевидной РНК 10 и 11-го серотипов).

Рекомендуемые материалы

Устойчивость. Вирус КЛО устойчив к эфиру, хлороформу, дезоксихолату натрия. Резистентность к дезоксихолату обусловлена присутствием чужеродных белков, так как очи­щенный вирус чувствителен к этому веществу, но инактивируется медленнее, чем арбовирусы. Чувствителен к трипсину, кислому рН. При рН ниже 6,0 вирус инактивируется в услови­ях 37°С в течение 1 мин. Он стабилен при рН 6,5-8,0, достаточно устойчив в щелочной зоне; очень стабилен в р-ре с рН 9,0 и с низкой концентрацией солей. В баранине и говядине при созревании, когда рН находится между рН 5,6 и 6,3, вирус инактивируется. В тушах овец при 4°С, если рН мяса не снижается ниже 6,3, вирус сохраняется до 30 дн. Наличие 2-компонентной кривой термоинактивации вируса при 37°, 46° и 56° указывает на гетероген­ность вирусной популяции. Инактивация протеина происходит при 46-56°С, а РНК - при бо­лее низкой температуре (37-46° С). Вирус сохраняется в загнивающей крови. Для вирус-исследований кровь помещают в жидкость Эдингтона (5 г щавелевокислого калия, 5 г фенола, 500 мл дис­тиллированной воды), в которой вирус сохраняет активность при комнатной температуре в течение нескольких лет. В лиофильно высушенном со стабилизаторами вируссодержащем материале он сохраняется несколько лет как при 20°, так и при 4°С. При медленном замо­раживании до      -10° или -20°С вирус разрушается, но выживает при более низких температу­рах. Нагревание при 60°С инактивирует его за 5 мин; 3%-ный р-р формалина - за 48-72 ч, хинозол в соотношении 1:2000 - за 30 мин., 3% р-р едкого натра и 70% спирт - за 5 мин.

Антигенная структура. Вирус КЛО имеет 2 группоспецифических неинфекционных растворимых AГ - КС и преципитирующий. Первый представлен частицами диаметром 8 нм и входит в состав вириона, а второй может быть компонентом самой вирусной частицы или продуктом размножения вируса в инфицированных клетках. Размножение вируса свя­зано с синтезом растворимого АГ как предшественника.

Антигенная активность. У переболевших животных образуются ВН, КС и ПА. Пер­вые появляются на 14 день после заражения животного. К 30 дню их содержание достигает максимума и удерживается до 12 мес.. Присутствие у реконвалесцентов ВНА к вирусу одно­го типа не защищает его от заражения вирусами других типов. КСА у зараженных овец об­наруживаются на 10-й день после первого подъема температуры, достигая пика на З6-й день, и сохраняются в течение 6-8 нед. Через 12 мес.. они выявляются в едва уловимых тит­рах. Для определения чувствительности животного к вирусу наиболее приемлема РДП. У переболевших овец ВНА достигают максимального титра к 30-му дню и сохраняются не менее года в течение нескольких мес.яцев после начала заболевания. Белок VP2 вызывает у овец образование ВНА и ПА, а также и устойчивость к заражению вирулентным штаммом. Прививка полипептидом VP7 не приводила к образованию ВНА и иммунитета. Биохимическая характеристика AT не изучена. ВНА и ПА стабильны при 56°С, КСА при этой температуре быстро разрушаются. У каждого животного титры ВНА, КСА различ­ны. Сыворотки крови овец обладают антикомплементарностью, а сыворотки коров содержат неспецифические ингибиторы.

Антигенная вариабельность и родство. В настоящее время различают 24 серотипа вируса КЛО, АГ классификацию которых, проводят при помощи перекрестной РН. Проис­хождение большого числа АГ вариантов не выяснено. Хайг (1959 г.) высказал предположе­ние об АГ дрейфе этого вируса под влиянием остаточного иммунитета в популяции живот­ных. Для каждой АГ группы определен штамм-прототип. Вирус каждого серотипа создает прочный и длительный иммунитет только против гомологичного типа и незначительный против гетерологичного. Это свидетельствует о существовании общегруппового (для всех штаммов) АГ компонента. Степень выраженности иммунитета против гетерологичных ти­пов различна. В РСК установлено родство вируса с возбудителем эпизоотической геморра­гической болезни оленей (ЭГБО). Показано, что контаминация вирусом КЛО живых вакцин против чумы и парвовируса собак является причиной абортов и гибели беременных сук . Полипептид VP2 определяет серотиповую, a VP7 - групповую специфичность ви­руса. С этими полипептидами связана индукция ВНА и КСА. Гемагглютинирующие свойства не установлены.

Локализация вируса, вирусемия, вирусоносительство. Вирус содержится в крови, сыворотке, плазме и кроветворных органах больных животных. С повышением температу­ры со 2-3-го дня по 9-10-й дн после заражения его обнаруживают в крови, где он ассоцииру­ется с лейкоцитами. Так как вирус проходит плацентарный барьер, его можно выделить также из крови плода овец и коров. Он не связан с эритроцитами и может присутствовать в сыворотке од­новременно с AT. Сведения о длительности вирусемии у животных-реконвалесцентов про­тиворечивы. Вирус обнаруживали в крови зараженных коров в течение 28 дн., а в крови овец - 35-49 дн. Имеются данные о длительных перерывах виремии. В крови отдельных овец его удавалось обнаружить в течение 3-4 мес., а в крови КРС - в течение года. Селезенка и мезентериальные лимфоузлы наиболее подходящие органы для посмертного выделения вируса. КРС, не проявляя видимых симптомов болезни, может резервировать вирус в межэпизооти­ческий период (до 700 дн. после заражения), оставаясь длительное время вирусоносителем при наличии ВНА или без них. В экспериментальных условиях у КРС виремия развивается начиная со 2-го по 50-й день после заражения, пик виремии отмечен на 7-й день. Часто ес­тественная и экспериментальная инфекция у КРС протекает без клинических признаков, но при этом всегда отмечается более продолжительная (иногда до 120-150 дн), чем у овец, ви­ремия. В эпизоотических районах протекает субклинически и трудно диагностируется.

Экспериментальная инфекция. Овец можно заразить при введении материала интраназально, внутривенно, внутрибрюшинно, подкожно, внутрикожно, внутримышечно, интрацеребрально и per os. Чтобы вызвать болезнь, достаточно ввести в вену 0,01 мл виру­лентной крови. В экспериментальных условиях удавалось заражать горных газелей (Gazella gazella) в возрасте 4-12 мес.. Клинически болезнь не проявлялась, однако развивалась вире­мия, продолжавшаяся до 35 дн. Высокий уровень ВНА у них отмечен на протяжении 5 мес.. наблюдения. Контактным путем вирус не передается. При интрацеребральной инокуляции возбудителя удается вызвать летальную инфекцию новорожденных мышат и хомячков. Од­нокопытные, собаки, кошки, хорьки и морские свинки к данному вирусу нечувствительны.

Культивирование. Вирус культивируют в КЭ 6-8-дн возраста, в организме новорож­денных мышей и в различных культурах клеток. КЭ заражают в желточный мешок, на ХАО или внутривенно. В последнем случае используют КЭ 11-13 дн возраста. После заражения их инкубируют при 33,6°С. Погибают они через 3-6 дн. За 6-8 ч до гибели вирус достигает наибольшего титра (10^5,8-10⁸ ЭЛД_50/г). КЭ имеют характерный вишнево-красный цвет. Мы­шечная ткань, печень и мозг в состоянии дегенеративного изменения. Последовательное пассирование вируса в КЭ приводит к его аттенуации, что легло в основу получения живой вакцины (метод Александера). Полевые штаммы эпизоотического вируса блутанга выделя­ют с большим успехом на эмбрионах, чем на культуре клеток. При интрацеребральном за­ражении вирус размножается в мозге новорожденных мышей и вызывает симптомы энце­фалита и гибель через 3-5 дн. Наиболее восприимчивы мыши 1-3-дн возраста. У взрослых мышей вирус размножается, но инфекция протекает инаппарантно. К вирусу чувствительны культуры клеток почки ягнят, эмбрионов КРС и молодых хомя­ков. Вирус, адаптированный к первичной культуре клеток почек ягнят, удается культивиро­вать в клетках HeLa, МВ-2 и ВНК-21. Первые изменения в зараженных клетках ВНК-21 по­являются через 18 ч, а полная их деструкция наступает через 59 ч после инокуляции вируса. Изменения характеризуются округлением клеток, редукцией содержимого цитоплазмы и по­явлением отдельных структур, напоминающих синцитий. Наиболее чувствительна переви­ваемая культура клеток VERO. Культуру клеток почек ягнят и эмбрионов КРС в настоящее время широко используют при изготовлении вакцины против КЛО для размножения аттенуированных штаммов вируса. Появление и развитие ЦПИ сопровождается возрастанием инфекционности титра вируса.

Особенности внутриклеточной репродукции. Вирус развивается в цитоплазме зара­женных клеток, в цитоплазматическом гранулярном матриксе и образует субструктурные филаменты и трубочки. В культуре клеток он формирует включения 2-х типов: внутриплазматические (РНК-положительные) и внутриядерные (ДНК-положительные). Все шт вируса КЛО образуют бляшки. Вирус в инфицированной культуре клеток формирует внутркл., включения, которые выявляются через 12-16 ч после заражения.

ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ

Источники и пути передачи инфекции. КЛО носит сезонный характер и совпадает с наибольшей активностью насекомых. Основным переносчиком возбудителя служат мокре­цы (C.variipennis), которые могут переносить также и вакцинный вирус от привитых живот­ных не привитым. Мокрецы Culicoides распространены почти повсемес.тно. Они воспринимают вирусы любого АГ типа, а передают только те, к которым в данный момент животное наиболее восприимчиво. В распространении болезни могут участвовать комары некоторых видов (Aedes lineftopennis), кровососки (Melophagus ovinus) и, возможно, птицы. Перелетные птицы могут быть промежуточным звеном, через которое осуществляется не­прямая трансмиссия вируса от вирусоносителей к восприимчивым животным. Этим, воз­можно, объясняется внезапное начало некоторых эпизоотий. Обычно погибает от 2 до 30% овец, но иногда летальность достигает 90-100%. Из диких животных распространять вирус и поддерживать инфекцию могут большерогие овцы, белохвостые олени. Мокрецы C.variipennis питаются, в основном, на КРС, хотя при благоприятных условиях (при резком увеличении популяции переносчиков или недостаточном количестве КРС) могут питаться на других случайных хозяевах, и в том числе на овцах, вызывая заболевание. КРС считают  значительным резервуаром вируса КЛО в природе.

Спектр патогенности в естественных условиях. В естественных условиях к КЛО наиболее восприимчивы молодые овцы. Овцы европейских пород более чувствительны, чем овцы африканских и азиатских пород. Восприимчив также КРС и козы. Из дикой фауны КЛО болеют белохвостые олени, снежные бараны, антилопы, лоси, большерогие бараны не­которых пород. Во время эпизоотии КЛО вирус удавалось также выделить из организма ди­ких грызунов. Считают, что дикие животные и грызуны могут быть резервуарами вируса в природе. Важное значение в прекращении вирусоносительства у овец играют клеточные факторы иммунитета. Есть корреляция между интенсивностью реакций клеточного иммунитета и устойчивостью к контрольному заражению.

Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Клинические прояв­ления болезни и морфологические изменения варьируют в зависимости от патогенности штамма, индивидуальных особенностей и породы животных, влияния окружающих условий (метеорологические факторы, солнечная радиация и т.д.). Инкубационный период в естест­венных условиях длится 6-8 дн. Далее повышается температура тела до 40,6-42,0°С и удер­живается на этом уровне 6-8, реже 12 дн. Высота температуры не коррелирует с течением болезни: легкую, перемежающуюся лихорадку можно наблюдать при тяжелом течении и гибели животных. Иногда при внезапном подъеме температуры до 42,2°С можно наблюдать легкое течение болезни и быстрое выздоровление. Через 24-36 ч после повышения темпера­туры тела развивается конъюнктивит. Кожа морды, губ, слизистые оболочки ротовой и но­совой полостей гиперемированы. Из ротовой полости заметно истечение пенистой слюны, что вызывается своеобразными непрерывными движениями языка (влажная морда), а на слизистой носовой полости, и конъюнктиве появляются точечные кровоизлияния. Часто из­меняется цвет языка. Он становится красно-синим, что и определило название болезни. Слизистая оболочка десен, щек, языка изъязвляется и образуются неправильной формы кровоточащие поверхности. Носовые истечения становятся гнойными и засыхают корочками вокруг носа. Из-за боли в ротовой полости животные не принимают корм и чаще лежат. Иногда при повышенной температуре, но чаще после спада её на задних конечностях наблюдают покраснение и опухание венчика, болезненного при надавливании. Животные хромают, передвигаются с трудом, походка связанная. Неспособность принимать корм, наличие специфических поражений в мышцах ног ведет к истощению. В таком со­стоянии оно может быть в течение 10 дн, затем следует состояние прострации и гибель. Ес­ли животное выживает, то через 3-4 нед. после нормализации температуры начинает выпа­дать шерсть. Суягные овцы часто абортируют или рожают очень маленьких и слабых ягнят. Продолжительность болезни разная. Заметное улучшение наступает не ранее 10-15 дн после понижения температуры тела. Особенно тяжело болеют ягнята. У некоторых из них может развиваться пневмония, вызванная секундарной микрофлорой, заканчивающаяся ги­белью. При подостром течении болезни описанные выше признаки менее выражены. Отме­чают воспаление слизистых оболочек, небольшой отек тканей головы, истощение, выпаде­ние шерсти. Иногда болезнь протекает в абортивной форме. У КРС болезнь наблюдается как латентная инфекция, особенно в энзоотических зонах, и только у 5% инфицированных во время эпизоотии животных болезнь клинически выражена. При первичном возникнове­нии симптомы болезни напоминают ящур. При вскрытии подкожная клетчатка и межмышечная ткань отечны, пропитаны желтова­той жидкостью. Отечна также ткань губ, языка, глотки, гортани и межчелюстной области. Отечная жидкость студениста или с примес.ью крови. Эту жидкость можно обнаружить так­же в грудной и брюшной полостях и в перикарде. Если животное пало в период острого те­чения болезни, то большие изменения находят в пищеварительной системе: слизистая обо­лочка ротовой полости гиперемирована, отечна, цианотична, покрыта кровоизлияниями. На губах, языке, внутренней поверхности щек обнаруживают язвы. Слизистые оболочки рубца, сетки, сычуга, пищевода, тонкого отдела кишечника гиперемированы, с кровоизлияниями. Селезенка увеличена. Лимфоузлы, особенно заглоточные, подчелюстные, шейные, предлопаточные, мезентериальные несколько увеличены, покрасневшие, на разрезе отеч­ные. Межмышечная соединительная ткань отечна, фасции пропитаны красноватой, желатинозной жидкостью. Гистологические изменения находят, главным образом, в слизистых оболочках ЖКТ, скелетных мышцах, сосудистой системе.

                                           ДИАГНОСТИКА

Диагноз ставят на основании эпизоотологических данных, симптомов болезни, патоморфологических изменений и результатов лабораторных исследований. Для окончательно­го диагноза проводят выделение вируса, его идентификацию и ставят биопробу. Для выде­ления вируса более чувствительны 10-11-дн КЭ, заражаемые на ХАО или внутривенно про­бами испытуемой крови, обработанной ультразвуком. Выделенный вирус идентифицируют в РН, применяя типоспецифические сыворотки. Для быстрого обнаружения вируса рекомен­дуется ИФ в культуре клеток. Показано, что РН по бляшкам более чувствительна, чем РСК и РДП. С помощью РСК удается выявлять AT в сыворотке крови овец и КРС в эндемических районах.

  Предложен непрямой вариант ИФА для серологической диагностики блутанга. Оконча­тельная диагностика КЛО, которая часто протекает субклинически у домашних и диких жи­вотных, может быть проведена только лабораторными методами выделения вируса, выявле­ния АГ, нуклеиновых кислот вируса и AT. Вирус выделяют из компонентов крови, в основ­ном из эритроцитов, отобранных у животных во время лихорадочной реакции. Исследуемый материал вводят в КЭ и проводят пассаж в культуре клеток (ВНК -21, Vero).

Для идентификации вирусных АГ используют ИФ, РН, ИЭМ с применением монАТ и ИФА. Для выявления нуклеиновых кислот делают гибридизационный анализ и ПЦР. AT обнаруживают в РДП в агарозе и в конкурентном ИФА. Последняя реакция с использовани­ем вирусспецифических монАТ является более чувствительным и специфичным методом обнаружения AT к КЛО. РН в культуре клеток служит наиболее общепринятым методом выявления типоспецифических AT. Во ВНИИЗЖ  получены монАТ для постанов­ки ингибирования ТФ ИФА.

КЛО необходимо дифференцировать от ящура, контагиозного пустулезного дерматита (эктимы), оспы, везикулярного стоматита, злокачественной катаральной лихорадки, сердеч­ной водянки, болезни Найроби, лихорадки долины Рифт и некробациллеза.

ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА

Переболевшие овцы приобретают пожизненный иммунитет к вирусу, вызвавшему забо­левание. Возможна реинфекция другого типа вирусом в течение того же сезона или на сле­дующий год. Активный иммунитет у реконвалесцентов сопровождается образованием ВНА и КСА. На введение живых вакцин у овец появляются ВНА в низких титрах. Однако такие животные через 10 дн становятся резистентными также к вирулентному вирусу. У вакцини­рованных овец появляются КСА в низких титрах. Ягнята, родившиеся от иммунных овце­маток, обладают до 3-6 мес.. пассивным колостральным иммунитетом, который интерфери­рует с активной иммунологической реакцией в ответ на введение вирус-вакцины. Для иммунизации овец против КЛО применяют живую поливакцину Александера (1947г.), состоящую из 4-х штаммов вируса (Кипр, Эстанция, Блоукоп и Тейлор), аттенуированных путем серийных пассажей в КЭ и при пониженной температуре. В последние годы в ЮАР изготовлена вакцина из 14 различных АГ- типов вируса, выращенных в культуре клеток почки ягнят и эмбрионов КРС. Вакцину вводят подкожно в дозе 1-2 мл. Иммунитет продолжительностью до 1 года наступает через 10 дн. Вакцинируют овец в начале лета, по­сле стрижки. Есть сообщения о возможной риверсибельности выпускаемых вакцин через насекомых переносчиков. Имеющиеся в настоящее время моно- и поливакцины не удовле­творяют требованиям из-за одновременной активной циркуляции в энзоотических районах нескольких иммунологически различных АГ типов вируса.

Предложена инактивированная β-пропиолактоновая вакцина. Доза вакцины 5-20 мл в составе масляной эмульсии, содержащей драксол, арлацел А и 2% твин-80. AT появляются на 8-10 день, достигают максимума к 14-му дн (1:640) и сохраняются в течение года. Бивалентную инактивированную вакцину готовят против вируса 3-4-х типов.  В связи с высокой реактогенностью живых вакцин и возможной реверсией вирулентно­сти аттенуированных штаммов в организме переносчиков и возможным появлением рекомбинантных штаммов (рестрикция генов), особенно в случае применения поливакцин, пред­почтение стали отдавать инактивированным вакцинам. Безопасная вакцина против КЛО впервые была разработана вСССР. Наиболее продуктивным оказалось выращивание вируса КЛО в суспензии клеток ВНК-21, с использованием в качестве инактиванта - формалина и адъювантов - ГОА (3 мг/мл) и сапонина (1 мг/мл). Устойчивость к заражению овцы приобретали спустя 2 нед. после однократной прививки в дозе 2,0 мл. Вакцина сохраняла иммуногенные свойства 21-24 мес.. Иммуни­тет у вакцинированных овец был не менее года. У  животных обна­руживали ВНА в разведении 1:8-1:16, которые сохранялись в течение года. КСА у таких животных не обнаруживали, что дает возможность отличать больных овец от вакцинированных. Инактивация вируса КЛО диэтиленимином (0,04-0,06%-ным), при температуре 37°С, в течение 3-5 дн дала возможность получить безопасные высокоиммуногенные препараты. Разработан метод выделения и очистки белка Р2 этого вируса (моно- или двухвалентными солями). При очистке сохраняется иммунологическая специфичность Р-2. Вакцинированные белком Р-2 овцы защищены против вирулентного штамма вируса.

Ветеринарно – санитарная оценка продукции – больных и подозрительных по данному заболеванию на убой на пищевые цели не допускается.

Семейство: Bunyaviridae.

Таксономическая структура семейства.

Семейство: Bunyaviridae

           Род:        Bunyavirus, Hantavirus, Nairovirus, Phlebovirus, Tospovirus.

Характеристика вириона. Морфология. Вирион сферический или плеоморфный (диаметр 80-120 нм), имеет липидную оболочку (толщиной 5 нм), от которой отходят поверхностные гликопротеиновые выступы длиной 5-10 нм. Оболочка вириона происходит из мембран аппарата Гольджи (или, реже, поверхностной мембраны клетки). Рибонуклеокапсид спиральный, диаметром 2-2,5 нм и длиной 200-3000 нм. Mr (вирион) 300-400 x 10⁶, плавучая плотность в сахарозе 1,16-1,18 г/см³, в CsCl 1,20-1,21 г/см³, S_20w 350-500S. Чувствительны к нагрев, жирорастворителей, детергентов и формальдегида.

Геном. РНК, односпиральная, 3 уникальные молекулы, негативная (или обеих полярностей); общий размер 11-19 kb, Mr 4,8-8,0 x 10⁶, 1-2% массы вириона. Концевые нуклеотиды каждого геномного сегмента комплементарно спарены, что обеспечивает формирование нековалентно закрытых циркулярных РНК. Сегменты геномной РНК обозначаются, в зависимости от размера, L (large-крупный), M (medium-средний) и S (small-мелкий). Концевые последовательности нуклеотидов консервативны в пределах рода. Геномная РНК немодифицирована по 5’-концу. мРНК неполиаденилированы и усечены относительно геномных РНК по 3’-концу; имеют 5’-метилированный кэп и 10-18 нематричных нуклеотидов, которые берут свое происхождение от клеточных мРНК.

Другие компоненты вириона. Все вирусы имеют 4 структурных протеина: 2 внешних гликопротеина (G1 и G2), нуклеокапсидный протеин (N) и крупный транскриптазный протеин (L). Неструктурные протеины, функции которых не ясны, кодируются сегментом РНК S (у бунья-, флебо- и тосповирусов), М (у бунья-,найро-,тоспо-и некоторых флебовирусов). У хантавирусов данных о кодировании ими неструкурных протеинов нет.

                          Предполагаемая Mr (x 10³) вирусных протеинов.

  Липиды составляют 20-30% массы вириона; клеточного происхождения; представлены фосфолипидами, стеролами, жирными кислотами и гликолипидами.

Углеводы составляют 2-7% массы вириона. Аспарагин-связанные сахара протеинов G1 и G2, высокоманнозного типа, если вирус репродуцируется в клетках позвоночных.

Организация генома и репликация. Сегменты геномной РНК L, M и S кодируют, соответственно, вирусную РНК полимеразу (протеин L), оболочечные гликопротеины (G1 и G2) и нуклеокапсидный протеин (N). Протеин L кодируется мРНК, которая комплементарна геномной РНК. Продукты первичной трансляции единственной ORF сегмента РНК M, котрансляционно разрезаются (за исключением найровирусов) с образованием зрелых G1 и G2. Хантавирусы и Уукуниеми-подобные флебовирусы дополнительных протеинов в сегменте М не кодируют. Буньявирусы и другие флебовирусы кодируют неструктурный протеин (NSm) в смысловой РНК, комплементарной геномной. Найровирусы кодируют не менее 2-х неструкутрных протеинов, которые являются предшественниками вирусных гликопротеинов. Тосповирусы кодируют протеин NSm в ORF, имеющей стратегию трансляции с обеих комплементарных цепей (ambisense ORF), по 5’-концу вирионной смысловой РНК. Ханта- и найровирусы дополнительных протеинов в сегменте S не кодируют. Буньявирусы кодируют неструкутрный протеин NSs в ORF, перекрывающей рамку считывания N, в 3’-части смысловой вирионной S РНК. Флебо- и тосповирусы кодируют протеин NSs в ORF, имеющей стратегию трансляции с обеих комплементарных цепей (ambisense ORF), по 5’-части вирионной смысловой S РНК. Нет данных, свидетельствующих об одинаковых функциях одноименных неструктурных протеинов вирусов, относящихся к разным родам.

Все этапы репликации происходят в цитоплазме. Выделяют 9 основных этапов.

1. Прикрепление, опосредованное взаимодействием одного или обоих интегративных вирусных протеинов с клеточными рецепторами.

2. Этап проникновения и раздевания происходит по принципу эндоцитоза вириона с последующим слиянием вирусных и эндосомальных мембран.

3. Первичная транскрипция, включающая синтез мРНК, комплементарных геномным матрицам, посредством вирион-ассоциированной полимеразы, с использованием кэпированных праймеров клеточного происхождения.

4. Трансляция первичных мРНК сегментов L, S свободными рибосомами и мРНК сегмента М мембраносвязанными рибосомами с первичным гликозилированием поверхностных протеинов. Котрансляционное разрезание протеина-предшественника с образованием протеинов G1 и G2, и, для некот  вирусов, NSm.

5. Синтез и инкапсидация антигеномных РНК, служащих матрицами для геномной РНК или, в некоторых случаях, для субгеномных мРНК.

6. Репликация генома.

7. Вторичная транскрипция, включающая амплифицированный синтез мРНК и транскрипцию в обоих направлениях (ambisense transcription).

8. Морфогенез, включающий аккумулирование протеинов G1 и G2 в аппарате Гольджи, терминальное гликозилирование, приобретение модифицировнной мембраны клетки (обычно путем почкования внутрь цистерн аппарата Гольджи).  Почкование через клеточную мембрану встречается у вирусов лихорадки Долины Рифт (Rift Valley fever virus, Phlebovirus) и Син Номбре (Sin Nombre virus, Hantavirus), репродуцирующихся в поляризованных эпителиальных клетках.

9. Слияние цитоплазматических везикул с плазматической мембраной и высвобождение зрелых вирионов.

Антигенные свойства. Один или оба оболочечных гликопротеина несут антигенные детерминанты, участвующие в гемагглютинации и РН. Антигенные детерминанты, участвующие в РСК обнаруживаются у нуклеокапсидного протеина.

Биологические особенности. Вирусы родов Bunyavirus, Nairovirus и Phlebovirus способны к репродукции в позвоночных и членистоногих и, обычно, обладают цитолитической активностью для клеток позвоночных, тогда как при репродукции в клетках членистоногих переносчиков цитопатогенность проявляется слабо или не наблюдается совсем. Вирусы распространяются москитами, клещами, кровососущими мухами и др. Некоторые вирусы имеют очень узкий круг хозяев, особенно переносчиков. Для хантавирусов членистоногих переносчиков не найдено. Для некоторых вирусов, передающихся москитами показана трансовариальная и половая передача. Для некоторых вирусов показана возможность аэрозольной передачи, тогда как для других такой путь является основным, например, для хантавирусов. Некоторые вирусы вызывают снижение синтеза компонентов в клетках позвоночных. Для хантавирусов данное свойство не показано, и в восприимчивых клетках инфекция протекает персистентно, без цитолитического эффекта, что наблюдается при бессимптомном носительстве у их естественных хозяев – грызунов. При естественной инфекции у млекопитающих отмечается тропизм вирусов к определенным органам или типам клеток. Некоторые вирусы обусловливают слияние клеток при низких значениях рН. Некоторые вирусы проявляют ионозависимую гемагглютинирующую активность. Генетическая реассортация была показана для некоторых вирусов как in vitro, так и in vivo.

Род: Bunyavirus. Типовой вид: Bunyamwera virus (BUNV) (вирус Буньямвера).

 Характерные особенности. Консенсусными терминальными нуклеотидными последовательностями сегментов генома L, M и S являются UCAUCACAUGA… по 3’-концу и AGUAGUGUGCU… по 5’-концу. Протеины N и NSs кодируются в перекрывающейся рамке считывания сегмента РНК S и транслируются с соответствующей комплементарной мРНК с альтернативных инициирующих кодонов AUG. Оба гликопротеина и протеин NSm (Mr 15-18 х 10³) кодируются как полипротеин-предшественник сегментом РНК М. Генетическая реассортация была показана между вирусами одного вида, но не между вирусами разных видов.

С вирусами других родов серологического родства не выявлено. Большинство вирусов переносится москитами, хотя некоторые (например, группы Tete) переносятся клещами. В редких случаях, вирусы могут распространяться флеботомусами или другими кровососущими насекомыми (culicoid flies). Некоторые вирусы передаются у членистоногих трансовариально.

Критерии подразделения на виды внутри рода. Подразделение буньявирусов на виды затруднено, нет данных по биохимическим характеристикам.Виды различаются на основе серологических критериев (реакция перекрестной нейтрализации и перекрестной ингибиции гемагглютинации). Аминокислотные сиквенсы протеина N различаются более чем на 10%.Описано 178 буньявирусов, официальный статус вида имеют 47.

Виды (47 видов)*:

Примечание: * - в связи с тем, что названия большинства вирусов берут свое начало от географического названия места его выделения, использование названий в русской транскрипции не всегда уместны.

Предполагаемые виды (4): Kaeng Khoi virus (KKV) (переносчики: клопы), Leanier virus (LEAV) (переносчики: москиты), Mojui Dos Campos virus (MDCV) (переносчики: не известны),Termeil virus (TERV) (переносчики: москиты).

Род: Hantavirus. Типовой вид: Hantaan virus (HTNV) (вирус Хантаан).

  Характерные особенности. Консенсунсными терминальными нуклеотидными последовательностями сегментов генома L, M и S являются AUCAUCAUCUG… по 3’-концу и UAGUAGUA… по 5’-концу. Неструктурные полипептиды не кодируются ни одним из сегментов. С вирусами других родов серологического родства не выявлено. Отдельные хантавирусы являются этиологическими агентами геморрагической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПС) или хантавирусного пульмонарного синдрома (ХПС). Естественными хозяевами являются грызуны; генетически различные хантавирусы обычно ассоциируются с определенными видами грызунов. У человека хантавирусная инфекция является тупиковой в распространении возбудителя, за исключением недавно описанного случая передачи Andes virus от человека человеку. В отличие от других вирусов семейства хантавирусы не передаются членистоногими, а распространение инфекции у людей и грызунов происходит через контакт (воздушно-капельным путем) с секретами и экскретами инфицированных грызунов (реже при укусах). В культурах клеток позвоночных хантавирусы не вызывают детектируемой цитопатологии, а у грызунов обусловливают персистентную латентно протекающую инфекцию.

Критерии подразделения на виды внутри рода. Виды занимают уникальные экологические ниши (то есть естественными хозяевами и резервуарами вируса в природе являются определенные виды или подвиды грызунов). Виды различаются более чем на 7% по аминокислотному сиквенсу предшественника гликопротеинов и по нуклеокапсиду. Виды проявляют не меньше, чем четырехкратные различия в реакции перекрестной нейтрализации (друг с другом). В естественных условиях вирусы одного вида не образуют реассортантов с вирусами другого вида, однако, в экспериментальных условиях такие факты отмечались. Всего описано 63 вируса, относящихся к данному роду, из которых официальный статус вида имеют 22. Предполагаемых видов не описано.

Виды (22 вида)*:

Примечание: * - в связи с тем, что названия большинства вирусов берут свое начало от географического названия места его выделения, использование названий в русской транскрипции не всегда уместны.

Род: Nairovirus. Типовой вид: Dugbe virus (DUGV).

Характерные особенности. Морфологические характеристики вириона сходны с представителей семейства, мелкие поверхностные выступы (длиной 7 нм) образуют периферическую бахрому. Сегмент РНК L (размер 12,2 kb) значительно больше по размеру, чем аналогичный сегмент вирусов других родов. Консенсусными терминальными нуклеотидными последовательностями сегментов генома L, M и S являются AGAGUUUCU… по 3’-концу и UCUCAAAGA… по 5’-концу. Cегмент РНК S неструктурные протеины не кодирует. Сегмент М кодирует один продукт, который процессируется в структурные гликопротеины. Идентифицировано 3 неструктурных протеина, 2 из которых являются предшественниками гликопротеинов. Протеин L имеет значительно больший расчетный размер, чем у аналогичных протеинов вирусов других родов. С вирусами других родов серологического родства не выявлено. Большинство вирусов передается клещами: вирусы групп CCHF, NSD и SAK передаются, в основном, иксодовыми клещами, тогда как вирусы групп DGK, HUG и QYB – аргасовыми. Некоторые вирусы передаются у членистоногих трансовариально.

Критерии подразделения на виды внутри рода. Ввиду недостаточности биохимических данных найровирусы подразделяются только на основе серологических характеристик. Всего официально идентифицировано 8 видов вирусов, представленных 35 штаммами (изолятами). Предполагаемые виды: нет.

Виды (8 видов):

Род: Phlebovirus. Типовой : Rift Valley fever virus (RVFV) (вирус лихорадки ДолиныРифт).

Характерные особенности. Поверхностная структура флебовирусов отличается наличием мелких округлых субъединиц с центрально расположенной ямкой (отверстием). Консенсусными терминальными нуклеотидными последовательностями сегментов генома L, M и S являются UGUGUUUC… по 3’-концу и ACACAAAG… по 5’-концу. Cегмент РНК S имеет стратегию кодирования по цепям любой полярности (ambisense coding strategy), то есть транскрибируется вирусной полимеразой в субгеномную комплементарную смысловую РНК, кодирующую протеин N, и из полноразмерной антигеномной S РНК в субгеномную смысловую вирусную мРНК, кодирующую неструкутрный протеин (NSs). Сегмент М вирусов группы песчаных лихорадок, но не вирусов группы Уукуниеми (Uukuniemi virus, UUKV), имеют участок, кодирующий прегликопротеин, в котором закодирован неструктурный протеин (-ы) (NSm). Одинаковый размер протеинов G1 и G2 объясняется различным порядком G1:G2 в сегменте М у разных вирусов. С вирусами других родов серологического родства не выявлено, но между вирусами данного рода прослеживается перекрестная активность, проявляющаяся в разной степени. Вирусы группы песчаных лихорадок передаются флеботомусами, москитами, кератопогонидами рода Culicoides; вирусы группы Уукуниеми – клещами.

Критерии подразделения на виды внутри рода. Ввиду недостаточности биохимических данных флебовирусы подразделяются только на основе анализа серологического родства и не менее чем 4-х кратного различия в реакции перекрестной нейтрализации (между собой).

Виды (9 видов)*:

Примечание: * - в связи с тем, что названия большинства вирусов берут свое начало от географического названия места его выделения, использование названий в русской транскрипции не всегда уместны. Предполагаемые виды (16):

Род: Tospovirus. Типовой вид: Tomato spotted wilt virus (TSWV).

Ещё посмотрите лекцию "9. Время и место возникновения H.sapiens" по этой теме.

Характерные особенности. Консенсусными терминальными нуклеотидными последовательностями сегментов генома L, M и S являются UCUCGUUA… по 3’-концу и AGAGCAAU… по 5’-концу. Cегменты РНК М и S имеют стратегию кодирования по цепям любой полярности (ambisense coding strategy): протеины G1 и G2 кодируются комплементарной смысловой М РНК, а NSs – геномной смысловой РНК; нуклеокапсидный протеин кодируется комплементарной смысловой S РНК, а неструктурный протеин NSs кодируется геномной смысловой S РНК. Протеин NSm играет роль в распространении вируса от клетке к клетке, а протеин NSs образует паракристалические или нитевидные включения в инфицированных клетках растений.

Инфицируют растения. Тосповирусы переносятся как минимум 8-ю видами переносчиков(thrips). Гликопротеины G1 и G2 участвуют во взаимодействии вируса и переносчика. Распространение вирусов может быть и через инфицированный сок растений. К типовому виду Tomato spotted wilt virus (TSWV) восприимчивы более 925 видов растений, относящихся к 70 ботаническим семействам, тогда как к другим тосповирусам восприимчиво значительно меньшее количество видов растений. Виды подразделяются на основе различий в спектре переносчиков, видов растений-хозяев, по серологическому родству (по протеину N). Идентичность тосповирусов по аминокислотному сиквенсу протеина N составляет менее 90%.

Виды: официальный статус имеют 8 видов, статус предполагаемых - 5.

 Неклассифицированные вирусы семейства: 7 групп (19 вирусов) и 22 негруппированных вируса. Недостаток данных не дает возможности отнести их к уже известным родам данного семейства.

Филогенетическое родство внутри семейства. Аналогичные гены и продукты генов вирусов, относящихся к разным родам данного семейства, значительно отличаются по размеру и общего сходства по нуклеотидному или аминокислотному составу не наблюдается. Попытки проведения консенсусного элайнмента по тем или иным сегментам генома или струкутрным протеинам, по которым можно было бы построить филогенетические деревья, оказались безуспешными, за исключением предполагаемого полимеразного домена протеинов L. Такой анализ показал, что все вирусы данного семейства можно подразделить на 2 группы, каждая из которых имеет свою эволюционную историю: к одной группе относятся бунья-, ханта- и тосповирусы, к другой – найро- и флебовирусы. Необходимо отметить, что филогенетический анализ по протеину L не приемлем, если учитывать стратегию кодирования с комплементарных цепей