Диссертация (Разработка инъекционных лекарственных форм цифетрилина), страница 8

Частичное удаление органического растворителя на роторномиспарителе приводит к обращению фаз. При дальнейшем удаленииорганическогорастворителявысококонцентрированнойнаблюдаетсягелеподобнойформированиелипосомальнойдисперсии,которую разводят буфером или водным раствором. Эффективностьинкапсуляции ЛВ в методе обращения фаз значительно выше, чем прииспользовании плёночного методами.

Недостатком метода являетсясложность в полном удалении остаточного органического растворителя.42Дегидратация-регидратацияПолученные методом обращения фаз или плёночным методом МЛЛлиофилизируют, далее продукт лиофилизации регидратируют воднымраствором. В данном случае образуются МЛЛ с высоким уровнемвключения ЛВ.ЭкструзияДанный метод заключается в измельчении МЛЛ, полученных однимиз представленных выше методов, посредством пропускания поддавлениемлипосомальнойдисперсиичерезмембраныспорамиварьируемых размеров (от 1,2 до 0,05 мкм). Средний размер получаемыхлипосом зависит от диаметра пор используемого фильтра, фильтрующегоматериала, числа циклов экструзии, концентрации липидов в дисперсии идр.Преимуществамиэкструзииявляются:получениегомогеннойдисперсии, незначительное окисление липосомальных ФЛ, возможностьрегулирования температуры процесса и обеспечение совмещения процессаизмельчения липосом и стерилизации дисперсии.

Также экструзияблагоприятствует более однородному распределению гидрофобного ЛП ихолестерину в структуре бислоя [29].Микрофлюидизация/ГомогенизацияВ промышленных масштабах с целью измельчения липосомиспользуют технологии микрофлюидизации и гомогенизации. Еслисравнивать с микрофлюидайзером, где поток водной среды выбрасываетсяи в последующем смешивается в интерактивной камере, гомогенизаторыработают по другому принципу. Жидкий образец в гомогенизаторе подвысоким давлением продавливается через отверстие и затем ударяется остенку, выполненной из нержавеющей стали. Циркулирование дисперсиипод влиянием высокого давления по системе гомогенизатора в течениеопределенного периода времени приводит к постепенному снижениюразмера липосом [7].43Обработка УЗФормирование ММЛ из МЛЛ в процессе обработки УЗ происходитза счет явления кавитации [101]. С помощью УЗ получают небольшиеобъёмыдисперсий,посколькуданныйметодявляетсявесьмаэнергозатратным и требует большого количества времени.

Критическимифакторами озвучивания липосом являются размер образца и егорасположение в УЗ-ванне, что затрудняет получение воспроизводимыхрезультатов. Под влиянием УЗ образуется гетерогенная дисперсия сналичием крупных остаточных везикул. На размер получаемых везикулвлияют следующие факторы: концентрация холестерина, фосфолипидныйсостав, температура процесса, частота УЗ и время обработки [113,122,140].Липосомы, которые были получены в результате обработки УЗ, обладаютдиаметром меньше 40 нм и являются нестабильными, вследствие высокойстепени кривизны мембраны везикул.

Липосомы спонтанно сливаются притемпературе хранении ниже Тф.п., тем самым формируя частицы с большимдиаметром (от 60 до 80 нм) [131]. Таким образом, полученные в результатеУЗ обработки липосомы следует хранить при комнатной температуре взащищённом от света месте.ИнжекцияВ качестве альтернативы УЗ с начала 70-х гг. XX-го века дляполучения дисперсии ММЛ стали применять метод инжекции [25]. Дляполучения ММЛ в перемешиваемый водный раствор быстро впрыскиваютспиртовой раствор ФЛ. В данном случае размер везикул зависит отскорости впрыскивания, а также концентрации ФЛ и спирта. Дляформирования везикул с малым диаметром требуется, чтобы концентрацияФЛ не была выше 40 мМ, а конечная концентрация спирта в дисперсии недолжна превышать 7,5 %. Недостатком метода является наличиеостаточного спирта в дисперсии ММЛ.44Замораживание-оттаиваниеНужное количество раз полученные ранее МЛЛ замораживают вжидком азоте и затем размораживают на водяной бане (при температуре ~40 °С).

По завершении процедуры получают однородные по размеру ММЛ,обладающие стабильным бислоем при комнатной температуре.1.3.5 Загрузка лекарственного вещества в липосомыЛЛФ используются при лечении онкологических, инфекционных идр. заболеваний, в диагностике для визуализации очагов поражения,сосудистых систем и т.п. В этих случаях очень важно достичьмаксимальной эффективности загрузки липосом лекарственными илидиагностическими субстанциями. Как правило, для введения в организмиспользуют липосомы размером  100 нм для уменьшения захваталипосом клетками РЭС и увеличения эффекта «пассивного нацеливания».Степень включения полярных веществ в такие липосомы невелика (20 %). Как следствие, низкой оказывается и удельная загрузка липосом, т.е.соотношение внутрилипосомной субстации/липиды.

Чтобы увеличитьудельную загрузку, липосомы получают в более концентрированныхрастворах субстанции или загружают вещество в липосомы с помощьюионных градиентов (активная загрузка). Увеличение концентрацииограниченорастворимостьювещества,крометого,эффективностьвключения вещества при этом не изменяется, что приводит к повышениюсебестоимости препарата. Таким образом, предпочтительнее использоватьметодики активной загрузки. Часто для активной загрузки липосомслабыми основаниями используют трансмембранный протонный градиент,но, как правило, градиент рН нестабилен во времени, что приводит квысвобождению содержимого везикул в течение нескольких часов и дажеминут.

Кроме того, градиент рН не может быть использован дляконцентрирования веществ, нестабильных в кислотных или щелочныхсредах. [12]45Активную загрузку слабых амфифильных оснований в липосомыможно осуществить с помощью ионных градиентов неорганических солейаммония. Градиент концентраций соли между внутренним и внешнимобъемами липосомальной дисперсии образуется при удалении соли извнешней среды. Ионный градиент, создаваемый сульфатом аммония,стабилен во времени, не требует изменения рН внешней среды, а такжеподходит для липосом различного состава и независимо от метода ихполучения.Действующаясилаградиента(NH4)2SO4обусловленазначительной разницей в коэффициентах проницаемости через липидныйбислой (Р) для различных соединений и ионов: Р(NH4)2SO4 <РSO42- <PNH4+ << PH+ <<< PNH3.

Очень высокий коэффициент проницаемости длямолекулы аммиака (Р ~ 0.13 см/с) приводит к быстрой диффузиинейтральных молекул NH3, образующихся при диссоциации катионоваммония во внутрилипосомном пространстве. Диффузия аммиака излипосом по градиенту концентраций (в начальный момент концентрацияNH3 вне липосом пренебрежимо мала) приводит к понижению рН вовнутреннем объеме липосом. В свою очередь загружаемое основание внейтральной форме способно проникать через бислой. Однако, приобретаяположительный заряд в кислой среде внутреннего объема липосом, онопочти полностью теряет эту способность, т.к. коэффициент проницаемостидля заряженной молекулы значительно меньше, чем для незаряженной.Кратко этот процесс можно описать как обмен через мембрану аммиака изагружаемого основания (антипорт). В зависимости от концентрациилипидов и активного вещества, а также константа распределения (Кр)загружаемого основания эффективность загрузки меняется от 40 до 99 %.[12]Для загрузки слабых кислот можно использовать градиент ацетатакальция; в этом случае движущей силой активной загрузки являетсяантипорт уксусной кислоты и загружаемой слабой кислоты.461.3.6.

Стабилизация липосом лиофилизациейПри хранении стабильность липосом увеличивается благодаряприменению лиофилизации (сублимационной сушки), что базируется наудалении воды, которая вызывает гидролиз ФЛ; физическая и химическаядеградация липосом невозможна из-за низкой молекулярной подвижностив твёрдой фазе [18,133].В присутствии особенных защитных веществ проводят процесслиофилизации – криопротекторов. Без криопротекторов сублимационнаясушка липосом ведёт к их слиянию и дальнейшей агрегации [90]. Черезследующиемеханизмысвоёзащитноедействиепроявляюткриопротекторы[37]:Взаимодействие с фосфолипидами.

Водородные связи с фосфатнымфрагментом ФЛ (головные группы) образуют гидроксильные группымолекул сахара (криопротектора) на стадии сушки и соответственнозамещают воду [45,46].Образование матрицы. Аморфная матрица, которая препятствуетслияниюиповреждениюбислояприформированиикристаллов,образуется между везикулами. Формирование матрицы связано с тем, чтово время замораживания концентрируется раствор сахара, а сахарнаяматрица, обладающая низкой подвижностью и большой вязкостью,предохраняет везикулы от агрегации, слияния, защищает от повреждениякристаллами льда липидный слой при замораживании, формируется вовремя сушки.

К тому же, наличие матрицы ингибирует конформационныеизменения,которыесвязанысфазовымпереходомлипидов,авзаимодействие между матрицей и поверхностью липосом снижаетповерхностноенатяжение,темсамымстабилизируявысушенныелипосомы [94,125].Криопротекторы эффективны тогда, когда они присутствуют нетолько снаружи, но и внутри липосом в концентрации больше 2,5%.47Дисахариды(лактоза,предпочтительнымитрегалозаисахароза)криопротекторамивсравненииявляютсяссамымимоносахарами(глюкоза).

Для того чтобы обеспечить защиту липосом при лиофилизациисахара, подобные сахарозе и трегалозе, должны быть в концентрации 520% [132].1.3.7. СтерилизацияЛЛФ-лио, как и другие ЛФ, использующиеся для инъекции, должныбыть стерильны. Можно в асептических условиях получать ЛЛФ, но этодорогостоящая и сложная процедура. Традиционные методы стерилизации,а именно автоклавирование, являются неэффективными и ведут кзначительномунарушениюструктурылипосом.Длястерилизациилипосом также предпринимались попытки.

Тем не менее облучениерастворов липидов и суспензий липосом гамма-лучами в широкомдиапазоне доз и электронами приводило к нарушению их структуры,агрегации, изменению формы пиков фазовых переходов и ПОЛ.Следовательно,быларассмотренавозможностькриорадиационнойстерилизации липосом. Данный метод, который был ранее разработан дляширокого класса растворов препаратов, включает в себя облучениестерилизующей дозой в замороженном состоянии, замораживание системыи размораживание. С липосомами препарата связана биологическаяактивность, которая подвергнута облучению стерилизующей дозой взамороженном состоянии, и является неизменной.