Диссертация (Диагностическое значение анализа матриксных металлопротеиназ у детей с расщелиной губы и неба), страница 8

(2-хКоэффициент Знач. (2-хкорреляциисторонняя) Nкорреляции0,2380,02984 0,3090,004840,1820,09784 0,495<0,00184-0,1690,12584 0,0930,40284сторонняя) NTGF-Β2пг/млММП3нг/млТИМП2нг/мл46АБВРисунок 15 – (А) Совместное распределение десятичного логарифмаконцентрации ММП2 в зоне патологии и концентрация TGFβ2 в зоне патологии.Совместное распределение десятичного логарифма концентрации белка в зонепатологии и концентрация логарифма ММП2 в зоне патологии (В) и совместноераспределение десятичного логарифма концентрации ММП2 в зоне патологии иконцентрация ММП3 в зоне патологии (Б).Как видно из таблицы 5 и рисунка 15 установлена слабая корреляция междуММП2 и TGFβ2 в зоне патологии.

TGFβ2 коррелирует с ММП2 c коэффициентом0,309. ММП3 с ММП2 коррелирует с коэффициентом 0,495, ММП2 коррелируетс содержанием белка с коэффициентом 0,405 (Рисунок 16а) (Рисунок 16б).Таблица 6 – Ранговые коэффициенты корреляции ММП2 с другимибиохимическими показателями вне очага патологии.TGFБелокΒ2ММП2 ММП3 ТИМП2(мг/мл) пг/млнг/млнг/млнг/мл0,4050,30910,4950,093сторонняя)<0,0010,004.<0,001 0,402N84848484ММП2Коэффициентнг/млкорреляцииЗнач.(2-х8447АБРисунок 16 – (А) Совместное распределение десятичного логарифмаконцентрации, ММП2 вне зоны патологии и концентрация ММП3 вне зоныпатологии. (Б) Совместное распределение десятичного логарифма концентрации,белка вне зоны патологии и концентрация ММП2 вне зоны патологии.Как видно из таблицы 6 и рисунков 16 (А, Б), установлена слабаякорреляция между рядом параметров вне очага патологии.

Статистически незначимо. ММП3 с ММП2 коррелирует с коэффициентом 0,313 ММП2коррелирует с содержанием белка с коэффициентом 0,258 (Рисунок 15).Таблица 7 – Ранговые коэффициенты корреляции между ММП2 в очаге ивне очага патологииКоэффициентПоказателькорреляциирNБелок0,1770,107ММП20,904<0,001 8484Из таблицы 7 следует, что для ММП2 образцах биопсии (n=84), установленасильная, достоверная связь между показателями (p<0,001), кроме содержаниябелка, для ММП2 коэффициент корреляции равен 0,904 (p<0,001) (Рисунок 17).48Рисунок 17 – Совместное распределение десятичного логарифма концентрацииMMП2 вне зоны патологии и десятичного логарифма концентрации MMП2 взоне патологии.Таблица 8– Медианы биохимических показателей при различных типахпатологии (НП – нет патологии).ММП2 нг/млММП2 нг/млНПДвусторонняя расщелина (n35)5,092,64Односторонняя (n=34)3,952,6Расщелина губы (n=8)1,010,9Частичная расщелина неба (n=7)1,40,97Таким образом, показатели ММП2 (Таблица 8) в мягких тканях из областирасщелины в мягких тканях вне очага поражения достоверно отличались.НаивысшийпоказательуровняММП2зафиксированвмягкихтканях,полученных из зоны расщелины при двусторонней расщелине губы и неба.

Придругих типах патологии показатели так же заметно были выше чем в образцах внерасщелины. Максимальным значением медианы ММП2 в мягких тканях из зонырасщелины составлял 3,578 нг/мл, против 2,401 нг/мл из мягких тканейполученных из зоны без патологии. При частичной расщелине неба медианасодержание ММП2 в мягких тканях составляло 1,4 нг/мл, что было незначительнобольше чем при расщелине губы, но меньше чем при односторонней идвусторонней расщелине губы и неба (Рисунок 18).49Рисунок 18 – Распределение пациентов по отношению ММП2 в зоне патологии ивне зоны патологии.Максимальное значение медианы для ММП2 было в зоне патологии придвусторонней расщелине губы и неба у 35 пациентов 5,088 нг/мл.

ОтношениеММП2 из зоны патологии к ММП2 вне зоны патологии - различие достоверное покритерию Манн Уитни p=0,010. Абсолютным же значением при двустороннейрасщелине губы и неба было 26,829 нг/мл, которому соответствовало значение20,17нг/мл из зоны вне очага патологии (Рисунки 18,19).Различия медианы ММП2 в мягких тканях изобласти патологии при различных типах РГН6420Двусторонняярасщелина (n35)Односторонняя (n=34) Расщелина губы (n=8) Частичная расщелинанеба (n=7)ММР2 нг/млММР2 нг/млНПРисунок – 19.

Медианы содержания ММП2 в мягких тканях при различных типахпатологии РГН (НП – нет патологии).Кроме максимальных значенийММП2 при двусторонней расщелине губы инеба, оценили так же содержание данных параметров для других типоврассматриваемой патологии.50У 34 пациентов с односторонней расщелиной губы и неба медианаколичества ММП2 в зоне патологии составляла 3,95 нг/мл. Для 7 пациентов счастичной расщелиной неба данный параметр был равен 1,4нг/мл. У 8 детей срасщелиной губы 1,01нг/мл.Медиана значения ММП2 при одностороннейрасщелине губы и неба вне очага патологии составляла 2,6нг/мл.

Для частичнойрасщелины неба же составляла 0,97 нг/мл. При расщелине губы данный параметрсоставлял 0,9нг/мл.Таким образом по результатам проведенного иммуноферментного анализаММ2 в мягких тканях при различных типах РГН мы сделали следующие выводы:-Экспрессия ММП2 достоверно повышалась при всех типах РГН в мягкихтканях, взятых из зоны патологии по сравнению с мягкими тканями, взятыми иззоны вне очага патологии (р <0,001).- Наибольшей экспрессия ММП2 была при двусторонней расщелине губы и неба,наименьшей при частичной расщелине губы, при которой показатели ММП2 вмягких тканях в зоне патологии лишь незначительно увеличивались (Рисунок 18).3.3. Иммуноферментный анализ матрисксных металлопротеиназ 3 типав мягких тканях при различных типах расщелины губы и неба.MMП3 преимущественно экспрессируется клетками соединительной ткании играет важную роль в изменении структуры внеклеточного матрикса (ЭЦМ).ММП-3можетдеградироватьмногиекомпонентыECM,такиекакпротеогликаны, фибронектин, ламинин и другие коллагены.

Из-за такогобольшого диапазона субстратов и способности активировать другие ферментыдеградации (матрикса), в том числе другие матриксные металлопротеиназы,ММП-3 играет ключевую роль в физиологических и патологических процессахремоделирования ткани.ММП-3 секретируется в неактивной форме (про-ММП-3, 52 кДа) иактивируется ограниченным протеолизом эндопептидазами. Активная ММП-3 (45кДа и 35 кДа) может быть ингибирована в результате связывания с тканевымиингибиторами матриксных металлопротеиназ (ТИМП) или α2-макроглобулином.51Регуляция активности ММП-3 необходима для предотвращения разрушения ЭЦМисохраненияфизиологическогоравновесияпроцессовтканевогоремоделирования. Соответственно, у пациентов с различными патологическимисостояниями уровень ММП-3 повышен.Для выявления уровня ММП3, нами была проведена биописия мягкихтканей из зоны расщелины губы или неба, а также из зоны, прилегающейнепосредственно к расщелине губы или расщелине неба, для сравнительногоанализа содержания биохимических показателей.В биопсии всех прооперированных детей наблюдалось разное по степенивыраженности содержания ММП3.

А так же в супернатанте содержалось разноеколичество белка. Расчеты содержания ММП3, велись с учетом отношенияколичества биохимических показателей к количеству белка. Соответствующиерасчеты были проведены и для материала полученного в ходе биопсии из зоны спатологией для сравнения с зоной без патологии.Таблица 9 – Ранговые коэффициенты корреляции ММП3 вне очага патологии(НП – нет патологии).ПоказательБелокММП3БелокММП3(N=84)(мг/мл)нг/мл(мг/мл)НПнг/млНПM0,142,910,151,57m0,060,40,060,28σ0,563,70,532,56Асимм.8,822,088,713,25Эксцесс79,454,2278,111,33Мин0,030,050,030,02Макс5,1616,484,8213,38Процен-тиль 25% 0,050,50,040,21Ме1,450,070,720,0652Процентиль 75%0,083,530,11,78Содержание ММП3, в биопсии мягких тканях оценено у 84 пациентов срасщелиной губы и неба или расщелиной губы.В таблице 9 отображены статистические параметры ММП3 и белка.

Количествонаблюдений 84 (n=84). Из таблицы следует, что полученные данные имеютширокий диапазон величин. Следует отметить, что в образцах с патологией посравнению с контролем мы видим увеличение ММП3 по медиане.ММП3 из зоны расщелины имеет значения от 0,05 до 16,48 нг/мл, гдесреднее значение равно 1,45 нг/мл, 75% значений меньше или равно 3,53 нг/мл,25% равно или ниже 0,50 нг/мл.ММП3 из зоны без патологии имеет значения от0,02 до 13,38 нг/мл, где среднее значение равно 0,72 нг/мл, 75% значений меньшеили равно 1,78 нг/мл, 25% равно или ниже 0,21 нг/мл.Установлено, что при РГН количество ММП3, отличаются в зоне патологииот количества в зоне без патологии.

Содержание ММП3 в зоне патологииколебалось от 0,054 нг/мл до 16,479 нг/мл. Пациенты, принимающие участие висследовании различались по полу, возрасту, весу, весу при рождении, типародов, росту, типу проведенной операции, росту при рождении по всемперечисленным показателям с помощью критериев Манн-Уитни и КолмогороваСмирнова достоверной связи с ММП в мягких тканях нет.Рисунок 20 – Совместное распределение десятичного логарифма концентрацииММП2 в зоне патологии и концентрация ММП3 в зоне патологии.53Таблица 10 – Таблица ранговых коэффициентов корреляции ММП3 в очагепатологии.БелокTGF-Β2ММП2(мг/мл)пг/млнг/млТИМП2 нг/мл0,1820,1910,4950,147сторонняя)0,0970,082<0,0010,184N84848484ПараметрММП3Коэффициентнг/млкорреляцииЗнач.(2-хКак видно из таблицы 10 и рисунка 20, установлена слабая корреляцияпоказателей содержания ММП2 и ММП3 в мягких тканях из зоны с расщелиной.ММП3 с ММП2 коррелирует с коэффициентом 0,495 (Рисунок 20) Статистическине значимо.Таблица 11 – Ранговые коэффициенты корреляции ММП3 в мягких тканях внеочага патологии (НП – нет патологии).БелокTGF-Β2ММП2 ММП3(мг/мл)пг/млнг/млнг/млТИМП2НПНПНПНПнг/мл НП0,334-0,0390,3131-0,021сторонняя)0,0020,7240,004.0,848N8484848484ПоказательММП3Коэффициентнг/мл НП корреляцииЗнач.(2-хКак видно из таблицы 11, установлена слабая корреляция междупоказателем ММП2 и ММП3, ММП3 и белком в мягких тканях вне очага54патологии.

Содержание ММП3 в мягких тканях коррелирует с содержанием белкас коэффициентом 0,334 (Рисунок 21).АБРисунок 21 – (А) Совместное распределение десятичного логарифмаконцентрации, белка вне зоны патологии и концентрация ММП3 вне зоныпатологии. (Б) Совместное распределение десятичного логарифма концентрации,ММП2 вне зоны патологии и концентрация ММП3 вне зоны патологии.Таблица 12 – Таблица ранговых коэффициентов корреляции междупоказателем ММП 3 в очаге и вне очага патологии.ПоказательКоэффициент корреляциирNMMП30,626<0,00184Из таблицы 12, следует, что для всех исследуемых образцах биопсии (n=84)установленная сильная, достоверная связь между показателями ММП3 (p<0,001),для MMП3 коэффициент корреляции равен 0,626 (p<0,001).

Таким образом,показатели ММП3 в мягких тканях из области расщелины и мягкими тканями внеочага поражения достоверно отличались (Рисунок 22).55Рисунок 22 – Совместное распределение десятичного логарифма концентрацииMMП3 вне зоны патологии и MMП3 в зоне патологииТаблица 13 – Медианы ММП3 в мягких тканях при различных типахпатологии (НП – нет патологии).ММП3нг/млММП3 нг/млНПДвусторонняя расщелина (n35)3,371,66Односторонняя (n=34)31,54Расщелина губы (n=8)21,88Частичная расщелина неба (n=7)1,490,87Из таблицы 13, следует достоверное увеличение концентрации, ММП3, помедианам в мягких тканях при двухсторонней расщелине губы и неба, чтоявляется наивысшим показателем среди других видов патологии.При частичной расщелине неба медиана содержания ММП3 в мягкихтканях в области патологии равнялось 1,49 нг/мл, что было меньше чем прирасщелине губы, односторонней и двусторонней расщелине губы и неба.Максимальным содержание ММП3 в мягких тканях при частичной расщелиненеба из зоны патологии составляло 4,146 нг/мл, а из зоны без патологиисоставляло 1,576 нг/мл (рисунок 23).56Различия медианы ММП3 в мягких тканях иззоны патологии при различных типах РГН43210Двусторонняярасщелина (n35)Односторонняя(n=34)Расщелина губы (n=8)Частичная расщелинанеба (n=7)ММР3 нг/млММР3 нг/млНПРисунок 23 – Медианы ММП3 при различных типах расщелины губы и неба (НП– нет патологии).Максимальное значение медианы для ММП3 было в зоне патологии придвусторонней расщелине губы и неба у 35 пациентов 3,373нг/мл.