Автореферат (Роль нарушения оксидативного статуса у больных системной красной волчанкой в развитии факторов риска сердечно-сосудистых заболеваний), страница 2

Триптофановая флуоресценция отражает концентрацию циркулирующих иммунныхкомплексов (ЦИК), концентрацию антител к ДНК, а также тяжесть заболевания (развитиевисцеритов).7. Удельнаяинтегральнаяипиковаяактивностьнейтрофилакоррелируютсконцентрацией общего холестерина, и представляют значение при прогнозированииразвития гиперлипидемии.7Апробация работыАпробация диссертационной работы состоялась 27 июня 2017 г.

на совместномзаседании кафедры внутренних болезней Факультета фундаментальной медицины МГУ имениМ.В. Ломоносова, кафедры внутренних, профессиональных болезней и пульмонологии медикопрофилактическогофакультетаПервогоМГМУимениИ.М.Сеченова.Результатыдиссертационной работы были доложены на 16ой Международной конференции «Питание идиагностика» (Прага, Чешская республика, октябрь 2015), VIII Международной научнойконференции SCIENCE4HEALTH2017 (Москва, апрель 2017).Личный вклад автораВклад автора заключается в непосредственном участии на всех этапах исследования отпостановки задач, их теоретической и практической реализации до обсуждения результатов внаучных публикациях и их внедрения в практику.Внедрение в практикуРезультатыисследованияиспользуютсявработенефрологическогоиревматологического отделений Университетской клинической больницы № 3 Первого МГМУимени И.М.

Сеченова; внедрены в практику преподавания курса внутренних болезнейстудентам Факультета фундаментальной медицины МГУ имени М.В. Ломоносова и ПервогоМГМУ имени И.М. Сеченова.Выражаю глубокую благодарность за повседневную помощь в работе над диссертациейнаучному руководителю академику РАН, профессору Н.А.

Мухину. Сердечно признательна запомощь в работе и ценные консультации к.м.н., доценту кафедры внутренних болезнейФакультета фундаментальной медицины МГУ имени М.В. Ломоносова, Т.Н. Красновой; к.х.н.,доценту кафедры медицинской биофизики Факультета фундаментальной медицины МГУимени М.В. Ломоносова Е.В. Проскурниной; рецензентам – д.м.н., профессору кафедрывнутренних болезней Факультета фундаментальной медицины МГУ имени М.В.

Ломоносова,Моисееву С.В., к.м.н., ассистенту кафедры внутренних болезней Факультета фундаментальноймедицины МГУ имени М.В. Ломоносова, Георгиновой О.А., а также всему коллективу Клиникинефрологии, внутренних и профессиональных болезней имени Е.М. Тареева. Автор благодаритза плодотворное сотрудничество коллектив лаборатории кафедры медицинской биофизикиФакультета фундаментальной медицины МГУ имени М.В.

Ломоносова (зав. – академик РАН,профессор, д.б.н., Владимиров Ю.А.).8ПубликацииПо теме диссертации опубликовано 3 печатные работы, в журналах, включенных вперечень Высшей аттестационной комиссии.Объем и структура диссертацииДиссертация изложена на 101 странице машинописного текста и состоит из введения,4глав,выводов,практическихрекомендаций,приложенийиспискалитературы,иллюстрирована 1 таблицей и 12 рисунками. Библиография включает 177 источников(5 – отечественных и 172 – зарубежных).База проведенияРабота выполнена на кафедре внутренних болезней Факультета фундаментальноймедициныМГУимениМ.В.Ломоносова,вКлиникенефрологии,внутреннихипрофессиональных болезней имени Е.М.

Тареева Первого МГМУ имени И.М. Сеченова инаучно-исследовательскойлабораториикафедрымедицинскойбиофизикиФакультетафундаментальной медицины МГУ имени М.В. Ломоносова (зав. лабораторией академик РАН,проф. Ю.А. Владимиров, научный консультант – к.х.н., доцент кафедры медицинскойбиофизики МГУ имени М.В. Ломоносова, Проскурнина Елена Васильевна).СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИМатериал и методы исследованияВ проспективное исследование были включены 53 больных СКВ в возрасте от 17 до 64лет, из них 10 мужчин и 43 женщины, которые наблюдались в Клинике нефрологии,внутренних и профессиональных заболеваний имени Е.М. Тареева Первого МГМУ имени И.М.Сеченова с 2014 по 2017 гг. (директор д.м.н., профессор, академик РАН, Н.А.

Мухин). Среднийвозраст группы составлял 34,2 (11,5) лет. Абсолютными критериями исключения являлись:острый инфекционный процесс, обострение хронических воспалительных заболеваний,онкологические заболевания, алкогольная болезнь, беременность.Группой контроля служили здоровые доноры Гематологического научного центра МЗРФ (n = 87), сопоставимые с больными по полу и возрасту.На момент исследования все больные были разделены на 3 группы: с преимущественнымпоражением внутренних органов (n = 33 человек), с периферическим вариантом заболевания (n= 11 человек) и ремиссия процесса констатирована у 9 человек.

Согласно классификации И.Е.Тареевой, больные с поражением почек были разделены на группы с активным волчаночным9нефритом (ВН) с нефротическим синдромом (n = 8), активным ВН без нефротическогосиндрома (n = 20) и группу с неактивным ВН (n = 12). Больных с быстропрогрессирующимтечением заболевания не было.У большинства больных отмечали признаки активности заболевания разной степенивыраженности: с выраженной активностью (n = 12 больных) (индекс SLEDAI-2K 11 баллов иболее), с умеренной (n = 10) (индекс SLEDAI-2K 5–10 баллов), с низкой активностью (n = 25)(индекс SLEDAI-2K менее 5 баллов) и больные в ремиссии (n = 6) (индекс SLEDAI-2K 0баллов). У 10 больных был высокий индекс повреждения органов (индекс SDI 4 и более), у 28больного с минимальным повреждением индекс SDI был менее 3 и у 15 больных признаковповреждения органов не было.Всебольныеполучалииммуносупрессивнуютерапию:изних12активнуюиммуносупрессивную терапию цитостатиками и глюкокортикостероидами в сверхвысокихдозах и 41 больной получал поддерживающую терапию: монотерапию ГКС или ГКС всочетании с цитостатиками (азатиоприн, препараты микофеноловой кислоты, метотрексат).Обследование больных включало сбор жалоб, данных анамнеза, объективногообследования и стандартных лабораторных и инструментальных методов.Для исследования показателей оксидативного статуса проводили забор венозной крови.Определяли следующие параметры: антиоксидантная активность (АОА) плазмы крови,удельная пиковая активности нейтрофила А1*, удельная интегральная активность нейтрофилаS*,коэффициентхемилюминесценциязатуханиянейтрофилареспираторногоАсп*(базальнойвзрываKd,удельнаярадикал-продуцирующейспонтаннаяактивностинейтрофила) (Рис.

1). Проводили определение доли окисленного альбумина методомфлуоресценции после предварительного удаления из плазмы свободных иммуноглобулинов иЦИК.I(ХЛ) *103, имп/с10Основная стимуляция938765421A13+ФМА210A2AФМАAсп0+ФМЛФ1020304050607080время, минРисунок 1. Типичная кривая кинетики реакции ХЛ в ответ на двойную стимуляциюнейтрофилов: (1) — спонтанная ХЛ, (2) — предварительная стимуляция ФМА, (3) — основнаястимуляция ФМЛФ. Стрелками обозначены моменты добавления стимулов (Проскурнина Е.В.и соавт, 2016).Для исследования функции нейтрофилов in vitro проводилось воздействие на нихестественнымистимулами:филграстимом(гранулоцит-колониестимулирующийфактор,стимулятор лейкопоэза) и беталейкином (рекомбинантный ИЛ-1β).Оценка антиоксидантного потенциала используемых препаратов (преднизолона иметотрексата) производилась на основе определения АОА методом кинетической люминолактивированной хемилюминесценции использовали препараты.

С этой целью in vitro в систему,генерирующую радикалы, состоящую из фосфатного буфера, АБАП и люминола, объёмом 990мкл, добавляли 10 мкл раствора 5 мг каждого препарата в 10 мл фосфатного буфера. Конечнаяконцентрация препарата в кювете составила 5,0 мг/л, что по порядку величины соответствуетконцентрации препарата в плазме крови при дозировке 25 мг, с учетом биодоступностипрепарата.Статистическую обработку данных проводили с помощью программного пакетаSTATISTICA 13.1 (StatSoft, США). Для изучения связи между данными использоваликоэффициент ранговой корреляции Спирмена или параметрический корреляционный методПирсона.Достоверностьразличиямеждудвумягруппамиоценивалиспомощьюнепараметрического критерия Манна-Уитни или параметрического критерия Стьюдента. Дляанализа различия между несколькими группами применяли параметрический дисперсионныйанализ или непараметрический метод сравнения Краскела-Уоллиса.Поиск параметров, позволяющих прогнозировать динамику развития заболевания,осуществляли с помощью бинарной логистической регрессии.

Вероятность наступлениясобытия оценивали в зависимости от значения независимых переменных (показателей11оксидативного стресса отдельно и в сочетании с клинико-лабораторными параметрами).Вероятность наступления события вычисляли с помощью формулы:p1, где z  b1  X1  b2  X 2  ...  bn  X n  a .1  e zXi – значение независимой переменной, характеризующей объясняющий признак (факторриска), bi и a – регрессионный коэффициент и некоторая константа, соответственно,полученные в результате логистического регрессионного анализа.Во всех случаях различия признавали статистически достоверными при уровнезначимости p < 0,05.12РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯИсследование функциональной активности нейтрофилов под действиемискусственных стимуловПри сравнении больных СКВ с группой контроля оказалось, что для больных СКВхарактерна более высокая удельная пиковая активность нейтрофилов A1*.

Выявленные различиястатистически значимы (p <0,0001) (Рис. 2).0,030А1*, ×10–2 имп/(с*кл)0,0250,0200,015*0,0100,0050,000ПациентыКонтрольРисунок 2. Удельная пиковая активность нейтрофила A1* в группе пациентов и группеконтроля, *p<0,05У больных СКВ также статистически значимо более выражена удельная интегральнаяактивность нейтрофила S*, по сравнению с группой контроля (p <0,0001) (Рис.

3).30000S*, имп/(кл)250002000015000*1000050000ПациентыКонтрольРисунок 3. Удельная интегральная активность нейтрофила S* в группе пациентов и группеконтроля, *p<0,0513Также у больных СКВудельная спонтанная хемилюминесценция нейтрофилаАсп*, ×10–2 имп/(с*кл)достоверно выше, чем в группе контроля (р <0,0001) (Рис. 4).*ПациентыКонтрольРисунок 4. Удельная спонтанная хемилюминесценция нейтрофила в группе пациентов и группеконтроля, *p <0,05Отличий при оценке коэффициента затухания респираторного взрыва нейтрофиловмежду группой больных и группой контроля не было обнаружено.Исследование доли окисленного альбуминаПосле предварительного отделения ЦИК с помощью методики с применением ПЭГ-6000провели измерение доли окисленного альбумина (ДОА) методом флуоресцентного анализа (n =53).

Между группой больных СКВ и группой контроля не обнаружено статистически значимогоотличия: результаты, полученные для группы больных (средняя ДОА 24%, s = 18%)сопоставимы с таковыми для группы контроля (средняя ДОА 24%, s = 16%), p = 0,35 (критерийМанна-Уитни). Следовательно, можно сделать вывод, что при СКВ альбумин не претерпеваетзначительной окислительной модификации, что свидетельствует о сохранности третичнойструктуры белка.Исследование антиоксидантной активности плазмы кровиУ больных СКВ АОА плазмы крови была выше, по сравнению с контрольной группой (p =0,0059).