Диссертация (1151535), страница 11
Текст из файла (страница 11)
Применение методов, основанных на морфогенетических показателях стабильности развития и цитогенетического гомеостаза, является перспективным направлением, поскольку они отвечают практически всем требованиям биомониторинга. Морфогенетические показателихарактеризуют уровень цитогенетической стабильности индивидуального организма и могут формировать его фенотип в условиях конкретной окружающей среды. Изучать цитогенетический гомеостаз можно с помощью микроядерного теста, сущность которого заключается в подсчете количества и объема клеток с микроядрами (Н.А.
Шапиро и др., 2003; Ю.Д. Темниханов,2012). Микроядерный тест – один из методов определения веществ, которыепроявляют генотоксические свойства воздействия на организм. Литературные данные указывают на то, что микроядерный тест не уступает, а иногдадаже превосходит по информативности и оперативности тесты хромосомнойаберрации (Н.Н. Ильинских и др., 2011).Микроядерный тест разработан W.
Schmid в 1975 году и базируется наиспользовании клеток костного мозга высших позвоночных, рыб и земноводных in vivo. Однако за последние годы он пополнился целым рядом новых методик, которые охватывают клетки животных и растений (W. Schmid,1975; Н.Н. Ильинских и др., 2011).Полученные результаты микроядерного теста по романовской породеовец представлены в таблице 7. В таблице 7 представлены данные, полученные в процессе исследования мазков крови. Установлено, что самые высокиепоказатели по частоте встречаемости были выявлены у ягнят (8,7±0,9‰), затем у баранов-производителей (5,6±0,03‰), и на третьем месте были овцематки (4,8±0,3‰).58Таблица 7 - Частота встречаемости эритроцитов с микроядрамиу исследованных овец романовской породы (в ‰)№п/п1.2.3.4.Группы исследованныхживотныхБараны-производителиОвцематкиЯгнята 2-х мес.
возрастаЧисло исследованных животныхn820735Среднее число микроядерна 1000 клеток5,6±0,34,8±0,38,7±0,95,8±0,6Наблюдается достоверное различие по микроядерному тесту между баранами и матками (P<0,01) и между взрослыми группами животных и молодняком (P<0,01), что возможно связано с жестким отбором производителейна племя и возрастом, поскольку кровь брали от старых баранов (Е.Е. Астафьева и др., 2015).По литературным данным, полученным на крупном рогатом скоте присравнении различных возрастных групп, частота встречаемости эритроцитовс микроядрами у двухмесячных телят (9,5±1,1‰) была достоверно выше(P<0,01), чем у половозрелых животных родительской популяции (4,6±0,7‰)(Т.Т. Глазко и др., 2010).
Авторы связывают этот факт с относительной незрелостью клеточной компоненты иммунной системы у двухмесячных телят,ответственной за элиминацию эритроцитов с микроядрами. Также имеютсяданные, полученные на более зрелой группе, где показано увеличение с возрастом частоты встречаемости эритроцитов с микроядрами (О.Н. Семенова,2004). Автор связывает увеличение микроядер в соматических клетках благодаря накоплению с возрастом у животных спонтанных мутаций.Наши результаты по молодняку подтверждают данные об увеличенномуровне микроядер по сравнению с взрослыми особями. Полученные данныесвидетельствуют о том, что показатели микроядерного теста у романовскиховец почти совпадают с выявленными ранее результатами других пород овец.Это говорит о том, что разные породы овец в относительно благоприятныхдля их разведения эколого–географических условиях существенно не отличаются друг от друга по средним значениям частот встречаемости эритроци59тов с микроядрами независимо от многоплодия или другой продуктивной направленности.В процессе исследований в клетках при подсчете были выявлены различные типы микроядер.
Размеры микроядер зависят от причин, лежащих воснове их образования. Считается, что крупные микроядра образуются придействии на организм различных мутагенов, что обусловлено отставаниемделения отдельных хромосом в метафазе и анафазе, в то время как мелкиемикроядра указывают на снижение потенциальной жизнеспособности клеток.Микроядра – это фрагменты ядра в эукариотических клетках, которые не содержат полного генома, необходимого для её выживания.
Микроядра являются патологической структурой, их образование связано с хромосомной нестабильностью и наблюдаются в клетках любой пролиферирующей ткани.Явления, лежащие в основе образования микроядер, несомненно, свидетельствуют о снижении жизнеспособности таких клеток, что является маркеромнестабильности их функционирования (Т.С. Колмакова и др., 2013).Таким образом, оценка результатов нестабильности хромосомного аппарата у овец романовской породы получена на основании подсчета частотвстречаемости эритроцитов с микроядрами в периферической крови. Показано, что она зависит от видовой принадлежности животных, условий содержания и возраста. У ягнят в возрасте двух месяцев уровень микроядер в периферической крови была выше, чем у половозрелых животных (P<0,01).Однако многоплодность породы не оказывает влияния на нестабильностьхромосомного аппарата.
Размеры микроядер в эритроцитах можно разделитьна мелкие, средние и крупные. Как выглядят микроядра в эритроцитах, представлены на фото 1, 2, 3.60Фото 1- В эритроците исследуемой овцы представленыкрупное и среднее микроядроИсходя из размеров микроядер, встречаемых в эритроцитах овец романовской породы, предложена их классификация.
При определении размерамикроядра исходили из средней величины ядра нормобласта, составляющегов среднем 1,5 мкм. Классификация включает наличие пяти типов встречаемости микроядер в клетке:1. Первый тип – одно или несколько крупных микроядер в эритроцитах, размером до 1/4 среднего размера ядра нормобласта.2. Второй тип – одно микроядро в эритроците, размером от 1/15 до 1/10 среднего размера ядра нормобласта.61Фото 2 - Среднее микроядро в эритроците крови овцы3. Третий тип – одно маленькое микроядро в эритроците, величиной 1/40среднего размера ядра нормобласта.4. Четвертый тип – микроядра, представляющие собой несколько мелких образований, в количестве от 2 до 10 штук, размером с микроядро 2– го и 3– готипов, т.е.
от 1/40 до 1/15– 1/10 среднего размера ядра нормобласта.5. Пятый тип – когда в исследуемых эритроцитах одновременно выявляются,как крупные, так и мелкие микроядра.62Фото 3 - Эритроцит у овцы с мелким микроядромВ исследованных мазках крови в основном встречались крупные микроядра. Чаще всего большие микроядра были по одному в эритроците, режепо два. Мелкие микроядера встречались в количестве по два, реже по триштуки в одном эритроците.
В 5% от общего числа клеток с микроядрамивстречалось крупное микроядро и рядом с ним одно или два мелких размеров. Лишь в 10% от общего количества клеток с микроядрами встречалисьобразования мелких и средних размеров.633.5 Характеристика семи систем групп кровиу овец романовской породыИсследования 7 систем групп крови проводили на овцах романовскойпороды. Образцы были взяты из четырех хозяйств трех регионов РоссийскойФедерации: КФХ С.М.
Абдулатипова в Гаврилов-Ямском районе Ярославской области (n=40); КФХ З.Г. Алтынбаева Ишимбаевского района Республики Башкортостан (n=47); ООО «ПХ Пионер» Арского района РеспубликиТатарстан (n=40) и ООО «Конезавод Воронцовский» Переславского районаЯрославской области (n=40).КХ Абдулатипова С.М. Ярославской области (n=40)Полученные данные приведены в таблице 8 по частотам антигенов, аллелей и генотипов 7 систем групп крови у овец романовской породы из КХАбдулатипова С.М. Ярославской области.Определение антигенов А системы групп крови проводили с помощьюдвух аллоиммунных сывороток: анти-Aa и анти-Ab. Из проведенных исследований следует, что наиболее распространенными, по встречаемости в Асистеме у подопытных животных оказались нулевой антиген А– (0,6500) иАа (0,1750).
Частота встречаемости с фенотипическим сочетанием Ааb составила столько же (0,1750), сколько было выявлено овец с Аа антигеном.В А системе было выявлено четыре генотипа, из них два гомозиготных(А–/–, Аа/а) и столько же гетерозиготных (Аa/-, Аа/b) генотипа. Чаще всего фиксировался А–/– гомозигота (0,6500), затем еще три в следующей последовательности: Аа/b (0,1750), Аa/– (0,1552), Аа/а (0,0198).Традиционно высоким для романовской породы была встречаемость A–аллеля (0,7276).
Для данной популяционной группы обычным было наличиеневысокого уровня встречаемости Aа (0,1849) и Аb аллелей (0,0875). Следуетотметить, перечисленные признаки по А системе являются одной из особенностей романовской породы овец (Н.С. Марзанов, Т.А. Магомадов, 1997).Выражаются они ввиде полного отсутствия или же очень редкой встречае64мостиантигенов, аллелей и генотипов А системы. Поэтому традиционновысок уровень гомозиготности (Са) у овец романовскй породы по А системе(0, 67).Таблица 8 - Частота встречаемости генетических факторов 6 систем группкрови у овец романовской породы КХ Абдулатипова С.М.Ярославской области (n=40)СистемаАСМDRIГенотипЧастотагенотипаАллельЧастотааллеляФенотипический классАa/aАa/Аa/bА-/Сa/aСa/Сb/bСb/Сa/bС-/Мa/aМа/Мb/bМb/Мab/abМab/Мab/aМаb/bМa/bМ-/Dа/аD-/Dа/RR/RRR/rRr/rII/III/iIi/i0,01980,15520,17500,65000,09640,00360,02390,00110,85000,02500,02400,32590,00180,09820,02670,30680,04530,01150,00980,15000,52500,39750,07750,46500,43250,10250,95000,02460,0254АаАbА-0,18490,08750,7276АаАаbА-Частотавстречаемости0,17500,17500,6500СaСbС-0,52670,45050,0228СaСbСabС-0,10000,02500,85000,0250МaМbМabМ-0,21470,06160,20830,5154МaМbМabМ-0,35000,10000,40000,1500DaD-0,72460,2754DaD-0,52500,4750Rr0,68370,3163RО0,90000,1000Ii0,97470,0253Ii0,95000,050065Аналогичные показатели по структуре А системы с романовскими овцами имели две породы: тексель и опаринская.
Сейчас опаринская породауже уничтожена, она разводилась в Кировской области, а порода тексельбыла ранее исследована в Республике Молдова (Н.С. Марзанов, 1994; Н.С.Марзанов и др., 2010).Анализ С системы групп крови проводили с помощью двух аллоспецифических сывороток-реагентов, одна из них была козьей (анти-Са), а другая овечьей (анти-Сb). В общей сложности в С системе было установлено четырефенотипических класса в следующей последовательности: Саb (0,8500), Сa(0,1000), Сb (0,0250) и С- (0,0250).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
