Автореферат (Циклический инжекционный анализ лекарственного растительного сырья с вскрытием проб в УЗ-поле), страница 4

В начале главы приведены известные решения проблемыопределения антрахинонов, а также способы их извлечения из твердофазных проб.Исходя из литературных данных, антрахиноны, как правило, извлекают ворганические растворители или в водную фазу при нагревании и под давлением. Вданной работе реализован альтернативный метод извлечения антрахинонов из ЛРС,который включает в себя процесс мицеллярно-опосредованного извлечения (МОИ).Было установлено, что использование МОИ при температуре помутнения являетсяэффективной альтернативой использованию органических растворителей дляпроцесса извлечения. В данном случае раствор ПАВ, концентрация которого вышеего критической концентрации мицеллобразования используется в качествеэкстракционного растворителя.

При такой концентрации молекулы ПАВ образуютмицеллы, которые способны извлекать из ЛРС целевые аналиты, предпочтительнонеполярные.Для достижения эффективного извлечения антрахинонов из ЛРС былиоптимизированы такие параметры, как состав экстрагента и его объем, время итемпература извлечения в условиях ЦИА.Различные экстрагенты, такие как ацетон (80 %), этанол, растворы ЦПХ,додецилсульфата натрия и Triton X-100 были изучены для извлечения антрахиноновиз растительного материала.

В ходе экспериментов было установлено, что наиболееполное извлечение антрахинонов наблюдается при использовании раствора Triton X100 при температуре 75 оС (рис. 13).15Рис. 13. Спектры поглощенияализарина в Triton X-100;экстрактов, полученных приизвлечении антрахинонов изЛРС в различные экстрагенты(объем экстрагента – 1,5 мл,время извлечения – 15 мин,масса пробы – 0,1 г,температура – 75 оС).Два различных способа извлечения антрахинонов из ЛРС были изучены вдиапазоне температур от 25 °C до 75 °C (рис. 14): извлечение без и с воздействием УЗ(130 Вт, 35 кГц). Время извлечения было зафиксировано – 15 мин. В ходеэкспериментов было установлено, что в обоих случаях максимум аналитическогосигнала наблюдается при температуре выше 65 °C, при этом процесс извлеченияаналитов в УЗ-поле является более эффективным.Рис.14.Влияниетемпературынаэффективность извлечения антрахинонов изЛРС: А – в УЗ-поле; Б – перемешиваниевоздухом (масса коры крушины – 0,1 г, времяизвлечения – 15 мин, объем экстрагента – 1,5мл, концентрация раствора Triton X-100 – 2%).Рис.15.Влияниевременинаэффективность извлечения антрахиноновиз ЛРС в УЗ-поле (масса корней икорневищ марены – 0,1 г, объемэкстрагента – 1,5 мл, концентрацияраствора Triton X-100 – 2 %, температура –75 оС).Для определения оптимального времени извлечения антрахинонов из ЛРС вУЗ-поле проводилась серия экспериментов при варьировании времени воздействия напробы в УЗ-ванне при 75 оС в пределах от 3 до 20 мин.

На основании полученныхданных (рис. 15), оптимальным временем извлечения является 15 мин. Концентрацияи объем раствора Triton X–100 в диапазоне от 0,01 до 4 % (рис. 16) и от 0,5 до 2,5 мл(рис. 17) соответственно были исследованы, и значения равные 2 % и 1,5 мл быливыбраны в качестве оптимальных.16Рис. 16. Влияние концентрации Triton X-100на эффективность извлечения антрахиноновиз ЛРС в УЗ-поле (масса корней и корневищмарены – 0,1 г, время извлечения – 15 мин,объем экстрагента – 1,5 мл, температура – 75оС).Рис.

17. Влияние объема экстрагента наэффективность извлечения антрахиноновиз ЛРС в УЗ-поле (масса корней икорневищ марены – 0,1 г, времяизвлечения – 15 мин, температура – 75оС).В окончательном варианте разработанной методики 0,1 г измельченного ЛРС(размер частиц меньше 1 мм) помещали в картриджи с ПТФЭ фильтрами (1, 2, 3)(рис. 1).

Далее через краны (5, 7) с помощью реверсивного насоса (6) в картриджи (1,2, 3) подавали по 1,5 мл 2 % раствора Triton X-100 (7, d). Проводили процессизвлечения антрахинонов в УЗ-ванне (4) при температуре 75 оС. Время извлеченияантрахинонов из ЛРС составляло 15 мин. После этого через краны-переключатели (5и 7) с помощью реверсивного насоса (6) в РЕ (8) подавали 0,25 мл экстракта пробы (5,a) из первого картриджа (1), 0,75 мл 2 % раствора Triton X-100 (7, d), 1 мл ацетатногобуферного раствора (pH = 4,5) (5, f) и поток воздуха (5, d) в течение 10 с со скоростью5 мл/мин, обеспечивающий интенсивное перемешивание растворов в РЕ (8).На следующем этапе раствор аналитической формы из РЕ (8) припереключении кранов-переключателей (5, 7) и реверса насоса (6) перекачивали вкювету спектрофотометрического детектора (9), измеряли оптическую плотностьраствора (λ = 435 нм) (Аn) и раствор сбрасывали.Затем коммуникации системы промывали 2 % раствором Triton X-100 (7, d) ипроводили аналогичные действия с извлечениями, полученными во втором и третьемкартриджах (2, 3).На заключительном этапе измеряли фоновый сигнал (А0) при заполнениикюветы детектора (9) 1 мл 2 % раствора Triton X-100 (7, d), 1 мл ацетатногобуферного раствора (pH = 4,5) (5, f).

Значение аналитического сигналасоответствовало разнице между значениями Аn и А0.Аналитические характеристики разработанной методики представлены в табл.5. Разработанная методика в отличие от ранее предложенных проточных аналоговобеспечила полную автоматизацию анализа, включая стадию извлеченияантрахинонов из ЛРС и ЛП в раствор. Предложенная методика определения общегосодержания антрахинонов позволяет устранить необходимость использованияорганических растворителей для извлечения аналитов и минимизировать расходреагентов.17Табл. 5. Аналитические характеристики циклической инжекционнойспектрофотометрической методики определения антрахинонов в ЛРС и ЛП.ПараметрОптимальное значениеКонцентрация Triton X-100 (%)2pH (ацетатный буферный раствор)4,5оТемпература извлечения ( C)65 – 75Объем экстрагента (мл)1,5Масса пробы (г)0,1Время извлечения (мин)15Диапазон определяемых концентраций (%)0,65 – 23Предел обнаружения (%)0,2Коэффициент корреляции0,999Sr, % (n = 5)5Производительность (проб/час)9Разработанная методика была использована для определения антрахинонов вразличном ЛРС и ЛП.

Расчет содержания антрахинонов в анализируемомрастительном сырье осуществляли в пересчете на ализарин. Для проверкиправильности методики проводили их параллельное определение методомпоследовательного инжекционного анализа (SIA), а также спектрофотометрическимметодом в соответствии с фармакопейной статьей. Результаты, полученные методамиЦИА, SIA и референтным фармакопейным методом, были сравнены с помощью F- иt-тестов и представлены в таблице 6.Полученные F-значения ≤ 6,39 указывают на незначительное различие ввеличинах стандартных отклонений, а полученные t-значения ≤ 2,31 указывают на то,что нет статистически значимого различия между результатами, полученными припомощи данных методик.Табл.

6. Результаты определения общего содержания антрахинонов в ЛРС(n=5, P=0,95).Общее содержание антрахинонов*, %ЦИА − Фарм.Фармако ЦИА – SIAстатьяПробаЦИАSIAпейнаяFtFtзначен знач значен значенстатьяиеениеиеиеКорни икорневищамарены5,5 ± 0,15,5 ± 0,25,5 ± 0,32,081,032,822,20Кора крушины8,3 ± 0,18,2 ± 0,18,3 ± 0,31,011,703,150,22Таблетки«Мареныкрасильнойэкстракт»2,8 ± 0,12,7 ± 0,12,8 ± 0,21,321,402,300,80*в пересчете на ализарин18Выводы1. Разработана общая аэрогидравлическая схема циклического инжекционногоанализа лекарственного растительного сырья с ультразвуковым вскрытием проб.2. Показана возможность минимизации кинетических ограничений приобразовании комплексов флавоноидов с ионами алюминия (III) в средахцетилпиридиния хлорида.3.

Установлены условия извлечения флавоноидов, аскорбиновой кислоты иантрахинонов из лекарственного растительного сырья в раствор под действием УЗдля их экспрессного спектрофотометрического определения.4. Разработана и аттестованаметодика циклического инжекционногоспектрофотометрического определения флавоноидов в лекарственном растительномсырье (методика измерений № 01.06.155, свидетельство об аттестации №01.5.03.178/01.00043/2014). Предел обнаружения флавоноидов в пересчете на рутинсоставляет 0,1 %. Производительность анализа − 8 проб/час.5. Разработана методика циклического инжекционного спектрофотометрическогоопределения аскорбиновой кислоты в лекарственном растительном сырье ипродуктах питания.

Предел обнаружения аскорбиновой кислоты составляет 0,003 %.Производительность анализа − 17 проб/час.6.Разработана и аттестована методика циклического инжекционногоспектрофотометрического определения общего содержания антрахинонов влекарственном растительном сырье (методика измерений № 01.06.152, свидетельствооб аттестации № 01.5.03.177/01.00043/2014). Предел обнаружения антрахинонов впересчете на ализарин составляет 0,2 %.

Производительность анализа − 9 проб/час.7. Разработанные методики ЦИА апробированы на реальных пробах (различномлекарственном растительном сырье и продуктах питания). Правильность результатовподтвержденаметодамициклическойвольтамперометрии,капиллярногоэлектрофореза и SIA.Список работ, опубликованных по теме диссертацииСписок статей, опубликованных в журналах, содержащихся в перечне ВАК РФ:1. М.Т. Фалькова. Спектрофотометрическое определение флавоноидов врастительном сырье / А.В.

Булатов, М.Т. Фалькова, М.О. Пушина, Л.Н. Москвин,Г.М. Алексеева // Аналитика и контроль. − 2012. − Т. 16. − № 4. − С. 358–362.2. M.T. Falkova. Stepwise injection spectrophotometric determination of flavonoids inmedicinal plants / M.T.

Falkova, M.O. Pushina, A.V. Bulatov, G.M. Alekseeva, L.N.Moskvin // Analytical Letters. − 2014. − V. 47. − P. 970−982.3. M.T. Falkova. On-line flow-batch based ultrasound-assisted surfactant-mediatedextraction and determination of anthraquinones in medicinal plants / M.T. Falkova, M.Alexovič, M. Pushina, A. Bulatov, L. Moskvin, V. Andruch // Microchemical Journal. –2014. − V. 116. − P. 98−106.Список других работ:1.

М.Т. Фалькова. Циклическое инжекционное спектрофотометрическое определениефлавоноидов в растительном сырье / М.Т. Фалькова, А.В. Булатов, Л.Н. Москвин //Санкт-Петербургский международный форум «Фармацевтика. Медицинскаяпромышленность. Биотехнологии». Санкт-Петербург. Сборник тезисов. − 2012. − С.189–190.192. М.Т. Фалькова. Циклическое инжекционное спектрофотометрическое определениефлавоноидов в растительном сырье / М.Т. Фалькова, А.В. Булатов, Л.Н.