Автореферат (Сравнительная иммуноморфологическая и спектроскопическая характеристика опухолей почек), страница 3

В отдельных клубочках отмечали проявленияфокального или тотального гломерулосклероза, либо умеренного гиалиноза капиллярныхпетель. В интерстициальном пространстве почки практически во всех случаях обнаруживали14участки разрастания соединительной ткани различной степени выраженности от умеренногосетчатого до крупноочагового склероза, а также лимфогистиоцитарную инфильтрацию. Нарядус измененными отмечали участки, лишенные вышеописанных признаков, и соответствующиенеизмененной паренхиме почки.

Спектральные особенности данных образцов тканихарактеризовались, с одной стороны, отсутствием рамановских пиков и, с другой стороны, ещебольшим снижением локального максимума флуоресценции (2000+28,6 см-1), обусловленногофлуоресценцией эндогенных порфиринов,свойственных опухолевым узлам (Рис.1Г). Ещеодной характерной особенностью спектральной картины визуально неизмененной ткани почкибыли различия спектров, регистрируемых сполей склероза и участков неизмененнойпаренхимы.

Они существенно отличались друг от друга как количеством, так и положениемлокальных максимумов в спектре флуоресценции. Сводный результат спектроскопическогоисследования образца светлоклеточного ПКР показан на рисунке 1.Анализируя результаты морфологического и спектроскопического исследованийсветлоклеточного ПКР можно сделать вывод о том, что появление пиков и идентификацияфенилаланина, метионина и в-каротинов на спектре объясняется усилением синтеза каконкобелков, так и свойственных опухолевым клеткам эмбиональных белков, происходящего вопухолевом узле.

Каротины, напротив, не принимают участия в формировании опухолевых иэмбриональных белков, являясь пигментами и провитаминами, и подвергаются метаболизму впечени с образованием активных форм витамина А. Что касается экскреции каротинов, топоследняя является, в основном, прерогативой почек, а в условиях развития в одной из нихопухоли, резко затрудняется и сопровождается повышением их концентрации в паренхимепочки, что и регистрируется спектроскопически.Результаты иммунорфологического и спектроскопического исследований образцовпапиллярного почечноклеточного ракаВ отличие от светлоклеточных форм рака почки опухолевый узел макроскопическиимел нечеткие неровныеграницы, диаметр его варьировал от 1,0 до 4,8 сантиметров.Гистологическая картина в 7 случаях соответствовала1 типу папиллярного рака ихарактеризовалась наличием множественных сосочковых структур, образованных некрупнымикомпактно расположенными клетками, большинство из которых содержали мелкие ядра иналичием единичных ксантомных клеток.

При иммуногистохимическом исследовании сиспользованием антител к виментину, СК-7 и CD10 в 7 случаях (70%) было выявленвыраженная положительная экспрессия всех трех маркеров и лишь в трех случаях (30%)экспрессия маркера CD10 соответствовала умеренно положительной (p<0,05) (Рис.4).15Раман-флуоресцентное спектроскопическое исследование образца из центральной частиопухолевого узла выявило две особенности спектров этого типа рака. С одной стороны,максимум флуоресценции наблюдался на частоте рамановского сдвига, соответствующей 1510см-1, что соответствовало суммарной флуоресценции липопигментов и флавинов, с другойстороны, рамановские пики, столь характерные для светлоклеточного рака, отсутствовали(рис.5А.)Другая особенность этой формы была выявлена при исследовании образца, полученногоизпериферическойчастипатогистологической,такопухоли,иивыражаласьвраман-спектроскопическойпочтиполномхарактеристиксходстве(рис.как5А)заисключением того обстоятельства, что по шкале интенсивности относительных единицфлуоресценции центру опухоли соответствовали более высокие (22575+1227,7) по сравнению спериферией опухоли (15250+372,68) значения, как локального максимума, так и инициальнойфлуоресценции – 17570+1345,6 и 9050+407,1 соответственно.Образцыпапиллярногохарактеризовалисьрака,выраженнымотнесенногокакковторомуморфологическим,такгистологическомуитипуспектроскопическимразнообразием.

Образец, полученный из центра опухолевого узла, содержал ткань опухоли,представленную сочетанием бесформенных скоплений и компактных гнёзд крупных клеток сяркой эозинофильной цитоплазмой и тубулярно-сосочковых структур, сформированныхмелкими клетками. Рамановская спектроскопия выявила несколько рамановских пиков,соответствовавших колебаниям молекул гидроксильного радикала (582 см-1), комплексажирных кислот (1100 см -1) и идентифицировала углеводородную связь липидов и белков начастоте рамановского сдвига 2873 см-1.

При этом максимум флуоресценции соответствовалчастоте в 2200+2,52 см-1 и был обусловлен флуоресценцией эндогенных порфиринов (рис. 6А.).Исследованиепериферииопухолевогоузлавыявилоещебольшуюгетерогенностьморфологических проявлений опухоли, расцененную нами, как возможное сочетание двухгистологических типов папиллярного рака. Что касается спектральных характеристик опухоли,то они соответствовали центроузловым и по наличию рамановских пиков, и по ихкачественным характеристикам, а также по частоте рамановского сдвига и шкалеинтенсивности относительных единиц (рис. 6А).При изучении участка ткани почки, находящегося на максимальном удалении отосновного опухолевого узла, структурно-функциональные элементы нефрона выгляделиотносительно сохранными, и лишь в эпителии проксимальных и дистальных извитых канальцевнаблюдали признаки гидропической дистрофии и фокального некроза.

Раман-флуоресцентныйспектр, напротив, имел особенности в виде наличия двух локальных максимумов16флуоресценции, соответствующих суммарной флуоресценции липопигментов и флавинов (1200см-1) и флуоресценции эндогенных порфиринов на совершенной иной частоте рамановскогосдвига (2490 см -1) (рис. 6Б).Результаты иммуноморфологического и спектроскопического исследований образцовхромофобного почечно-клеточного ракаВ 4 случаях классического варианта хромофобного рака опухоль была построена из крупныхокруглых или полигональных клеток с бледной плохо прокрашиваемой цитоплазмой и четкими,хорошо выраженными клеточными мембранами и внутриклеточными перегородками, а такжеклетокменьшихразмеров,располагающихсябеспорядочно.Результатыиммуногистохимического исследования определили отрицательную экспрессию маркеровCD10 и виментина во всех 8 случаях и умеренно положительную экспрессию СК-7, что такжеподтверждает диагноз хромофобного ПКР, поставленный патогистологически (p<0,05) (Рис.7).Раман-флуоресцентный спектр, соответствующий центральной части опухолевого узлахарактеризовался отсуствием рамановских пиков и наличием сразу трёх локальных максимумовфлуоресценции в точках рамановского сдвига 1200 см-1, обусловленной суммарнойфлуоресценцией липопигментов и флавинов, и в точках 2500 см-1 и 4310 см-1, связанной сфлуоресценцией эндогенных порфиринов (Рис.

5). Периферическая часть опухолевого узласпектроскопически характеризовалась началом флуоресценции 2500+15,95 отн. ед., локальныймаксимум флуоресценции липопигментов и флавинов соотвествовал центроузловому, Чтокасается максимума флуоресценции эндогенных порфиринов, то он также, как и в центре узлаимел два значения, но существенно отличавшихся от центроузловых (2130+17,24 см-1 и3125+49,74 см-1).При исследовании визуально неизмененного участка почечной ткани,максимально удаленного от узла опухоли, наблюдали умеренно выраженные явлениягидронефроза, дистрофические изменения эпителия проксимальных и дистальных канальцев,единичные гиалинизированные клубочки и мелкие артериолы, очаговый склерозлимфогистиоцитарнуюинфильтрациюинтерстициальногопространства.иРаман-флуоресцентное исследование зарегистрировало относительно высокие значения начальнойфлуоресценции (5000 отн.

ед.) и локальные максимумы флуоресценции в точках рамановскогосдвига 1200+11,32 см-1 и 2130+19,14 см-1, обусловленные флуоресценцией липидов и флавинови эндогенных порфиринов соответственно (Рис. 8).Эозинофильный вариант хромофобного почечно-клеточного рака при гистологическомисследованиихарактеризовался значительным преобладанием клеточной паренхиматознойсоставляющей над стромальной. Опухоль состояла из разнообразных клеток с яркой17эозинофильной цитоплазмой (Рис.

9Б), причем данная особенность оказалась свойственной какцентроузловым, так и периферическим участкам. Раман-флуоресцентные спектры центральныхи периферических участков опухолевого узла оказались полностью идентичными по всемпоказателям:начальнойинтенсивностифлуоресценции,локальныммаксимумамфлуоресценции и их значениям в точках рамановского сдвига. (Рис.9А). Спектр участкаинтактной ткани почки, находящегося на максимальном удалении от опухолевого узла,отличался значением начальной флуоресценции и наличием только одного локальногомаксимума флуоресценции (Рис.9А).Результаты морфологического и спектроскопического исследований образцов контрольнойгруппы.Образцы ткани почек контрольной группы были получены у лиц, причина смерти которыхбыла не связана с почечной патологией.

Отсутствие патологии почек было подтверждено прижизни больных как клиническими данными, так и лабораторными исследованиями,предусмотреннымиСтандартами обследования и лечения больных ссоответствующейпатологией. Гистологически во всех исследованных случаях признаков патологии насветооптическом уровне обнаружено не было (Рис. 10Б, 10В).

Спектроскопически образцыпочек контрольной группы характеризовались выраженной «двугорбой» формой спектра,свойственной нормальным неповрежденным тканям. Показатели начальной флуоресценциисоответствовали высоким значениям интенсивности и располагались в промежутке от 36000 до42000 относительных единиц по оси интенсивности. Локальные максимумы флуоресценции,обусловленные суммарной флуоресценцией липопигментов и флавинов и эндогенныхпорфиринов характеризовались относительно невысокими значениями (970+9,42 см-1,1130+10,25 см-1 и 2000+13,54 см-1 соответственно) (Рис.