Отзыв на автореферат 3 (Сравнительный анализ связывающей и эстеразной активности сывороточного альбумина человека, быка и крысы)

ОТЗЫВ ИА АВТОРЕФЕРАТ диссертации Шмуракй Владимира Игоревича «Сравнительный анализ связывающей и эстсразной активности сывороточного альбумина человека, быка и крысы», представленной на соискание ученой степени кандидата биологических наук по специальности ОЗ.О 1.04 — биохимия. Известно, что сывороточный альбумин связывает и транспортирует самые рйзные эндОГенные и экзогснныс сосдинсния, во мнОГОм Ог!ределяя ес'!'сственеЕый метаболизм, а также фармако- и токсикокинетику лекарств и токсических веществ.

В то жс время. очень мшю известно о фсрментативной активности альбумина, практически ничего не извеспю о межвидовых Епличиях, хотя эти особенности. если они существуют, важны как с теоретической, так и с практической точек эре~ил, их необходимо Обязйтельно учитьЕвйть при проведении эксперимсеЕтйл!.Иых исследований, доклинических и клинических испытаний, Отеюсителе по недавно стало известно, что в крови человека совсем нет кйрбоксилэстераз, в то время как важнейшей особенностью плазмы крови грызунов (Ееаиболее популярный обьект в экспериментальеЕьЕх иссеЕедованиях) являстся наличис в нсй большоГО количсствй карбоксилэстераз.

В плазме крови быка также отсутствуЕот карбоксилэстеразы, но именно бычий альбумин является наиболее дешевым и досгупным для проведения лаборагорных исследований. Совокупность этих и других фактов и вопросов определяет актуальность темы диссертационного исследования В.И, Шмурака. Цель работы состояла в исследовании и о!!Го и т Я!!!со связываюпЕсй и эстсразной активности сывороточного альбумепи человека, быка и крысы.

Представляется принципиально важной предложенная диссертантом универсальная схема взаимодействия с альбумином субстратов и ингибиторов эстераз, которая применима, с одной стороны, для определения характеристик прсдстационарного и стационарного состояния альбумина как единой молекулы, другой стороны — для определения аналогичных характеристик каждого из двух сайтов Садлоу.

Установлено, что сайт Садлоу 1 КСА обладает максимальной каталитической эффективностью по отношению к ее-нитрофенилацетату, тогда как сродство сайта Садлоу П ЬСА к л-нитрофенилацегату выше по сравнению с КСА и ЧСА. В то же время, по отношению к параоксону каталитическая эффективность сайта Садлоу 1 максимальна у ЬСА, в десятки раз превыпия каталитическую эффективность КСА и ЧСА. Эти и другие данные, полученные с применением специфических ингибиторов, убедительно доказыванзт, что характеристики КСА и ЧСА гораздо ближе между собой, но существенно отличакэтся от характеристик БСА. Интересно также отметить, что фосфорилирование сайта Садлоу Н всех трех видов альбу мина при взаимодействии с параоксоном происходит быстрее ацетилирования этих сайтов. Трудоемкие дополнительные исследования кинетики взаимодействия с альбумином высокотоксичного зомана с применением метода косвенной оценки активности альбумина через определение остаточного ингибирования ацетилхолинэстеразы позволили диссертанту высказать предположение о преимущественно транспортных функциях сайта Садлоу 11 при токси кол огичсски релевантных концентрациях зомана.

К тому же данные молекулярного моделирования свидетельствуют о том, что сродство к '1'уг411 в Садлоу Ц выше у нетоксичных Р(+) изомеров зомана„в то время как сродство к сайту Садлоу 1 выше у токсичных Р(-) изомеров зомана и оптически неактивного параоксона. Казалось бьц альбумин должен каталитическн инактивировать фосфорорганические соединения в сайте Садлоу 1, если учесть другие данные, полученные в данной работе и свидетельствующие о каталитических возможностях сайта Садлоу 1 (Туг150, Яег193, 1.ув402). Однако не все так просто: во-первых, катализ происходит медленно, а во-вторых — и это, может быть, самое главное- данные молекулярного моделирования характеризуют вторую стадию взаимодействия ФОС с сайтами альбу мина, отсюда и противоречие между данными, полученными 1и игго и и яйсо.

Первичное сродство, характеризуемое кажущейся констаьггой Михаэлиса или субстратной константой, в сайте Садлоу 1 на два порядка ниже, чем в сайте Садлоу 11. Диссертант в своей работе не только продемонстрировал владение методами молекулярного моделирования и биохимическими методами, но красиво и убедительно доказал, что в современной науке комплексный подход с применением методов биофизики и биохимии способен решать очень сложные и противоречивые задачи.

Вьппеизложенное позволяет заключить, что диссертант провел экспериментальные исследования на современном методическом уровне. Количество публикаций по теме диссертации существенно превышает требования, предъявляемые к кандидатским диссертациям. Содержание автореферата отличается логической завершенностькк наиболее важныс результаты представлены в таблицах и рисунках. Единственное замечание касается качества печати: надписи на рис,4 и оттенки на рис.б трудноразличимы.

Других замечаний и вопросов по содержанию, выводам и оформлению автореферата нет. Представленное диссертационное исследование по своей актуальности, научной новизне, пракгичес кой значимости и методическому уровню исследований соответствует требованиям п,9 "Положения о присуждении ученых степеней", утвержденного Постановлением Правительства Российской Федерации от 24 сентября 2013 г. №842, а его автор, Шмурак 13ладимир Игоревич, заслуживает присуждения искомой степени кандидата биологических наук по специальности 03.01.04 — биохимия.

1 лавный научный сотрудник Института биофизики клетки РЛН, доктор биологических наук, профессор Новоселова Елена Григорьевна Специальность: 03.01,04 — биохимия. Лдрес: 142290, г.Пущино Московской обл., ул. Институтская, 3, ИБК РЛН Телефоны: (4967) 73-05-19; (4967) 33-05-09, Эл. почта: айшпфсЬ.ран.гп подпись Новоселовой Е.Г, заверяю: .