Диссертация (Характеристика грибов рода Candida, выявляемых у ВИЧ-инфицированных пациентов)

ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России(Сеченовский Университет)ФИЛИНА ЮЛИЯ СЕРГЕЕВНА«Характеристика грибов рода Candida, выявляемых у ВИЧинфицированных пациентов»14.01.09- инфекционные болезниДиссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наукНаучный руководитель:Заведующая кафедрыинфекционных болезнейМПФ, доктор медицинских наук,профессор Волчкова Е.В.Научный консультант: профессоркафедры микробиологии,вирусологии и иммунологии МПФ,профессор, доктор медицинскихнаук Несвижский ЮрийВладимирович.Москва- 2018 год2ОглавлениеГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР. ХАРАКТЕРИСТИКА ГРИБОВ РОДАCANDIDA ВХОДЯЩИХ В БИОТОПЫ СЛИЗИСТЫХ ОБОЛОЧЕК РОТОВОЙПОЛОСТИ И ТЕРМИНАЛЬНОГО ОТДЕЛА КИШЕЧНИКА У ВИЧИНФИЦИРОВАННЫХ ПАЦИЕНТОВ НА СТАДИИ 3, 4А, 4Б, 4В. ......................

101.1 Видовой состав и биологические свойства грибов рода Candida. .................. 101.2 Эпидемиология кандидоза. Видовой спектр грибов рода Candida в составемикрофлоры различных биотопов у ВИЧ-инфицированных пациентов на стадии3, 4А, 4Б, 4В. ............................................................................................................... 151.3 Спектр фунгицидных препаратов, применяемых у ВИЧ-инфицированныхпациентов на стадии 3, 4А, 4Б, 4В. .......................................................................... 181.4 Антимикотикорезистентность Candda spp., выделенных от ВИЧинфицированных пациентов к фунгицидным препаратам используемым внастоящее время.

........................................................................................................ 23СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ. ........................................................................ 28ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. ..................................................................... 282.1 Общая характеристика обследуемых пациентов. ............................................. 282.2 Характеристика специальных методов лабораторного исследования мазковиз ротоглотки и образцов фекалий на Candida spp. у обследованных ВИЧинфицированных пациентов. ....................................................................................

432.2.1 Лабораторные методы исследования культур Candida spp., выделенных уВИЧ-инфицированных пациентов. .......................................................................... 432.2.2 Идентификация Candida spp. методом ПЦР-РВ, «АмплиСенс C. albicans /C. glabrata /C. krusei-МУЛЬТИПРАЙМ-FL» ........................................................... 442.2.3 Идентификация Candida spp. методом INTEGRAL SYSTEM YEASTS plus....................................................................................................................................... 482.2.4 Идентификация Candida spp. при помощи КАНДИДАтест21 .....................

512.2.5 Изучение морфологических особенностей возбудителей инвазивногокандидоза .................................................................................................................... 5132.2.6 Диско-диффузионный метод определения чувствительности - CLSI M44-A...................................................................................................................................... 512.3 Статистическая обработка результатов ............................................................. 53ГЛАВА 3.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ. .......................... 553.1 Эффективность антимикотиков различных фармакологических групп вотношении Candida spp., выделенных из различных биотопов (ротоглотка,кишечник) от ВИЧ-инфицированных пациентов. .................................................. 59ГЛАВА 4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ И ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ. ............................ 86ВЫВОДЫ. .................................................................................................................... 100ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ. ....................................................................

102СПИСОК СОКАЩЕНИЙ ........................................................................................... 103СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ........................................................................................... 1054ВВЕДЕНИЕАктуальность темы.Микозы , вызванные грибами рода Candida, являются значимой проблемойдля практического здравоохранения, особенно для пациентов с ВИЧ инфекцией[122].ГрибыродасоставляяCandida,значительнуючастьбиоценозамакроорганизма [57], взаимодействуют с другими видами условно-патогенныхмикроорганизмов и представителями нормофлоры.

В микробных сообществахгрибы рода Candida не только испытывают антагонистическое давление состороны представителей нормальной микрофлоры, но зачастую образуютассоциации с другими микроорганизмами, которые, наоборот, способствуютколонизации биотопов грибковой флорой. Однако вопрос об изменениибиологических свойств грибов рода Candida у пациентов сВИЧ инфекциейостается недостаточно изученным. В этой связи актуальным представляетсяизучение особенностей видового состава и биологических характеристик грибовродаCandidaу пациентов сВИЧинфекциейс различнойстепеньюиммуннодефицита.По мере увеличения числа инфицированных ВИЧ и длительности ихзаболевания, нарастает число больных сопутствующими заболеваниями [2, 63].ПредставителиродаCandida являются типичными возбудителямиоппортунистических инфекций и многократно усиливают свой патогенныйпотенциал в условиях нарушений в иммунной системе хозяина [128], вследствиечего могут не только ухудшать прогноз основного заболеванияу ВИЧ-инфицированных пациентов, но и быть причиной летального исхода [60].Вместе с тем, нарастающаяантимикотикорезистентность Candida spp.

уВИЧ-инфецированных пациентов, нередко получающих длительное времяантифунгальные препараты, как с профилактической, так и с лечебной целью [22]обуславливают необходимость разработки эффективных схем лечения на основеизучения устойчивости Candida spp. к противогрибковым препаратам, на видовом5и генетическом уровнях [17].В последнее время отмечена тенденция к увеличению случаев non-albicansкандидозов, хуже поддающихся лечению.[16, 46]. По данным зарубежныхавторов, длительное лечение ВИЧ-инфицированных пациентов препаратамиазолового ряда также приводит к изменению видового состава Сandida spp. ихарактеризуется постепенным нарастанием non-albicans видов, особенно Candidaglabrata. Данная тенденция является одной из причин рефрактерного кандидозаслизистых оболочек у пациентов с развитой иммуносупрессией и низкимколичеством CD4 [50, 75].По мнению авторов, в большинстве ситуаций проведения видовойидентификации вместе с локальными данными по чувствительности возбудителейдостаточнодлявыбораантимикотическойтерапии.Такимобразом,целенаправленное определение чувствительности может быть необходимым дляоптимизации терапии при недостаточном ответе к проводимой антифунгальнойтерапии [17, 141].Представленные данные свидетельствуют о скудной и разрозненнойинформации, касающейся изучения композиции представителей рода кандида уВИЧ-инфицированных пациентов в различных микробиотах (полость рта,кишечник) и чувствительности Candida spp.

к антимикотикам, как в России, так иза рубежом.Таким образом, для разработки эффективных схем лечения кандидоза уВИЧ-инфицированных пациентов, необходимо изучение устойчивости Candidaspp. к противогрибковым препаратам на видовом и генетическом уровнях.Цель исследования.Изучение и анализ видового и штаммового дрейфа грибов рода Candida,выделенных от ВИЧ-инфицированных пациентов на стадии 3, 4А, 4Б, 4В, сорофарингеальным кандидозом на фоне антимикотической терапии.6Задачи исследования.•Анализ динамики видового состава грибов рода Candida у ВИЧинфицированных пациентов на стадии 3, 4А, 4Б, 4В, на фонеантимикотической терапии.•Установить характер взаимодействия C.

albicans с другими видами грибовданного рода у ВИЧ-инфицированных пациентов.•Проанализировать влияние антимикотического лечения кандидоза у ВИЧинфицированных пациентов на видовой и штаммовый состав Candida spp.•ОпределитьчувствительностьштаммовCanddaspp.кразличнымантимикотикам.•По анализу чувствительности Candda spp. к различным антимикотикамопределить возможный альтернативный вариант лечения кандидоза у ВИЧинфицированных пациентов.Научная новизна исследования.1. Впервыеохарактеризован видовой состав грибов рода Candidaвыделенных от пациентов с ВИЧ-инфекцией на стадии 3, 4А, 4Б, 4В в различныхбиотопах макроорганизма.2.

Впервые с помощью диско-диффузионного метода и определенияминимальнойгрибковойингибирующейфлорыinконцентрацииvitroкизученачувствительностьфунгициднымпрепаратамряда фармакологических групп, используемым в настоящее время для леченияпациентов с ВИЧ-инфекцией.3. Разработаны показания дляпримененияфунгицидныхпрепаратовряда фармакологических групп в комплексном лечении кандидоза у ВИЧинфицированных пациентов.4. Проведена клиническая и микробиологическая оценка эффективностистандартных схем антифунгальной химиотерапии, применяемой в настоящеевремя для лечения ВИЧ-инфицированных пациентов на стадии 3, 4А, 4Б, 4В.7Теоретическая и практическая значимость работы.Результаты диссертационного исследования расширяют теоретическиепредставления о биологических свойствах грибов рода Candida, выделенных изразных биотопов тела человека при ВИЧ-инфекции.

Определен спектрантимикотиков в отношении грибов рода Candida, изолированных у ВИЧинфицированных пациентов на стадии 4 А, Б, В. Полученные данные могут бытьиспользованы при выборе эффективных препаратов для эмпирической терапиибольныхкандидозом.Собраннаяврезультатеисследованияколлекциячувствительных и резистентных к противогрибковым препаратам изолятовCandida spp. от пациентов с ВИЧ-инфекцией депонирована в Российскуюколлекцию патогенных грибов.Методология и методы исследования.Данная диссертационная работа – клинико-лабораторное исследованиеОбъекты исследования – фекалии и образцы из ротоглотки ВИЧинфицированные пациенты на стадии 3, 4А, 4Б, 4В, находившихся настационарном лечение в ИКБ №2 с апреля 2015- по апрель 2017гг.Длявыполненияработыиспользовалимикробиологические,биохимические, молекулярно-генетические и статистические методы.Положения, выносимые на защиту.•Выявлено изменение видового состава грибов рода Candida у ВИЧинфицированных пациентов (2015 и 2017гг.).•Установлено подавление C.