Автореферат (Роль нарушения оксидативного статуса у больных системной красной волчанкой в развитии факторов риска сердечно-сосудистых заболеваний), страница 3

Значения S(АОА) (медиана и интерквартильный размах) составили для группы больных– 315·103 имп (200·103 – 480·103), для группы контроля 220·103 имп (190·103 – 260·103) (Рис.5).1416003S(АОА)×10 , имп140012001000800600*4002000ПациентыКонтрольРисунок 5. АОА плазмы крови в группе пациентов и группе контроля, *p <0,05Корреляционный анализ не подтвердил наличия связи между уровнем АОА иконцентрацией мочевой кислоты (коэффициент корреляции Спирмена r = 0,02, p = 0,86, nанализируемых пар = 53).Для определения влияния цитостатиков на АОА плазмы крови сравнивали группыбольных, получавших комбинированную терапию цитостатиками и ГКС (n = 25), и больных,получавших монотерапию ГКС (n = 28).В группе больных, получавших комбинированную терапию ГКС с цитостатиками,обнаружено статистически значимое увеличение АОА плазмы крови (p = 0,037 для критерияМанна-Уитни) (Рис. 6).18001600S(АОА)×10 , имп1400312001000800*6004002000Группа,Группа,получавшая цитостатики не получавшая цитостатикиРисунок 6.

АОА плазмы крови в группах пациентов, получавших и не получавших лечениецитостатиками, *p<0,05Для подтверждения версии об антиоксидантных эффектах ЦС, на ми было проведеноисследование in vitro.Висследованииinvitroспомощьюметодики,основаннойнаподавлениихемилюминесценции в системе, генерирующей свободные радикалы водным раствором15препарата соответствующей концентрации, АОА преднизолона составила 14,8±0,5 мкМ, а АОАметотрексата = 3,6±0,1 мкМ в единицах концентрации аскорбата натрия. Таким образом,совокупностьклиническихилабораторныхданныхпозволяетговоритьоналичииантиоксидантных свойств у ГКС и ЦС. Следовательно, можно предположить, что повышениеАОА плазмы крови при терапии цитостатиками связано как с их собственной АОА, так и с ихспособностью вызывать гиперурикемию (эндогенный антиоксидант).Исследование связи иммуновоспалительной реакции и поражения внутреннихорганов с нарушением оксидативного статусаУ больных СКВ с поражением и без поражения внутренних органов показатели радикалпродуцирующей активности нейтрофилов не отличались.

Однако при анализе больных СКВ сволчаночным нефритом (ВН) было обнаружено снижение удельной спонтанной активностинейтрофила у больных активным ВН с нефротическим синдромом (НС) по сравнению сбольными активными формами ВН без НС (p = 0,045) (Рис.7).0.9Асп*, ×10–2 имп/(с*кл)0.80.70.60.50.40.3*0.20.10Группа АГруппа ВРисунок 7. Удельная спонтанная активность нейтрофила в группе с активным ВН с НС(Группа А) и группе с активными формами нефрита без НС (Группа В), *p <0,05У больных с различной степенью активности заболевания, оцененной с помощьюиндекса SLEDAI, показатели функциональной активности нейтрофилов статистически значимоне отличались.В группах больных СКВ с различным повреждением органов: значительным,минимальным или его отсутствием, оцененным с помощью индекса SDI, также не былоотмечено статистически значимых отличий исследуемых параметров.16Между больными СКВ, получающими активную иммуносупрессивную терапию иподдерживающее лечение, не было обнаружено статистически значимого отличия.В объединённой выборке больных была выявлена корреляция коэффициента затуханияреспираторного взрыва нейтрофилов с уровнем СОЭ (коэффициент корреляции Спирмена r =0,36, p = 0,02, n анализируемых пар = 53).Корреляциипоказателейфункциональнойактивностинейтрофиловсдругимипараметрами, отражающими иммунологическую активность заболевания (СРБ, фибриноген,антитела к ДНК, компоненты системы комплемента) не были обнаружены.Всоответствииспредположениемопраймированномцитокинамисостояниинейтрофилов, при котором происходит увеличение их потенциальной функциональнойактивности, обеспечивающим переход с начального уровня с низкой скоростью протеканиябиохимических процессов в активированное состояние, проведено воздействие естественнымистимулами (ИЛ-1β, ГКС-Ф) на нейтрофилы образцов крови 5 больных.

На первом этапе присравнении со здоровыми донорами в ответ на стимуляцию только ИЛ-1β во всех случаяхнаблюдали выраженный хемилюминесцентный ответ нейтрофилов (вид типичной кривойпредставлен на Рис. 7; 1̅ *доноров = 2,52×103, имп/с (n = 6), 1̅ *больных СКВ = 4,53×103, имп/с(n = 6); p <0,05). При предварительной стимуляции ИЛ-1β отмечали двухфазное праймирующеедействие этого цитокина после воздействия основного стимула ФМЛФ, при этом у здоровыхдоноров данный эффект был выражен слабо (Рис. 7).

Полученные данные свидетельствуют отом, что у больных СКВ ИЛ-1β является как выраженным стимулом, так и праймирующимагентом.181614I(ХЛ)×103, имп/с121086420-2 050ФМА100ФМА+ФМЛФ150200ИЛ-1β250300ИЛ-1β+ФМЛФt, минРисунок 8. Хемилюминесцентный ответ нейтрофилов крови больного СКВ С. на стимуляциюФМА, ФМА+ФМЛФ, ИЛ-1β, ИЛ-1β + ФМЛФ.17При стимуляции ГКС-Ф были получены сопоставимые эффекты в группе здоровых ибольных (1̅ *доноров = 1,12× 103, имп/с (n = 6), 1̅ *больных СКВ = 1,27×103, имп/с (n = 6); p =0,13).При исследовании связи иммуновоспалительной реакции и поражения внутреннихорганов с долей окисленного альбумина обнаружено, что уровень общей триптофановойфлуоресценции безглобулиновой плазмы крови отражает содержание в ней ЦИК.

Параметррассчитывают следующим образом: Trp*(САЧ+ЦИК) = I*trpреал/I0 trp теор,где I*trpинтенсивность флуоресценции безглобулиновой плазмы при 353 нм (λ ex=260 нм), I0реалtrp теор——интенсивность флуоресценции триптофана, соответствующая концентрации альбумина,определенной биохимическим методом. Таким образом, он может быть использован в качествеэкспрессного показателя, отражающего общую триптофановую флуоресценцию образцаплазмы крови, зависящую от количества остатков триптофана, содержащихся в ЦИК иальбумине.Уровень триптофановой флуоресценции безглобулиновой плазмы крови, отражающейинтенсивность образования ЦИК, значимо выше в группе с поражением внутренних органов (n= 33, среднее Trp* 2,21, s = 0,53), по сравнению с группой без поражения внутренних органов(n = 20, среднее Trp* 1,83, s = 0,60) (p = 0,032); в группе пациентов с активным ВН (n = 28,среднее Trp* 2,24, s =0,55), по сравнению с пациентами без поражения почек (p = 0,030);коррелирует с концентрацией антител к ДНК (коэффициент корреляции Спирмена r = 0,39, p =0,008, n анализируемых пар = 53) (p = 0,008) и значимо выше в группе получающих активнуюиммуносупрессивную терапию (n = 12, среднее Trp* 2,43, s =0,58), по сравнению с группой,получающей поддерживающую терапию (n = 41, среднее Trp* 1,96, s = 0,53) (p = 0,01).Проведено исследование связи иммуновоспалительной реакции и поражения внутреннихорганов с уровнем АОА плазмы крови.

При сопоставлении АОА плазмы крови между группамибольных СКВ с различной выраженностью повреждения внутренних органов и активностизаболевания статистически значимого отличия обнаружено не было. При сравнении группбольных СКВ, разделенных в зависимости от наличия поражения внутренних органов, а такжехарактера поражения почек, также не было обнаружено статистически значимого отличия.Исследование частоты сердечно-сосудистых заболеваний и гиперлипидемии вгруппе больных СКВЧастота сердечно-сосудистых осложнений в исследуемой группе составила 13,2% (7больных из них 3 больных с атеросклерозом периферических артерий, 1 больной с цереброваскулярной болезнью, атеросклерозом сонных артерий, 2 больных с ИБС, 1 больной с ИМ),18гиперлипидемия (повышение общего холестерина (6,0 (2,1)) или триглицеридов (2,2 (1,4))отмечена у 36% обследованных больных, что значимо выше чем в популяции в целом, при томчто возраст выборки составил 34,2 (11,5) года.Проведен анализ корреляции показателей функциональной активности нейтрофилов(удельного уровня спонтанной ХЛ, удельной пиковой активности нейтрофила, удельнойинтегральной активности нейтрофила и коэффициента затухания респираторного взрыва) убольных СКВ с факторами риска сердечно-сосудистых заболеваний: возраста, длительностизаболевания, уровня артериальной гипертензии, показателей липидного спектра (ЛПВП, ЛПНП,триглицериды, общий холестерин), СРБ, СОЭ.В группе больных СКВ была выявлена положительная корреляционная связь удельнойинтегральной активности нейтрофила с концентрацией общего холестерина сыворотки крови(коэффициент корреляции Спирмена r = 0,35, p = 0,03, n анализируемых пар = 53) (Рис.

8), атакже положительная корреляционная связь удельной пиковой активности нейтрофила сконцентрацией общего холестерина сыворотки крови (коэффициент корреляции Спирмена r =0,41, p = 0,009, n анализируемых пар = 53) (Риc. 9).Общий холестерин, ммоль/л14121086420050001000015000200002500030000S*, имп/(кл)Рисунок 9. Корреляция удельной интегральной активности нейтрофила с концентрациейобщего холестерина сыворотки крови.19Общий холестерин, ммоль/л14121086420051015202530А1*, ×10–2 имп/(с*кл)Рисунок 10.

Корреляция удельной пиковой активности нейтрофила с концентрацией общегохолестерина сыворотки крови.Дляостальныхфакторовсердечно-сосудистогориска(возраст,длительностьзаболевания, уровень артериальной гипертензии, ЛПВП, ЛПНП, триглицериды, СРБ, СОЭ)результаты статистического анализа показали отсутствие значимой корреляции с показателямифункциональной активности нейтрофилов.При оценке прогностического значения показателей функциональной активностинейтрофилов была исследована зависимость качественного бинарного признака (наличие илиотсутствие повышения уровня общего холестерина сыворотки крови; наличие или отсутствиегиперлипидемии)отнезависимыхпеременных(стандартныхклинико-лабораторныхпоказателей и показателей функциональной активности нейтрофилов) с помощью бинарнойлогистической регрессии.Оценивали индивидуальное значение каждого из показателей функциональнойактивности нейтрофилов:- удельный уровень спонтанной ХЛ нейтрофила- удельная пиковая активность нейтрофила- удельная интегральная активность нейтрофила- коэффициент затухания респираторного взрываТакже провели оценку значимости вышеуказанных параметров в сочетании соследующими стандартными клинико-лабораторными показателями:- концентрация фибриногена в плазме крови- уровень СОЭ- уровень СРБДля всех больных, включённых в исследование, рассчитывали вероятность (Р) одного изсобытий (наличие или отсутствие повышения уровня общего холестерина сыворотки крови;наличие или отсутствие гиперлипидемии) на основе одного из показателей функциональной20активности нейтрофилов, как независимой переменной.

Вероятность наступления событиярассчитывали по формуле:p1, где z  b1  X1  b2  X 2  ...  bn  X n  a .1  e zXi – значение независимой переменной, характеризующей объясняющий признак (факторриска), bi и a – регрессионный коэффициент и некоторая константа, соответственно,полученные в результате логистического регрессионного анализа.Были исследованы 12 уравнений бинарной логистической регрессии. В уравнении, где вкачестве независимой переменной выступали значения удельной интегральной активностинейтрофила, корреляция наличия фактора риска сердечно-сосудистых заболеваний (наличиегиперлипидемии) со значением независимой переменной оказалась статистически значимой,получены следующие значения регрессионного коэффициента и соответствующей константы:b1 = 1,244 (p = 0,039), a = - 2,313 (p = 0,049).Следовательно, вероятность развития гиперлипидемии можно рассчитать с помощьюуравнения:p1, где z = 1,244 × [S*] – 2,3131  e z21ВЫВОДЫ1.

УбольныхСКВпосравнениюсоздоровымидонорамиотмечаетсяактивациянейтрофильного звена оксидативного стресса, что проявляется повышением показателейфункциональной активности нейтрофилов: увеличением удельной пиковой активностинейтрофила, удельной интегральной активности нейтрофила S*, удельного уровняспонтанной ХЛ (p <0,0001). При этом степень окислительной модификации альбуминаплазмы крови в группе больных СКВ была сопоставима с группой здоровых доноров (p =0,35), что говорит о сохранности третичной структуры белка.2. У больных СКВ антиоксидантная активность плазмы крови выше по сравнению с группойконтроля (p = 0,0059).