Диссертация (Перспективы использования полиморфизма генов для определения прогноза и тактики лечения больных артериальной гипертензией), страница 9

Вопросы в анкете SF-36 состоят из 8разделов: физическая активность, ролевая деятельность, выраженность болевогосиндрома,общеездоровье,жизнеспособность,социальныйстатус,51эмоциональный статус, психическое здоровье, которые в итоге группируются вдве основные составляющие: физическое и психологическое благополучие.Каждый из них оценивается в баллах от 0 до 100.

Нами оценивались показателипо общему здоровью до и после лечения.Состояние ССС оценивали с помощью комплекса функциональных методовисследования: измерение АД по методу Короткова (в положении сидя, после 5минутногоотдыха,триждысрасчетомсреднегозначения);электрокардиографическое обследование (ЭКГ) в 12 общепринятых отведениях,эхокардиографию (ЭхоКГ), суточное мониторирование артериального давления(СМАД), оценка состояния сосудистой стенки.2.2.2 Электрокардиографическое обследованиеДля регистрации электрокардиограммы в 12-ти стандартных отведенияхиспользовали 3-х канальный электрокардиограф «Луч» (ОАО «Монитор», Ростовна-Дону).ЭКГ-признакиамплитудныхГЛЖЭКГ-критериевопределяли(индекснаоснованииСоколова-ЛайонаобщепринятыхиКорнельскийвольтажный индекс).2.2.3. Эхокардиографическое исследованиеДля оценки состояния ЛЖ проводили эхокардиографическое исследованиена приборе «Acuson-128 X » фирмы «Acuson Corporation» (США) в двухмерном иМ-модальном режимах с использованием доплерографии в постоянно-волновомрежимеипоследующимопределениемстандартногонабораэхокардиографических показателей.2.2.4.

Ультразвуковое исследование экстракраниальных отделовбрахиоцефальных артерийИсследование проводили на ультразвуковом аппарате ACUSON-128XP/10(США) линейным датчиком с частотным диапазоном 5,5-7,5 МГц.52Толщину комплекса интима-медиа (ТКИМ) измеряли по методике,предложенной P.Pignolli (1986). Согласно национальным рекомендациям ВНОК(2011) и ESH/ESC (2018) за утолщение КИМ принимали значения в пределах 0,91,3 мм. Фокальное утолщение стенки артерий со стороны просвета более 1,3 ммсчиталось свидетельством наличия атеросклеротической бляшки.2.2.5.

Ультразвуковое исследование почекУЗИ почек проводили для оценки их размеров, структуры, врожденныханомалий, наличия мочекаменной болезни (МКБ), с целью исключения вторичнойАГ. Исследование проводилина приборе «Acuson-128 X » фирмы «AcusonCorporation» (США). За нормальные значения почки принимали: толщину органа40-50 мм, ширину 50-60 мм, длину 100-120 мм, толщину паренхимы почки до 23мм.2.2.6. Суточное мониторирование артериального давленияНесмотря на то, что основным методом выявления повышенного давления иоценки эффективности проводимой терапии в настоящее время остается метод 3-хкратного определение АД по методу Н.С. Короткова (1905 г.), адекватнымспособом оценки АД являются самоконтроль АД пациентов (СКАД) в течениедня и СМАД [106].

Следует отметить, что проведение СМАД позволяет получитьважный объем дополнительной информации о характере АГ, а также оценитьвероятностный прогноз.В ходе исследовании всем пациентам выполняли СМАД с использованиемаппарата «ВPlab» («Петр Телегин», Нижний Новгород), позволяющего определятьосновные информативные показатели суточного профиля АД.2.2.7. Определение ригидности сосудистой стенкиВ настоящее время имеется достаточно данных, свидетельствующих оважностиопределенияхарактеризующегоригидности артериальнойсосудистоеремоделированиестенкикак показателя,[68,143,199].Нарядусо53специальными инвазивными методами (прямые внутриартериальные) существуюти неинвазивные методы определения биомеханических характеристик артерий[68].

Наиболее доступными на данный момент являются косвенные методыопределения региональной ригидности сосудистой стенки, в первую очередьметод определения скорости распространения по магистральным сосудампульсовой волны давления [68].В данном исследовании с целью определения жесткости сосудистой стенкииспользован портативный прибор PulseTrace PCA 2 (Великобритания). Приборпозволяет рассчитать индекс ригидности (SI) и индекс отражения (RI). Индексригидности рассчитывается как отношение роста ко времени распространенияпульсовой волны от нижней части тела до пальца руки [68].

Этот показательнаходится в тесной корреляции с параметром скорости пульсовой волны (СПВ) иотражает жесткость артериальной стенки: чем выше СПВ, тем больше жесткость.Повышенными считаются значения СПВ, выше 10 м/сек.Индекс отражения – параметр, позволяющий измерить сосудистый тонусмелких мышечных артерий и оценить эндотелиальную функцию сосудов.Индексотражениярассчитываетсякакпроцентотношенияамплитудыдиастолического пика к амплитуде систолического пика пульса [68]. Нормальнаявеличина индекса отражения не больше 30%. О высоком тонусе мелкихмышечных артерий говорит повышение значения индекса отражения от 50% иболее.Кроме указанных показателей, автоматически определялся биологическийвозраст артерий (VA), тесно коррелирующий с величиной СПВ.2.2.8.

Молекулярно-генетическое исследование. Определение полиморфизмовгенов-кандидатовВсем пациентам было выполнено молекулярно-генетическое исследованиепо определению 9-ти вариантов полиморфизма генов, участвующих в патогенезеАГ: ADD1 (G1378T), AGT (T704C), AGT (C521T), AGTR1 (A1166C), AGTR2(G1675A), CYP11B2 (C-344T), GNB3(C825T), NOS3 (T-786C), NOS3 (G894T).54В качестве клинического материала для определения генетическогополиморфизма использовался образец ДНК, выделенный из венозной кровипациента. Для забора крови использовали стерильные пробирки с добавлениемантикоагулянта.АмплификациюамплификатореДТполиморфных96участковпроизводствогеновДНК-технологиипроводили(Россия),наспособопределения вариантов – полимеразно-цепная реакция с детекцией результатов врежиме реального времени с использованием комплекта реагентов ПРОБА-ГСГЕНЕТИКА или ПРОБА-РАПИД-ГЕНЕТИКА (ООО «НПО ДНК-Технология»).Основываясь на ключевых патогенетических механизмах формированияАГ,определялиполиморфизмгенов,кодирующихкомпонентыРААС,участвующие в эндотелиальной регуляции сосудистого тонуса, участвующие вмембранном ионном транспорте и передаче рецепторного сигнала в клетку.Определениеполиморфизмагеновпроводилосьнабазеклинико-диагностической лаборатории (КДЛ) ГБУ РО «ОКБ №2».Исследуемые полиморфные маркеры АГ представлены в таблице 2.4.Таблица 2.4.

- Исследуемые полиморфные маркеры АГГеныПолиморфные маркерыАнгиотензиноген (AGT)T704C (Met235Thr)T521C (Thr174Met)A1166CРецептор ангиотензина II типа 1(AGTR1)Рецептор ангиотензина II типа 2 (AGTR2)Альдостерон синтетаза (CYP11B2)Ген альфа аддуцина 1(ADD1)Ген b-субъединицы 3 G белка (GNB3)Эндотелиальная NO-синтетаза(NOS3)G1675AT-344CG1378T (Gly460Trp, G460W).С825ТG894T (Glu298Asp)T-786C2.2.9. Статистическая обработка полученных результатовСтатистическая обработка результатов проводилась с использованиемпрограммы управления электронными таблицами Microsoft Excel из пакетапрограмм Microsoft Office XP и Statistica 10 (StatSoft Inc., США). В тексте55количественные данные представлены в виде медианы и квартильного разбросаMe [Q25; Q75], где Me – медиана, а Q25 и Q75 – значения нижнего и верхнегоквартиля соответственно, а также как среднего значения и стандартногоотклонения (M±σ).

При анализе данных придерживались рекомендации учебногопособия по медицинской статистике [102].При обработке данных оценивался характер распределения показателейсогласнокритериюШапиро-Уилка.Значимостьразличийнепрерывныхпоказателей оценивалась с помощью критерия Манна-Уитни, Изменениепоказателей связанных групп (группа больных в динамике, до и после лечения)оценивалось с помощью непараметрического критерия Вилкоксона. Длясравнения бинарных данных использовались точный критерий Фишера и хиквадрат Пирсона. Использовались общепринятые уровни значимости: p<0,05;p<0,01 и p<0,001.Оценка взаимосвязей между различными показателями осуществлялась спомощью корреляционно-регрессионного анализа с использованием коэффициентранговой корреляции Спирмена.

Силу корреляции оценивали по значениюкоэффициента корреляции (r): |r|≤0,25 – слабая корреляция; 0,25<|r|>0,75 –умеренная корреляция; |r|≥0,75 – сильная корреляция. Для анализа связейпоказателей также применялся метод множественной регрессии с формированиемчастных корреляций.Правильность распределения частот генотипов в исследуемой выборке поотношению к популяцииопределяли путем оценки соответствия равновесиюХарди-Вайнберга. В случае выполнения условий равновесия для оценки связиполиморфизма с развитием заболевания использовалась мультипликативнаямодель наследования. При несоответствии полученного распределения геновравновесию Харди-Вайнберга использовалась общая модель наследования,предполагающая расчѐт частот генотипов.Для сравнения частот аллелей и генотипов между различными группамииспользовали критерий 2 с поправкой Йетса. Об ассоциации аллелей илигенотипов с предрасположенностью к заболеваниям судили по величине56отношения шансов (ОШ) с 95%-ым доверительным интервалом (ДИ), при этомзначение ОШ > 1 принимали за положительную ассоциацию, ОШ < 1 — заотрицательную ассоциацию и ОШ = 1 — как отсутствие ассоциации.Для оценки независимости влияния полиморфных генов АГ на рискразвития АГ, ее клинические симптомы и особенности течения использовалиметод логистической регрессии.Для всех видов анализа статистически значимыми считали значения p<0,05.57ГЛАВА 3.РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ3.1.