Диссертация (Клинико-биохимические изменения у животных при сочетанном введении левамизола), страница 7

Departmentof Justice Drug Enforcement Administration Northeast Laboratory разработали технические указания «Левамизол: Аналитический профиль». Авторы изучили данный препарат несколькими современными способами: газовой хроматографией,капиллярным электрофорезом, ИК-спектроскопией, масс-спектрометрией и также ЯМР-спектроскопией по причине частой встречаемости левамизола в пробахнезаконно продаваемого кокаина гидрохлорида. Cпектры снимали на спектрометре ядерного магнитного резонанса 400-MR, аналогичном нашему. Сравнительный анализ данного спектра (рисунок 1.2) и спектра, снятого нашим аппаратом, показывает практически полную идентичность полученных результатов.Присутствует лишь незначительное несоответствие пиков по шкале химическогосдвига, а также на нашем спектре видно несколько небольших лишних пиков.Данные различия объясняются пробами, которые были использованы.

У нас нетчетких данных о том, насколько чистое химически вещество изучали Ann MarieM. Valentino и Ken Fuentecilla, однако мы исследовали левамизол промышленного производства с рядом незначительных вспомогательных веществ, посколькунам было необходимо получить спектр конкретно того состава, который позднеевводили лабораторным животным.Кроме рассмотренной выше, нами было обнаружено всего несколько работ, посвященных исследованию левамизола методом ЯМР-спектроскопии. Chi-35cault M., Luu-Duc C., Boucherle A.

и др. [1988] в Universitе Joseph Fourier Grenobleво Франции изучали лекарственно-протеиновые отношения, а именно взаимодействие левамизола и сывороточного альбумина человека.Рисунок 1.2. Спектр левамизола. Ann Marie M. Valentino, Ken Fuentecilla [2005]С сывороточным альбумином связываются преимущественно имидазолидиновые и тиазолидиновые группы левамизола, что было показано соответствующим химическим сдвигом.Левамизол обнаруживают в пробах незаконного кокаина, его содержаниев пробе составляет около 2,3 %. В связи с этим в США Ellen M.

Casale и John F.Casale [2011] проводили исследования проб ЯМР-спектроскопией. Однако этиисследования никак не связаны с изучением крови. Левамизол не один раз исследовался методом ЯМР-спектроскопии [Jean-Paul Gouesnard, 1986; Javier A.Cabeza и др., 2006], однако все эти исследования проводились аналогичнымивидами спектроскопии и на пробах не биологического происхождения. В интер-36нете можно найти информацию об использовании ЯМР-спектроскопии длянаблюдения за динамикой препарата в организме в клинике Майо в США, штатМинессота. Клиника Майо проводит широкий ряд исследований левамизола иего сочетаний [Moertel C.G. и др., 1995; Burch P.A.

и др., 1999; Witte R.S. и др.,2001; O'Connell M.J. и др., 2006] в основном с флуороурацилом для лечения рака,однако опубликованных работ по изучению левамизола методом ЯМРспектроскопии нам найти не удалось.По представленным данным можно проследить развитие левамизола каксредства ветеринарной медицины. Первоначально он считался даже малотоксичным, что сейчас опровергнуто. Можно заметить тенденцию, что левамизол довольно глубоко изучался как иммуномодулятор, а вот его токсическим свойствам и проявлениям в комбинациях с различными препаратами было уделенонедостаточно внимания.Именно на это направлена наша работа, в которой будет рассмотрено сочетанное применение левамизола с различными веществами.1.2.

Тимоген, место препарата в современной ветеринарной медицине,патофизиологические особенности иммуномодулирующего воздействия наорганизм. Патофизиологическая картина сочетанного применениятимогена с рядом лекарственных препаратовВ связи с первой частью работы был проведен также опыт с использованием иммуномодулятора тимогена в сочетании с вышеупомянутым тетравитом.Тимоген – современный иммуномодулятор, широко применяемый в ветеринарии[Лютинский С.И., Крячко О.В., Смирнов В.С., 2004], оказывает регулирующеевлияние на реакции клеточного и гуморального иммунитета. Стимулирует процессы регенерации в случае их угнетения, повышает резистентность организма,нормализует метаболические процессы.

Считается безвредным для животных, необладает тератогенными, аллергенными, эмбриотоксическими и мутагеннымисвойствами. [Бергхоф П.К., 2001; Смирнов В.С., 2004] Используемый с целью37профилактики заболеваний и в период реабилитации, он применяется совместнос поливитамином тетравитом.История тимогена начинается с экспериментальных исследований, проводимых в Военно-медицинской академии им. С.М.

Кирова с 1973 г. Эти исследования легли в основу формирования новой научной концепции пептиднойбиорегуляции, которую сформулировали В.Г. Морозов и В.Х. Хавинсон в 1983 г.[Морозов В.Г., Хавинсон В.Х., 1983., Морозов В.Г., Хавинсон В.Х., 1985; Хавинсон В.Х., Кузник Б.И., Рыжак Г.А., 2012]. Было обнаружено, что образующиеся вклетках низкомолекулярные вещества, имеющие пептидную природу, осуществляют перенос от клетки к клетке определенной информации, закодированнойпри помощи аминокислот в нужной последовательности и конформационныхмодификациях.

Благодаря этому контролируются пролиферация, дифференциация и межклеточные взаимодействия. Эти вещества были выделены из разныхтканей и названы пептидными биорегуляторами, или цитомединами [ХавинсонВ.Х., Кузник Б.И., Рыжак Г.А., 2012].Основной функцией цитомединов является нормализация тканей того органа, из которого они выделены, кроме того, дополнение или замена биологически активных соединений, секретируемых данной морфологической структурой[Морозов В.Г., Хавинсон В.Х., 1983; Кузник Б.И., Морозов В.Г., Хавинсон В.Х.,1995; Кузник Б.И., Морозов В.Г., Хавинсон В.Х., 1998; Хавинсон В.Х., ХокканенВ.М., Трофимова С.В., 1999; Закуцкий А.Н., Чалисова Н.И., Рыжак Г.А. и др.,2006; Хавинсон В.Х., Кузник Б.И., Рыжак Г.А., 2012].Тимоген являлся пептидом, выделенным одним из первых из своегопредшественника тималина, тималин впоследствии стал самостоятельным ветеринарным препаратом, применяющимся во многих областях ветеринарии [Василевич Ф.И., Мотузко Н.С., 2006].

Было установлено, что в выделенных из тимусателят экстрактах содержатся пептиды, молекулярная масса которых менее 1000Да. Одним из них оказался дипептид Glu–Trp, который получил наименованиетимоген [Морозов В.Г., Хавинсон В.Х, 1996; Morozov V.G., Khavinson V.Kh.,1997]. Этот выделенный из тималина пептид был синтезирован и сейчас приме-38няется в ветеринарии и медицине (Рег. № 90/250/1; приказ МЗ СССР № 250 от19.06.1990).

Тимоген усиливал реакцию бласттрансформации лимфоцитов invitro и оказывал модулирующее влияние на уровень провоспалительных цитокинов [Морозов В.Г., Хавинсон В.Х., Малинин В.В., 2000; Хавинсон В.Х., КузникБ.И., Рыжак Г.А., 2012].В контрольной группе применение тимогена в течение 30 суток приводило к возрастанию числа лимфоцитов. При тимэктомии тимоген стимулировалявное возрастание числа Т-лимфоцитов.

При этом вводимые дозы тимогена были в 100–1000 раз меньше, чем тималина [Яковлев Г.М., Новиков В.С., ХавинсонВ.Х. и др., 1992]. При сравнении влияния тималина и тимогена как иммуномодулирующих пептидных препаратов на интенсивность иммунного ответа у крыс,иммунизированных эритроцитами барана, было выявлено наиболее выраженноедействие тимогена [Хавинсон В.Х., Кузник Б.И., Рыжак Г.А., 2012].Под влиянием тимогена в селезенке количество антителообразующихклеток, в которых явно увеличивалось содержание циклических нуклеотидов,возрастало. Реакция бласттрансформации лимфоцитов под воздействием фитогемагглютинина у таких крыс протекала интенсивнее.

При создании экспериментальных иммунодефицитов у животных тимоген приводил к нормализацииТ- и В-систем иммунитета. Активность трансмембранного обмена Са2+ и перераспределение внутриклеточной концентрации цАМФ и цГМФ являются основой молекулярных механизмов действия препарата на Т-лимфоциты. Как следствие происходит изменение процессов репликации, транскрипции и репарацииДНК. Это изменение индуцирует экспрессию генов и последующую пролиферацию и дифференциацию соответствующих популяций лимфоцитов [МорозовВ.Г., Хавинсон В.Х., Малинин В.В., 2000; Хавинсон В.Х., Кузник Б.И., РыжакГ.А., 2012].Морским свинкам, инфицированным псевдотуберкулезом, вводился тимоген в течение 6–15 сут.

Как следствие, проявлялась нормализация клеточногосостава органов иммунитета, лимфоцитов, нейтрофилов и их функциональнойактивности. Использование препарата в пик заболевания уменьшало диссеми-39нацию возбудителя в печени и мезентериальном лимфоузле в 5 раз, а в селезенке— в 10 раз, а также ускорялась выработка специфических агглютининов [Хавинсон В.Х., Морозов В.Г., 2001].Было установлено, что тимоген, применяемый в течение года, тормозит укрыс канцерогенез, который индуцируется радионуклидами: частота развитиявсех опухолей уменьшалась в 3,3 раза, а аденокарцином молочной железы — в 6раз. Продолжительность жизни животных при этом увеличивалась на 14 % [Хавинсон В.Х., Анисимов В.Н., 2003; Хавинсон В.Х., Кузник Б.И., Рыжак Г.А.,2012].