Автореферат (Возможности использования тканеинженерных конструкций в хирургическом лечении тазового пролапса)

На правах рукописиСУЛИНА ЯНА ЮРЬЕВНАВОЗМОЖНОСТИ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ТКАНЕИНЖЕНЕРНЫХКОНСТРУКЦИЙ В ХИРУРГИЧЕСКОМ ЛЕЧЕНИИТАЗОВОГО ПРОЛАПСА14.01.01 –Акушерство и гинекология14.03.03 – Патологическая физиологияАВТОРЕФЕРАТдиссертации на соискание ученой степеникандидата медицинских наукМосква-2018Диссертационная работа выполнена в федеральном государственномавтономномучреждениивысшегообразованияПервыйМосковскийгосударственный медицинский университет имени И.М.

Сеченова Министерстваздравоохранения Российской Федерации (Сеченовский Университет)Научные руководители:Александров Леонид СеменовичДоктор медицинских наук, профессорЛюндуп Алексей ВалерьевичКандидат медицинских наукОфициальные оппоненты:Буянова Светлана Николаевна – доктор медицинских наук, профессор, ГБУЗМосковской области «Московский областной научно-исследовательский институтакушерства и гинекологии», гинекологическое отделение, руководитель отделенияТрубицына Ирина Евгеньевна – доктор медицинских наук, ГБУЗ «Московскийклинический научно-практический центр имени А.С. Логинова Департаментаздравоохранения города Москвы», лаборатория доклинических исследований,заведующая лабораториейВедущие организации: Федеральное государственное бюджетноеобразовательное учреждение высшего образования «Российский национальныйисследовательскиймедицинскийуниверситетимениН.И.Пирогова»Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО РНИМУим.

Н.И. Пирогова Минздрава России)Защита диссертации состоится «___» _________ 2018г. в _____ часов назаседании диссертационного совета Д.208.040.03 в ФГАОУ ВО Первый МГМУ им.И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет) по адресу (119991,г. Москва, ул. Трубецкая, д. 8, стр.2).С диссертацией можно ознакомиться в ЦНМБ ФГАОУ ВО Первый МГМУим. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет) по адресу:119034, г.

Москва, Зубовский бульвар, д. 37/1 и на сайте ФГАОУ ВО ПервыйМГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет)http://www.sechenov.ru.Автореферат разослан «___»___________________ 2018г.Ученый секретарьдиссертационного совета Д 208.040.03доктор медицинских наук, профессорШулутко Александр Михайлович2ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ИССЛЕДОВАНИЯАктуальность темы исследования По данным эпидемиологическихисследований в гинекологии, пролапс гениталий – патология, достигающая 34,1–56,3% среди женской популяции некоторых стран. По данным отечественныхавторов частота пролапса гениталий колеблется от 1,7 до 38,9% и средигинекологических заболеваний составляет 28–38,9%, около 15% от так называемыхбольших гинекологических операций (В.В. Бахаев, В.Э. Гюнтер, Г.Ц.

Дамбаев ссоавт., 2010; А.И. Ищенко; А.Н. Шулутко с соавт., 2007). Особую актуальностьпроблема пролапса гениталий приобретает ввиду тенденции к «омоложению» этойпатологии,сопровождаемойтяжелымидисфункциональнымиизменениямисоседних органов. По данным Краснопольского В.И., Адамян Л.В., Кулакова В.И.опущение и выпадение внутренних половых органов наблюдается у 15-30%женщин, а у женщин старше 50 лет частота пролапса возрастает до 40% (АдамянЛ.В., Блинова М.А., 2000; Кулаков В.И., Адамян Л.В., 2000; Краснопольский В.И.,2004).

У 85,5% больных развиваются функциональные расстройства смежныхорганов: недержание мочи – у 70,1% пациенток, нарушение дефекации – у 36,5%,диспареуния – у 53,3% больных (Кулаков В.И., Прилепская В.Н., 2008). Внастоящее время наиболее эффективным методом лечения пролапса гениталийпринято считать хирургическое вмешательство. По данным исследователейсуществует от 200 до 500 видов операций по устранению пролапса гениталий (А.И.Ищенко; А.Н.

Шулутко с соавт., 2007). Такое большое количество операцийобъясняется тем, что полученные результаты не всегда устраивают пациенток иврачей в связи с высокой частотой рецидивов (30-50%). В последние десятилетиябольшее распространение получили операции с использованием имплантируемыхматериалов (бионедеградируемых и биодеградируемых). Использование сетчатыхпротезов при пластике промежности сопровождается более низким процентомповторного возникновения пролапса (5-40%). Однако, накопленный опыт выявилналичиеспецифическихmesh-ассоциированныхосложнений(2-10%)прииспользовании сетчатых имплантатов, таких как: эрозия сетчатого протеза,инфекционныеосложнения,mesh-ассоциированнаяретракция,диспареуния,хроническая тазовая боль, что приводит к необходимости создания новыхимплантационных материалов (Ищенко А.И., Шульчина И.В., 2014).3Одним из путей решения данной проблемы может являться созданиетканеинженерных конструкций для восстановления фасциальных дефектовтазовогодна,созданныхнаосновематрицы(бионедеградируемойибиодеградируемой) и аутологичного клеточного материала (Elmer C., Blomgren B.,2009; Long J.L, Zuk P., 2010; McIntosh K., Zvonic S., 2006; Liu G., Zhou H., 2008;Kumai Y., Kobler J.B., 2010; Aboushwareb T., McKenzie P., 2011; Boennelycke M.,Christensen L., 2011; Boennelycke M., Gras S., 2012; ShiL.B., Cai H.X., 2014).Подобные конструкции нашли свое применение при хирургическом леченииабдоминальных и диафрагмальных грыж (Zheng M.H., Chen J., 2005; Kaleya R.N.,2005; Novi J.M., Mulvihill B.K., 2005; Morini F., Bagolan P., 2012; РазумовскийА.Ю., Мокрушина О.Г, 2016), однако сведения о применении данных конструкцийв хирургии тазового дна носят единичный характер (Jensen K.K., Rashid L., 2014;Хубезов Д.А., Трушин С.Н., 2016) и является преимущественно зарубежнымопытом (Zheng M.H., Chen J., 2005; Kaleya R.N., 2005; Novi J., Mulvihill B., 2005;MoriniF., Bagolan P., 2012; Jensen K.K., Rashid L., 2014; Разумовский А.Ю.,Мокрушина О.Г., 2016; Хубезов Д.А., Трушин С.Н., 2016).Степень обоснованности и достоверности полученных результатовДиссертационная работа выполнена на высоком методическом уровне.Достоверностьрезультатовисследованияполностьюдоказываетсяпредоставленным материалом.

Полученные результаты основаны на достаточномобъеме исследований: изучены и проанализированы 114 российских и зарубежныхисточников. Проведеноуглубленноеиммуногистохимическоеисследованиеморфологическое,иоцененамикроскопическое,тканеваяреакция136биопсийных образцов, полученных от 55 лабораторных животных (крысы породыВистар).Оценкатканеинженерныхжизнеспособностиконструкцияхклетокпроизводиласьвпоклеточно-инженерныхсредствамсветовойииконфокальной микроскопии.

В работе использована широкая панель первичныхантител для проведения оценки степени пролиферации (Ki-67), апоптоза (Caspasa3, Caspasa-9), антиапоптоза (Bcl2) и ангиогенеза (CD31, CD51/61, Col3A1). Оценкатканевой реакции на внедрение хирургических сеток и биологического имплантатас МСК Км и ДФ производилась на основании индексов пролиферации, воспаленияи регенерации. На всех этапах в процессе исследования использовались4общенаучные методы – синтез, анализ, индукция. Обобщение, сравнение илогическийметод;напоследующихстатистические методы.

Выводыиэтапахрекомендацииисследованиялогичнопримененывытекаютизсодержания диссертации, отражают поставленные цель и задачи, научноаргументированыиимеют научно-практическуюзначимость.Авторефератсоответствует содержанию диссертации.Цель исследования: разработка новых подходов к хирургическому лечениютазового пролапса путем создания тканеинженерной конструкции на основеиспользуемых имплантатов и аутологичного клеточного материала.Всоответствииспоставленнойцельюсформулированызадачиисследования:1.разработать технологии получения культур мезенхимальных стромальныхклеток костного мозга и дермальных фибробластов крыс и их иммобилизациина образцах эндопротезов, применяемых в хирургии;2.создать тканеинженерные конструкции и на основе бионедеградируемых,биодеградируемыхикомпозиционныхматериалов,сиспользованиемклеточного компонента, представленного мезенхимальными стромальнымиклетками костного мозга и дермальными фибробластами крыс;3.провестиэкспериментальныеимплантациилабораторнымживотнымтканеинженерных конструкций и бесклеточных образцов материалов длясравнительной оценки тканевых реакций;4.провести оценку результатов гистологического и иммуногистохимическогоисследований для сравнительной оценки тканевой реакции на имплантациютканеинженерных конструкций у лабораторных животных;5.создать тканеинженерную конструкцию с использованием аутологичныхдермальных фибробластов человека.Научная новизна исследованияВпервые в России были разработанытехнологические приемы иммобилизации адгезивных клеток на хирургическихматериалах для создания тканеинженерных конструкций на основе разрешенных вмедицинской практике гинекологических имплантатов из бионедеградируемых(полипропилен), биодеградируемых (викрил, децеллюляризированные нативныематрицы) и композиционных материалов и аутологичного клеточного компонента,5представленного мезенхимальными стромальными клетками костного мозга идермальными фибробластами крыс.Впервые подтверждена эффективность применения ТИК по сравнению сбесклеточными гинекологическими материалами при имплантации крысам наоснове их биосовместимости.Впервыепроведенсравнительныйанализэффективностимезенхимальныхстромальных клеток из костного мозга и дермальных фибробластов прииспользовании данных культур клеток в качестве клеточного компонента ТИК,имплантируемой крысам.Теоретическая и практическая значимость исследованияРазработанспособ иммобилизации адгезивных клеток на хирургических материалах длясозданиятканеинженерныхконструкций,наосноверазрешенныхдляиспользования в медицинской практике гинекологических имплантатов.Определены критерии возможности применения ТИК для имплантации наоснове данных о полноте клеточного покрытия и жизнеспособности клеток всоставе ТИК.Полученныепредпосылкирезультатыиспользованиясоздаюттеоретическиетканеинженерныхиконструкцийпрактическиевкачествебиомедицинских клеточных продуктов (в соответствии с ФЗ №180) длявосстановления фасциальных дефектов тазового дна у пациенток с различнымивидамипролапса,чтопозволитснизитьколичествораннихипозднихпослеоперационных осложнений.Основные положения диссертации, выносимые на защиту:1.Хирургические имплантаты, применяемые в гинекологической практике,можно использовать без дополнительной модификации поверхности в качествекаркаса для адгезионных культур клеток в составе тканеинженернойконструкции;2.Аутологичные дермальные фибробласты и мезенхимальные стромальныеклетки костного мозга при создании тканеинженерной конструкции способны кформированию многослойного клеточного покрытия на всей поверхностииспользуемых имплантатов;63.Тканеинженерные конструкции с аутологичным клеточным компонентомобеспечивают более быстрое формирование и зрелость соединительнотканныхструктур в области имплантации, формируя тканеинженерную фасцию,которая может быть применена при реконструкции тазового дна.Методология и методы исследования При написании диссертационнойработы применялись следующие методы: морфологический, микроскопический(световая и конфокальная микроскопия), иммуногистохимический, балльнаяоценка тканевой реакции.