Автореферат (Циклический инжекционный анализ лекарственного растительного сырья с вскрытием проб в УЗ-поле), страница 3

Разработанная методика в отличие от ранее предложенных проточных аналоговобеспечила полную автоматизацию анализа, включая стадию извлеченияфлавоноидов из ЛРС в раствор.Табл. 1. Аналитические характеристики циклической инжекционнойспектрофотометрической методики определения флавоноидов в ЛРС.ОптимальноеПараметрзначениеКонцентрация ЦПХ (мМ)0,1Концентрация Al (III) (мМ)1,7Объем экстрагента (мл)2Время извлечения (мин)10оТемпература извлечения ( С)60Время спектрофотометрической5реакции (мин)Температура реакции (оС)2510Диапазон определяемых0,36 – 8концентраций (%)Предел обнаружения (%)0,1Коэффициент корреляции0,999Sr, % (n = 5)3Производительность (проб/час)8Разработанная методика была апробирована при определении флавоноидов вразличном ЛРС (табл.

2). Расчет содержания флавоноидов в анализируемомрастительном сырье осуществляли в пересчете на рутин, так как все максимумы вспектрах поглощения аналитических форм исследуемого растительного сырьяпрактически совпадали с максимумом поглощения аналитической формы рутина(рис. 6). Расчет проведен с учетом потери в массе сырья при высушивании(температура – 150 оС, время – 1 ч).Рис. 6. Спектры поглощения растворованалитических форм: 1 – рутина; 2 –травы зверобоя; 3 – цветков ромашки, 4– цветков календулы (С(рутина) – 0,8мМ, C(ЦПХ) – 2,8 мМ, С(Al (III)) – 40мМ).Правильность полученных результатов подтверждена методом циклическойвольтамперометрии. Результаты, полученные методами ЦИА с извлечением в УЗполе и циклической вольтамперометрии, были сравнены с помощью F- и t-тестов ипредставлены в таблице 2.Полученные F-значения ≤ 6,39 указывают на незначительное различие ввеличинах стандартных отклонений, а полученные t-значения ≤ 2,31 указывают на то,что нет статистически значимого различия между результатами, полученными припомощи двух методик.Табл.

2. Результаты определения содержания флавоноидов в ЛРС (n=5,P=0,95).Общее содержание флавоноидов*, %ЛРСЦиклическаяЦИАF-значение t-значениевольтамперометрия1,201,63Трава зверобоя5,80,15,70,11,501,30Цветки ромашки2,200,052,150,04Цветки календулы 1,09±0,031,03±0,041,401,20*в пересчете на рутинГлава 5. Разработка методики циклического инжекционногоспектрофотометрического определения аскорбиновой кислоты в лекарственномрастительном сырье и продуктах питанияВ качестве второй иллюстрации возможностей схемы ЦИА с извлечениеманалитов в УЗ-поле была разработана полностью автоматизированная методика11определения аскорбиновой кислоты в ЛРС и продуктах питания.

Аскорбиноваякислота была выбрана в качестве аналита, так как она является важнымводорастворимым антиоксидантом в организме человека.Разработаннаяметодикавключаетавтоматизированноеизвлечениеаскорбиновой кислоты из ЛРС и некоторых продуктов питания в водный раствор вкартридже с фильтрами из пористого ПТФЭ с последующим ееспектрофотометрическим определением по реакции восстановления 2,6дихлорфенолиндофенола (2,6-ДФИФ) в кислой среде. Выбранная реакциярекомендована для определения аскорбиновой кислоты в ЛРС Государственнойфармакопеей XI издания.Для достижения оптимальных условий протекания спектрофотометрическойреакции в условиях ЦИА было изучено влияние концентрации соляной кислоты и 2,6ДФИФ.

Экспериментально было выбрано значение концентрации соляной кислотыравное 5 мМ в качестве оптимального (рис. 7). При увеличении концентрации 2,6ДФИФ больше 20 мкМ оптическая плотность раствора превышает 1 (рис. 8). Времяперемешивания реакционной смеси в РЕ ЦИА должно быть достаточным, чтобыобеспечить гомогенизацию раствора и исключить возможное взаимодействиереагента с другими восстановителями. Было установлено, что при увеличениивремени перемешивания экстрактов ЛРС с раствором реагента более 10 снаблюдается мешающее влияние примесных компонентов (рис. 9).Рис. 7.

Влияние концентрации солянойкислоты на оптическую плотность раствора(С(2,6-ДФИФ) – 7 мкМ, С(аскорбиновойкислоты) – 17 мкМ).Рис. 8. Влияние концентрации 2,6-ДФИФна оптическую плотность раствора (С(HCl)– 5 мМ).Рис. 9. Зависимость оптической плотностираствора от времени перемешиванияэкстракта листьев смородины с раствором2,6-ДФИФ (С(2,6-ДФИФ) – 20 мкМ, С(HCl) – 5 мМ, скорость потока воздуха – 6мл/мин).Для оптимизации процесса извлечения аскорбиновой кислоты из ЛРС ипродуктов питания было исследовано влияние массы пробы, объема экстрагента ивремени извлечения.

Степень эффективности извлечения аскорбиновой кислотырассчитываласьнаоснованиирезультатовдвухпоследовательных12автоматизированных извлечений из одной и той же пробы с последующимспектрофотометрическим детектированием.При изучении влияния массы навески были зафиксированы объем экстрагента– 1,5 мл и время извлечения в УЗ-ванне (130 Вт, 35 кГц) – 10 мин при температуре 25оС. В картридж помещали от 0,005 до 0,02 г пробы (листья смородины, красный переци яблочное пюре) и проводили циклическое инжекционное определениеаскорбиновой кислоты.

Далее из этой же пробы проводилось вторичное извлечение иопределение аскорбиновой кислоты. На основании полученных результатов (рис. 10),масса всех исследованных проб равная 0,01 г была выбрана для дальнейшихэкспериментов.Рис. 10. Зависимость эффективностиизвлечения аскорбиновой кислоты отмассы пробы в УЗ-поле: A – сладкийкрасный перец; Б – листья смородины; В– яблочное пюре (объем экстрагента –1,5 мл, время извлечения – 10 мин,температура – 25 оС).При изучении влияния объема экстрагента на полноту извлеченияаскорбиновой кислоты из проб были зафиксированы масса пробы – 0,01 г и времяизвлечения в УЗ-ванне – 10 мин. Объем экстрагента варьировался в пределах от 0,5до 2,0 мл.

При изучении влияния времени извлечения аскорбиновой кислоты из проббыли зафиксированы масса навески – 0,01 г, объем экстрагента – 1,5 мл. Времяперемешивания пробы с экстрагентом в картридже потоком газа или под действиемУЗ варьировалось в пределах от 3 до 30 мин. Из полученных результатов (рис. 11 и12) следует, что объем экстрагента равный 1,5 мл и время извлечения в УЗ-полеравное 5 мин являются оптимальными. Извлечение проводилось при температуре 25оС, так как при повышении температуры скорость разрушения аскорбиновой кислотывозрастает.Рис. 11. Зависимость эффективностиизвлечения аскорбиновой кислоты отобъема экстрагента в УЗ-поле: A – сладкийкрасный перец; Б – листья смородины; В –яблочное пюре (масса пробы – 0,01 г, времяизвлечения – 10 мин, температура – 25 оС).Рис.

12. Зависимость эффективностиизвлечения аскорбиновой кислоты отвремени: А – перемешивание воздухом(скорость потока воздуха – 6 мл/мин); Б –УЗ воздействие (объем экстрагента – 1,5мл, масса пробы – 0,01 г, температура – 25оС).13В соответствии с разработанной методикой в три съемных картриджа (1, 2, 3)помещали по 0,01 г пробы измельченного ЛРС (размер частиц меньше 1 мм) илипищевого продукта. Далее все картриджи (1, 2, 3) подключали к многоходовомукрану (5) и помещали в УЗ-ванну (4) (рис. 1). После этого в каждый картриджпоследовательно подавали по 1,5 мл дистиллированной воды через краны (5 и 7) спомощью перистальтического насоса (6).

Затем в течение 5 мин происходилоизвлечение аскорбиновой кислоты в водную фазу под действием УЗ.После этого последовательно в РЕ (8) направляли 0,25 мл экстракта изкартриджа (1), 0,1 мл 5 мМ раствора соляной кислоты (7, a) и 0,25 мл 20 мкМраствора 2,6-ДФИФ (7, с) и поток воздуха (5, d) со скоростью 6 мл/мин в течение 10 с,обеспечивающий интенсивное перемешивание растворов в РЕ. На следующем этапераствор аналитической формы из РЕ (8) при переключении кранов-переключателей(5, 7) и реверса насоса (6) перекачивали в кювету (9) спектрофотометрическогодетектора, измеряли оптическую плотность раствора (λ = 515 нм) в условияхостановленного потока в течение 10 с и раствор сбрасывали.Затем коммуникации системы промывали дистиллированной водой (7, d) иизмеряли фоновый сигнал при заполнении кюветы смешанным растворомполученного экстракта, 5 мМ раствора соляной кислоты и дистиллированной воды(2,5:1:2,5).После промывки системы проводили детектирование аскорбиновой кислоты вэкстрактах, полученных во втором и третьем картриджах (2, 3).Аналитические характеристики разработанной методики представлены в табл.

3.Разработанная методика в отличие от ранее предложенных проточных аналоговобеспечила полную автоматизацию анализа, включая стадию извлеченияаскорбиновой кислоты из ЛРС и продуктов питания в раствор.Табл. 3. Аналитические характеристики циклической инжекционнойспектрофотометрической методики определения аскорбиновой кислоты в ЛРС ипродуктах питания.ПараметрОптимальное значениеКонцентрация соляной кислоты (мМ)5Концентрация 2,6-ДФИФ (мкМ)20о25Температура извлечения ( C)Объем экстрагента (мл)1,5Масса пробы (г)0,01Время извлечения (мин)5Диапазон определяемых0,01 – 0,32концентраций (%)Предел обнаружения (%)0,003Коэффициент корреляции0,999Sr, % (n = 5)7Производительность (проб/час)17Разработанная методика апробирована на различном ЛРС и продуктах питания(табл. 4). Правильность полученных результатов подтверждена методомкапиллярного электрофореза (КЭ) с ультрафиолетовым детектированием.

Результаты,полученные методами ЦИА с извлечением в УЗ-поле и КЭ, были сравнены спомощью F- и t-тестов и представлены в таблице 4.Полученные F-значения ≤ 6,39 указывают на незначительное различие ввеличинах стандартных отклонений, а полученные t-значения ≤ 2,31 указывают на то,14что нет статистически значимого различия между результатами, полученными припомощи двух методик.Табл. 4. Результаты определения аскорбиновой кислоты в ЛРС и продуктахпитания (n=5, P=0,95).Общее содержание АК, %ПробаЦИАКЭF-значение t-значение1,901,70Листья смородины0,21±0,010,20±0,022,302,07Плоды рябины0,14±0,010,12±0,012,100,86Киви0,18±0,010,180±0,005Яблоко «Антоновка»0,060±0,0040,060±0,0031,500,93Сладкий красный0,270±0,0070,250±0,0032,302,10перецЯблочное пюре0,15±0,010,13±0,021,352,20«Агуша»Глава 6. Разработка методики циклического инжекционногоспектрофотометрического определения общего содержания антрахинонов влекарственном растительном сырьеСледующей иллюстрацией возможностей ЦИА в модифицированном поданализ ЛРС варианте явилась автоматизация методики определения антрахинонов вразличном ЛРС.