Диссертация (Генетическая оценка видов и пород животных, разводимых в разных экологических условиях), страница 8

Davis et al., 1991). В 90–х годах в породе ромни–марш стада овецгосподина Мак Хана в местечке Вайкато был обнаружен ген (FecXH), показывающий тот же характер наследования и фенотип, что и ген Инвердейл(G.D. Davis et al., 2001). Изучение характера наследования аллелей Инвер39дейл и Хана позволило допустить, что ген плодовитости в этих популяцияхбыл локализован на Х хромосоме.Инвердейл и Хана характеризуются увеличенной плодовитостью посравнению с овцами–неносителями. В то же время, гомозиготные животные– носители аллелей FecXI и FecXН бесплодны и имеют нефункционирующиев зачаточном состоянии яичники (G.D. Davis et al., 1992). Бараны–носителиаллелей FecXI и FecXH показывают нормальную плодовитость.

Ген FecX былкартирован на Х хромосоме (S.M. Galloway et al., 1999), в нем также локализовангенкостногоморфогенетическогобелка15(BMP-15,bonemorphogenetic protein) – член семе йства TGF. BMP-15 – это специфическийбелок, экспрессирующийся на ооцитах, до настоящего времени неполностьюизвестна его функция.Мутация в гене BMP-15, которая определяет замену V31D на высококонсервативном участке, находится в сцеплении с FecXI (S.M.

Galloway et al.,2000). Точковая замена нуклеотида С на T в позиции 67 BMP-15 гена, включает стоп–кодон в аллели FecXH. Изучение наследования плодовитости привело к обнаружению еще одного локализованного на Х хромосоме гена плодовитости – Вудланд (FecX2W) у многоплодной популяции купворсскиховец (G.H. Davis et al., 2002; G.H. Davis, 2005). Тем не менее, ген плодовитости, обуславливающий данный признак, и соответствующая ему мутация донастоящего времени не идентифицированы.

Три основных гена, влияющиена плодовитость, были обнаружены в семействе ирландской многоплоднойпороды овец белклейр, эти животные характеризуются большой степеньюовуляции, а также, наоборот, при формировании соответствующих генотипов, частыми случаями стерильности особей (J.P. Hanrahan et al., 2004).Создание многоплодных стад овец, благодаряскринингу признакамногоплодия у ряда пород стал эффективным способом выявления геновплодовитости. Такие стада овец были сформированы в Новой Зеландии, Ирландии и Великобритании. Они стали основой для открытия новых мутаций,ответственных за многоплодие: FecXI, FecX2W, FecXB, FecXG и FecGH. Про40веденные исследования по характеру наследования и разработка ДНК–тестовпо выявлению генов плодовитости, позволили показать их потенциал поулучшению репродуктивных качеств у различных пород овец в мире, а такжепривели к получению новых знаний в области биологии размножениия (G.D.Davis et al., 2001; G.D.

Davis et al., 2002).Подводя итог всему выше изложенному, следует отметить, чтоблагодарягенетическому мониторингу, основанному на использованиимаркирующих систем, открытых у мелкого рогатого скота, в последнеевремя все активнееприменяется диагностика генов многоплодия и ихиспользование в селекции овец.1.7 Заключение по обзору литературыБольшинство исследований по микроядерному тесту выполнено на популяциях человека.

В то же время, в качестве биоиндикаторных видов используется ограниченное число животных и растений. Несмотря на экономическую важность сельскохозяйственных животных, как биоиндикаторов загрязненности генотоксикантами среды обитания человека, количество исследований особенностей микроядерного теста у этих видов крайне ограниченно. В этой связи, основная цель данной работы заключалась в сравнительныхоценках характеристик микроядерного теста у основных сельскохозяйственных видов.

Выяснение особенностей внутривидовой дифференциации с учетом их принадлежности к разным породам, внутрипородным группам, разводимых в отличающихся эколого–географических условиях.Что касается численности романовских овец в сельхозпредприятияхнашей страны, с каждым годом их поголовье постепенно растет. В 2000 годуовец романовской породы в Российской Федерации составляло 16,3 тыс.,причем самая большая численность была в Центральном Федеральном округе, и равнялось 12,7 тыс. животных.

На начало 2013 года численность составляла уже 64,9 тыс. голов, а в Центральном Федеральном округе 45,8 тыс. голов. Необходим комплексный подход для оценки и сохранению овец романовской породы в современных условиях. Одним из методов для характери41стики овец являются различные типы маркирующих систем. Использованиегенетических маркеров позволяет надежно контролировать происхождениеживотных, их консолидированность, изучать динамику генофондов, определять гены, ответственные за хозяйственно-полезные признаки и жизнеспособность.По породной классификации романовская порода относится к нормальной - число женских особей более 10 000 животных.

В данном случаепопуляция находится вне опасности. Она имеет тенденцию к увеличению, аколичество чистопородных животных составляет 100%.Сейчас известно 16 генетических систем групп крови у овец, из нихлучше изучено 9 генетических систем (A, B, C, D, M, R, I, F30, F41), различающихся между собой как количеством антигенов, так и числом соответствующих им аллелей. Среди известных генетических систем групп кровиу овец (А, В, С, D , М, R, I, F30, F41), наиболее сложной является В система,содержащая 8 выявленных к настоящему времени факторов: Bb, Bc, Be, Bd,Bf, Bg, Bh, Bi.Использование генетических маркеров многоплодия и продуктивности,позволяющих облегчить и значительно оптимизировать селекционную работу, а также повысить эффективность использования животных, являетсявесьма актуальным вопросом.

В то же время, благодаря использованию овецв качестве модельного вида при изучении генетического контроля многоплодия, имеются многочисленные данные по связи генетической изменчивос определенных локусов и показателей многоплодия, а также продуктивности уразличных пород овец.42ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЙРабота проводилась на основании общей схемы исследований, представленной на рисунке 2. Исследования образцов крови местных пород крупного рогатого скота, лошадей, овец, коз и яков из Монголии (Хубсугул) проводили совместно с сотрудниками лаборатории сравнительной генетики животных ИОГен РАН при содействии доктора Цэндсурэн Цэдев, сотрудникаИнститута биологии Монгольской академии наук.Образцы крови от овец эдильбаевской породы бирликского и суюндукского типов (n=34) из племенного завода ООО «Волгоград–Эдильбай»Волгоградской области, а также мазков крови орловских, русских, стандартбредных рысаков и их помесей из конезавода “Поворот В.П.” Московскойобласти (n=28) и от овцебыков с полуострова Таймыр (n=7) исследовали подруководством академика РАН Глазко В.И.

и д.б.н., профессора Глазко Т.Т.Для исследований по микроядерному тесту кровь брали также у овецромановской породы (n=35): 8 баранов–производителей, 20 овцематок и 7ягнят в возрасте 2 мес., принадлежавших племенным хозяйствам Ярославской области – КХ Абдулатипова С.М., ООО "Атис СХ", ООО "Полет", ООО"Родина".Цельную кровь отбирали в пробирки с консервантом в соотношении1:4. Постановку микроядерного теста осуществляли по методике Н.А. Шапиро и др. (2003).Для подсчета эритроцитов с микроядрами брали каплю крови и разводили физиологическим раствором (1:1), затем готовили мазки на обезжиренных с помощью смеси Никифорова предметных стеклах.

Мазки фиксировалиметиловым спиртом и высушивали при комнатной температуре. Окраскумазков проводили по методу Папенгейма с использованием растворов МайГрюнвальда и Гимзы. Для анализа клеток использовали бинокулярный микроскоп фирмы Motic со встроенным цифровым фотоаппаратом (DMBA300)при увеличении в 1000 раз.43Генетическая оценка видов и пород животных,разводимых в разных экологических условияхИсследованные виды и породы животных1.

Микроядерный тест – романовская порода овец, разные половозрастные группы;эдильбаевская порода овец, бирликского и суюндукского типов; зона разведения –племенные хозяйства Ярославской и Волгоградской областей; лошади, яки, крупныйрогатыйскот, местныеовец и козпороды– биосферныйзаповедникполиморфныхбелков упородыовец романовской– племенныехозяйства«Хубсугул»,ВоронежскоМонголия; овцебыки – полуостров Таймыр.Яр2. Генетический анализ овец романовской породы из племенных хозяйств Ярославской области, Республики Башкортостан и Республики Татарстан по 7 системамгрупп крови и 4-м полиморфным белкам (гемоглобин, трансферрин, альбумин, преальбумин).3. ДНК-анализ локуса ВМР-15 у овец романовской породы Воронежской области.Изученные показателиМикроядерныйтест- число микроядерв эритроцитах;- определение величины микроядерв эритроцитах;- классификациятипов микроядер вклетках;- анализ встречаемости эритроцитовс микроядрами уживотных разныхвидов и пород.Группы крови–характеристика овец романовской породы по фенотипическимклассам, генотипам и аллелям семи систем групп крови.Полиморфныебелки- определение генотипов и аллелей влокусах полиморфных белков;оценка генетического равновесияв изученных локусах;- определение уровня гетерозиготности и коэффициентаэксцесса.характеристикапопуляций овец романовской породы.Выводы и практические предложенияПерспективы дальнейших исследованийРисунок 2 – Общая схема исследований44ДНК-анализлокуса ВМР-15встречаемостьаллелей и генотипов в локусе ВМР15 у овец романовской породы;- анализ взаимосвязи генотипов смногоплодием маток и жизнеспособностью ягнят;- характеристикаовцематок с различными генотипами по хозяйственно-полезнымпризнакам.Подсчет эритроцитов с микроядрами проводили для каждого исследуемого животного в 37 рабочих полях.

В каждом поле подсчитывали примерно по 80 эритроцитов, что суммарно составляет 3000 клеток. Для удобства анализа суммарной оценки данная цифра, полученная по каждому животному, делилась на 3, результаты представляются в расчете на 1000 клеток.Статистическую достоверность различий частот встречаемости цитогенетических аномалий между группами животных оценивали по критериюСтьюдента. Полученные данные выражали в промилях (в ‰), т.е. числомэритроцитов с микроядрами к общему количеству подсчитанных клеток впроцентах (Ивантер Э.В., Коросов А.В., 2010).Исследования по частотам антигенов, аллелей и генотипов по семисистемам групп крови у овец романовской породы проводили на образцах,взятых из 4–х хозяйств: КХ Абдулатипова С.М.

в Гаврилов-Ямском районеЯрославской области (n=40); КФХ З.Г. Алтынбаева Ишимбаевского районаРеспублики Башкортостан (n=47); ООО «ПХ Пионер» Арского района Республики Татарстан (n=40) и ООО «Конезавод Воронцовский» Переславскогорайона Ярославской области (n=40). Цельную кровь для исследований бралииз яремной вены. Для получения плазмы, а также изготовления суспензийэритроцитов, кровь брали в пробирки в соотношении 4:1 с консервантом, который имел следующий состав: натрий лимоннокислый трехзамещeнный 50 г; глюкоза - 10 г; стрептомицин - 1 г; хлористый натрий - 9 г; дистиллированная вода - 1000 мл.