Исследование структурных свойств полимеров амилоид beta пептида и лизоцима методами силовой спектроскопии и атомно-силовой микроскопии, страница 2

Óêðàèíöåâ, Ã.À. Êèñåëåâ, À.À. Êóäðèíñêèé, Ã.Â. Ëèñè÷êèí, È.Â. ßìèíñêèé.6ÏóáëèêàöèèÎñíîâíûå ðåçóëüòàòû ðàáîòû äîëîæåíû íà 3 êîíôåðåíöèÿõ èîïóáëèêîâàíû â 3 ñòàòüÿõ è 4 òåçèñàõ äîêëàäîâ.Îáúåì è ñòðóêòóðà äèññåðòàöèèÄèññåðòàöèÿ ñîñòîèò èç ââåäåíèÿ, äâóõ ãëàâ, çàêëþ÷åíèÿ è ñïèñêà ëèòåðàòóðû. Îáùèé îáúåì 127 ñòðàíèö, â òîì ÷èñëå 45 ðèñóíêîâ è 1 òàáëèöà. Ñïèñîê ëèòåðàòóðû ñîäåðæèò 82 íàèìåíîâàíèÿ.2 Ñîäåðæàíèå äèññåðòàöèèÂî ââåäåíèè îáîñíîâûâàåòñÿ àêòóàëüíîñòü òåìû, ôîðìóëèðóþòñÿ öåëè è çàäà÷è äèññåðòàöèîííîé ðàáîòû è èçëîæåíî åå êðàòêîåñîäåðæàíèå. ïåðâîé ãëàâå ñîäåðæèòñÿ îáçîð ðàáîò, ñâÿçàííûõ ñ èññëåäîâàíèåì ìåæìîëåêóëÿðíûõ âçàèìîäåéñòâèé è àãðåãàöèè áåëêîâ.

Ñôîðìóëèðîâàíû íåðåøåííûå çàäà÷è è îáîñíîâàíà ïîñòàíîâêà çàäà÷èäèññåðòàöèîííîé ðàáîòû. ïåðâîì ïàðàãðàôå ãëàâû 1 ðàññìàòðèâàþòñÿ îñíîâíûå ìåòîäûèññëåäîâàíèÿ ìåæìîëåêóëÿðíûõ âçàèìîäåéñòâèé. Îïèñàíû îñíîâûè íåêîòîðûå ýêñïåðèìåíòàëüíûå äàííûå, ïîëó÷åííûå ïðè ïîìîùèàòîìíî-ñèëîâîé ìèêðîñêîïèè è ñèëîâîé ñïåêòðîñêîïèè.Âî âòîðîì ïàðàãðàôå ãëàâû 1 ðàññìîòðåíû îáùèå ñâîéñòâà áåëêîâ, èññëåäîâàííûõ â ýòîé ðàáîòå. Îïèñàíû ïðîâåäåííûå ðàíåå ýêñïåðèìåíòû ïî îïðåäåëåíèþ ñâîéñòâ àìèëîèä β ïåïòèäà è ëèçîöèìà. òðåòüåì ïàðàãðàôå ãëàâû 1 îïèñàíî âëèÿíèå ïîâåðõíîñòè íàêîíôîðìàöèþ ìîëåêóëû è âëèÿíèå õèìè÷åñêîé ñîðáöèè íà êîíôîðìàöèþ ìîëåêóëû.

Ñôîðìóëèðîâàíà íåðåøåííàÿ ðàíåå çàäà÷à î âëè7ÿíèè õèìè÷åñêîé ñîðáöèè íà êîíôîðìàöèþ ìîëåêóëû. ÷åòâåðòîì ïàðàãðàôå ãëàâû 1 îïèñàíî èññëåäîâàíèå âçàèìîäåéñòâèÿ äâóõ ìîëåêóë, íàõîäÿùèõñÿ â ñîñòîÿíèè ñ íåïðàâèëüíîéóêëàäêîé. Ñôîðìóëèðîâàíà íåðåøåííàÿ ðàíåå çàäà÷à îá èññëåäîâàíèè âçàèìîäåéñòâèÿ äâóõ îäèíàêîâûé ìîëåêóë, íàõîäÿùèõñÿ â ñîñòîÿíèè ñ íåïðàâèëüíîé óêëàäêîé.Âî âòîðîé ãëàâå îïèñàíû ýêñïåðèìåíòàëüíûå ðåçóëüòàòû ïî èññëåäîâàíèþ ìåæìîëåêóëÿðíîãî âçàèìîäåéñòâèÿ è àãðåãàöèè ïîëèìåðîâ. ïåðâîì ïàðàãðàôå ãëàâû 2 îïèñàíû ýêñïåðèìåíòû ïî èçó÷åíèþ ìåæìîëåêóëÿðíîãî âçàèìîäåéñòâèÿ íà ïðèìåðå àìèëîèä β ïåïòèäà, ïðîâåäåííûå ìíîé â ëàáîðàòîðèè Þðèÿ Ëüâîâè÷à Ëþá÷åíêîâ UNMC (University of Nebraska Medical Center, USA, Nebraska) â2004 - 2005 ãîäó.Èçâåñòíî, ÷òî ïðîöåññ àãðåãàöèè àìèëîèä β ïåïòèäà ñâÿçàí ñâîçíèêíîâåíèåì áîëåçíè Àëüöãåéìåðà.

Ïðè îïðåäåëåííûõ óñëîâèÿõìîëåêóëû àìèëîèä β ïåïòèäà òåðÿþò ñâîþ íàòèâíóþ êîíôîðìàöèþ (òî÷íåå, íåàìèëîèäîãåííóþ) è ïåðåõîäÿò â êîíôîðìàöèþ ñ íåïðàâèëüíîé óêëàäêîé (àìèëîèãîãåííóþ). Ìî-ëåêóëû, íàõîäÿùèåñÿ â ýòîì ñîñòîÿíèè, âçàèìîäåéñòâóþò ìåæäó ñîáîé, ÷òî ïðèâîäèò ê îáðàçîâàíèþ ôèáðèëë.

Âîçìîæíî, ÷òî îáðàçîâàíèå ýòèõ ôèáðèëë êàêèì-ëèáî îáðàçîì ñâÿçàíî ñ ðàçâèòèåì áîëåçíèÀëüöãåéìåðà.Ýòà ðàáîòà ÿâëÿåòñÿ ïåðâîé ðàáîòîé ïî èññëåäîâàíèþ âçàèìîäåéñòâèÿ äâóõ îäèíàêîâûõ ìîëåêóë, íàõîäÿùèõñÿ â êîíôîðìàöèè ñíåïðàâèëüíîé óêëàäêîé. Ýòè ýêñïåðèìåíòû íàïðàâëåíû íà òî, ÷òîáû ðåøèòü ñëåäóþùèå çàäà÷è:1. Îïðåäåëèòü, ïðè êàêèõ óñëîâèÿõ ïðîèñõîäèò êîíôîðìàöè8îííûé ïåðåõîä â ìîëåêóëàõ àìèëîèä β ïåïòèäà èç-çà ïîíèæåíèÿpH ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå è ôèçèîëîãè÷åñêîé èîííîé ñèëå ðàñòâîðà (150 ìÌ).2.

Èññëåäîâàòü âçàèìîäåéñòâèå ìîëåêóë àìèëîèä β ïåïòèäà,íàõîäÿùèõñÿ â íàòèâíîé êîíôîðìàöèè è â êîíôîðìàöèè ñ íåïðàâèëüíîé óêëàäêîé.3. Îïðåäåëèòü ñèëó âçàèìîäåéñòâèÿ äâóõ ìîëåêóë àìèëîèä βïåïòèäà, íàõîäÿùèõñÿ â êîíôîðìàöèè ñ íåïðàâèëüíîé óêëàäêîé.Äëÿ ðåøåíèÿ ýòèõ çàäà÷ áûë ïðåäëîæåí íîâûé ñïîñîá çàêðåïëåíèÿ ìîëåêóë àìèëîèä β ïåïòèäà íà ïîâåðõíîñòè.

Îí çàêëþ÷àåòñÿ â òîì, ÷òî êàæäàÿ ìîëåêóëà ïåïòèäà õèìè÷åñêè ñîðáèðóåòñÿ(êîâàëåíòíî ïðèøèâàåòñÿ) ÷åðåç SH ãðóïïó öèñòåèíà, íàõîäÿùåãîñÿ íà N-êîíöå ìîëåêóëû, ê ìàëåèìèäíîé ãðóïïå, çàêðåïëåííîé íàïîâåðõíîñòè ñëþäû èëè Si3 N4 êàíòèëåâåðà, ñì. ðèñ. 1.Ðèñ. 1. Ñïîñîá çàêðåïëåíèÿ àìèëîèä β ïåïòèäà íà ïîâåðõíîñòÿõñëþäû è îñòðèÿ êàíòèëåâåðà, èñïîëüçîâàííûé â ìîåé ðàáîòå.Áûëî óñòàíîâëåíî, ÷òî êîíôîðìàöèîííûé ïåðåõîä èç íàòèâíîãî ñîñòîÿíèå â êîíôîðìàöèþ ñ íåïðàâèëüíîé óêëàäêîé â ìîëåêóëàõ àìèëîèä β ïåïòèäà ïðèñõîäèò â äèàïàçîíå pH5.6 pH3.7 ïðèêîìíàòíîé òåìïåðàòóðå è ôèçèîëîãè÷åñêîé èîííîé ñèëå ðàñòâîðà(150 ìÌ), ñì. ðèñ. 2.Ñèëîâûå êðèâûå ïðèâåäåíû â êîîðäèíàòàõ Ñèëà“ Ðàññòîÿíèå””ìåæäó îñòðèåì è îáðàçöîì“ . Ñèëà F îïðåäåëÿåòñÿ èç çàêîíà Ãóêà9Ðèñ.

2. Òèïè÷íûå ñèëîâûå êðèâûå, ïîëó÷àåìàÿ íà ÀÑÌ NanoscopeIIIa ïðè çíà÷åíèÿõ pH5.6 (À) è pH3.7 (Á) ïðè èññëåäîâàíèè ìåæìîëåêóëÿðíîãî âçàèìîäåéñòâèÿ.F = kd, ãäå k æåñòêîñòü êàíòèëåâåðà, d îòêëîíåíèÿ êàíòèëåâåðà, èçìåðÿåìîå ïðè ïîìîùè ëàçåðíîãî ëó÷à. Ðàññòîÿíèå s ìåæäóîáðàçöîì è êàíòèëåâåðîì ïîëàãàåòñÿ ðàâíûì s = d − Z , ãäå Z ïîëîæåíèå ïüåçîñêàíåðà.  ýòèõ êîîðäèíàòàõ øóìîâîé ñèãíàë èìååòñïåöèôè÷åñêèé (íàêëîííûé) âèä [1].Èç ëèòåðàòóðíûõ äàííûõ èçâåñòíî, ÷òî èññëåäîâàííûé êîíôîðìàöèîííûé ïåðåõîä ñîïðîâîæäàåòñÿ èçìåíåíèåì âòîðè÷íîé ñòðóêòóðû ìîëåêóëû. Ýòîò ðåçóëüòàò ïîäòâåðæäåí äàííûìè ýêñïåðèìåíòîâïî êîìïüþòåðíîìó ìîäåëèðîâàíèþ [2] è èçìåðåíèþ öèðêóëÿðíîãîäèõðîèçìà ðàñòâîðà àìèëîèä β ïåïòèäà [3].Áûëî óñòàíîâëåíî, ÷òî ìîëåêóëû àìèëîèä β ïåïòèäà íàõîäÿùèåñÿ â íàòèâíîì ñîñòîÿíèå, ìåæäó ñîáîé ïðàêòè÷åñêè íå âçàèìîäåéñòâóþò.

Îäíàêî, ìîëåêóëû àìèëîèä β ïåïòèäà íàõîäÿùèåñÿ êîíôîðìàöèè ñ íåïðàâèëüíîé óêëàäêîé âçàèìîäåéñòâóþò ìåæäó ñîáîé.Íà äâóõ ðàçíûõ ïðèáîðàõ áûëà îïðåäåëåíà ñèëà âçàèìîäåéñòâèÿ äâóõ ìîëåêóë àìèëîèä β ïåïòèäà, íàõîäÿùèõñÿ â êîíôîðìàöèè ñ íåïðàâèëüíîé óêëàäêîé. Îíà îêàçàëàñü ðàâíîé ∼ 40 ïÍ,10Ðèñ. 3. Òèïè÷íûå ñèëîâûå êðèâûå, ïîëó÷àåìàÿ íà ÀÑÌ NanoscopeIIIa (À) è ÀÑÌ Molecular Force Probe 3D (Á) ïðè èññëåäîâàíèè ìåæìîëåêóëÿðíîãî âçàèìîäåéñòâèÿ. Íà ãèñòîãðàììàõ ïðèâåäåíî ðàñïðåäåëåíèå ñèë êîòîðûå ïîòðåáîâàëîñü ïðèëîæèòü ñ îñòðèþ, ÷òîáû ðàçîðâàòü ñâÿçü ìåæäó äâóìÿ ìîëåêóëàìè àìèëîèä β ïåïòèäà,çàêðåïëåííûìè íà ñëþäå è îñòðèå ñîîòâåòñòâåííî.ñì.

ðèñ. 3.Ðåçóëüòàòû, èçîáðàæåííûå íà ðèñóíêå 3 A, ïîëó÷åíû â ðåçóëüòàòå 10 îäèíàêîâûõ ýêñïåðèìåíòîâ, ïðîâåäåííûõ â òå÷åíèå îäíîãîìåñÿöà. Áûëî ïîëó÷åíî îêîëî 5000 ñèëîâûõ êðèâûõ, íî òîëüêî íàíåñêîëüêèõ äåñÿòêîâ èç íèõ ñîäåðæàëñÿ ïèê, ñîîòâåòñòâóþùèé âçàèìîäåéñòâèþ äâóõ ìîëåêóë.Òàêæå áûëè ïðîâåäåíû êîíòðîëüíûå ýêñïåðèìåíòû, ïîäòâåðäèâøèå ñïðàâäëèâîñòü ýòèõ ðåçóëüòàòîâ.Êðîìå òîãî, áûëè ïðåäëîæåíû ìîäåëè âçàèìîäåéñòâèÿ äâóõìîëåêóë àìèëîèä β ïåïòèäà, êîòîðûå ïîäòâåðæäàþòñÿ ýêñïåðèìåíòàëüíûìè äàííûìè, ñì. ðèñ. 4.

 ýêñïåðèìåíòå äëÿ âåëè÷èíû L ïîëó÷åíî çíà÷åíèå L=17 ± 1 íì. Òåîðåòè÷åñêèå ìîäåëè äàþò çíà÷åíèÿ13 è 17 íì ñîîòâåòñòâåííî äëÿ ïàðàëëåëüíîãî è àíòèïàðàëëåëüíîãîâçàèìîäåéñòâèÿ β ëèñòîâ àìèëîèä β ïåïòèäà.11Ðèñ. 4. Âîçìîæíûå ìåõàíèçìû âçàèìîäåéñòâèÿ äâóõ ìîëåêóë àìèëîèä β ïåïòèäà: (À) ñ ïàðàëëåëüíûì è (Á) ñ àíòèïàðàëëåëüíûì âçàèìîäåéñòâèåì β ëèñòîâ àìèëîèä β ïåïòèäà.Òàêèì îáðàçîì ïåðâàÿ ïîñòàâëåííàÿ çàäà÷à ïî èññëåäîâàíèþóñëîâèé, ïðè êîòîðûõ ïðîèñõîäèò êîíôîðìàöèîííûé ïåðåõîä, èìåæìîëåêóëÿðíûõ âçàèìîäåéñòâèé, âîçíèêàþùèõ ìåæäó äâóìÿ ìîëåêóëàìè àìèëîèä β ïåïòèäà, ïîëíîñòüþ ðåøåíà.Âî âòîðîì ïàðàãðàôå ãëàâû 2 ðàññìîòðåíû ýêñïåðèìåíòû, ïðîâåäåííûå ìíîé íà êàôåäðå ôèçèêè ïîëèìåðîâ è êðèñòàëëîâ ôèçè÷åñêîãî ôàêóëüòåòà ÌÃÓ â ëàáîðàòîðèè çîíäîâîé ìèêðîñêîïèè ïîäðóêîâîäñòâîì Èãîðÿ Âëàäèìèðîâè÷à ßìèíñêîãî â 2005 2006 ãîäàõ.Ïîñëå òîãî, êàê áûëî îáíàðóæåíî âçàèìîäåéñòâèå ìîëåêóë àìèëîèä β ïåïòèäà, íàõîäÿùèõñÿ â êîíôîðìàöèè ñ íåïðàâèëüíîé óêëàäêîé, áûëî ïðèíÿòî ðåøåíèå áîëåå ïîäðîáíî èçó÷èòü ôèçè÷åñêèå ïîñëåäñòâèÿ ýòîãî âçàèìîäåéñòâèÿ.

Èç ëèòåðàòóðíûõ äàííûõ èçâåñòíî, ÷òî âçàèìîäåéñòâèå ìîëåêóë àìèëîèä β ïåïòèäà, íàõîäÿùèõñÿâ êîíôîðìàöèè ñ íåïðàâèëüíîé óêëàäêîé, ïðèâîäèò àãðåãàöèè áåëêà [4].  êà÷åñòâå ìîäåëüíîé ñèñòåìû áûë âûáðàí ëèçîöèì èç áåëêàêóðèíûõ ÿèö (hen egg white lysozyme), êîòîðûé îáëàäàåò ïîõîæèìè12ñâîéñòâàìè: ìîëåêóëû ëèçîöèìà, íàõîäÿùèåñÿ â ðàñòâîðå, ïðè ïîíèæåíèè pH è ïîâûøåííîé òåìïåðàòóðå (pH2, 57 ◦ Ñ) îðãàíèçóþòñÿâ ôèáðèëëû [5].Ýòà ðàáîòà ÿâëÿåòñÿ ïåðâîé ðàáîòîé ïî èññëåäîâàíèþ âëèÿíèÿôèçè÷åñêîé è õèìè÷åñêîé ñîðáöèè ìîëåêóë ëèçîöèìà ê ïîâåðõíîñòÿì ñëþäû, çîëîòà è ãðàôèòà íà êîíôîðìàöèþ ýòîé ìîëåêóëû. Ýòèýêñïåðèìåíòû íàïðàâëåíû íà òî, ÷òîáû ðåøèòü ñëåäóþùèå çàäà÷è:1.

Îïðåäåëèòü, ïðè êàêèõ óñëîâèÿõ ïðîèñõîäèò êîíôîðìàöèîííûé ïåðåõîä â ëèçîöèìå.2. Îïðåäåëèòü ñèëó âçàèìîäåéñòâèÿ ìîëåêóë ëèçîöèìà, íàõîäÿùèõñÿ â êîíôîðìàöèè ñ íåïðàâèëüíîé óêëàäêîé.3. Îïðåäåëèòü, êàê âëèÿþò íà êîíôîðìàöèþ ìîëåêóëû, íàõîäÿùåéñÿ â íàòèâíîé êîíôîðìàöèè ñëåäóþùèå ôàêòîðû: áëèçîñòü ýòîéìîëåêóëû ê ãèäðîôîáíîé è ãèäðîôèëüíîé ïîâåðõíîñòè, ôèçè÷åñêàÿè õèìè÷åñêàÿ ñîðáöèÿ ëèçîöèìà íà ïîâåðõíîñòè ñëþäû, çîëîòà èãðàôèòà.4. Èññëåäîâàòü àãðåãàöèþ ëèçîöèìà íà ðàçëè÷íûõ ïîâåðõíîñòÿõïðè òåõ óñëîâèÿõ, ïðè êîòîðûõ íå ïðîèñõîäèò àãðåãàöèÿ ëèçîöèìàâ ðàñòâîðå.Äëÿ ðåøåíèÿ ýòèõ çàäà÷ áûëî èñïîëüçîâàíî íåñêîëüêî ñïîñîáîâ çàêðåïëåíèÿ ëèçîöèìà íà ïîâåðõíîñòè: ôèçè÷åñêàÿ ñîðáöèÿ èç ðàñòâîðà, õèìè÷åñêàÿ ñîðáöèÿ (êîâàëåíòíàÿ ïðèøèâêà) ÷åðåçNH2 ãðóïïû ê ãëóòàðîâîìó àëüäåãèäó, êîòîðûé ïðèêðåïëÿëñÿ ëèáîê NH2 ãðóïïàì 4-àìèíîòèîôåíîëà, çàêðåïëåííîãî íà çîëîòå, ëèáî êNH2 ãðóïïàì 3-àìèíîïðîïèëñèëàòðàíà, çàêðåïëåííîãî íà ñëþäå èëèSi3 N4 êàíòèëåâåðå, ñì.

ðèñ. 5 è 6.Èç ëèòåðàòóðíûõ äàííûõ èçâåñòíî, ÷òî â ðàñòâîðå ïðè íèçêèõ pHëèçîöèì èçìåíÿåò êîíôîðìàöèþ òîëüêî ïðè ïîâûøåííîé òåìïåðàòóðå [5]. Ïðè ýòîì ôèçè÷åñêàÿ ñîðáöèÿ áåëêà íà ðàçëè÷íî çàðÿæåííûå êðåìíèåâûå ÷àñòè÷êè ïðèâîäèò ê ïîíèæåíèþ ýòîé òåìïåðàòóðû [6].13Ðèñ. 5. Ñõåìà âòîðîãî ýòàïà èììîáèëèçèöèè ëèçîöèìà. (À) Ìåõàíèçì ñîçäàíèÿ àìèíîãðóïï íà ïîâåðõíîñòè çîëîòà. (Á) Ìåõàíèçìñîçäàíèÿ àìèíîãðóïï íà ïîâåðõíîñòè êðåìíèÿ è ñëþäû.Ïðè ïîìîùè àòîìíî-ñèëîâîãî ìèêðîñêîïà ÔåìòîÑêàí [8] áûëîîïðåäåëåíî, ÷òî ïðè ôèçè÷åñêîé ñîðáöèè ëèçîöèìà íà ïîâåðõíîñòüãðàôèòà è õèìè÷åñêîé ñîðáöèè íà ïîâåðõíîñòü çîëîòà îáðàçîâàíèåôèáðèëë ïðîèñõîäèò ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå, ñì.

ðèñ. 7.Òàêèì îáðàçîì âïåðâûå îáíàðóæåíî, ÷òî õèìè÷åñêàÿ ñîðáöèÿ ìîëåêóë ëèçîöèìà ê ïîâåðõíîñòè çîëîòà è ôèçè÷åñêàÿ ñîðáöèÿ ìîëåêóëëèçîöèìà íà ïîâåðõíîñòü ãðàôèòà ïðèâîäèò ê ïîíèæåíèþ òåìïåðàòóðû êîíôîðìàöèîííîãî ïåðåõîäà èç íàòèâíîãî ñîñòîÿíèÿ â ñîñòîÿíèå ñ íåïðàâèëüíîé óêëàäêîé ïî êðàéíåé ìåðå äîêîìíàòíîé òåìïåðàòóðû (ïðè pH 3 áóôåðíîãî ðàñòâîðà, â êîòîðîìíàõîäèòñÿ áåëîê), â òî âðåìÿ êàê ôèçè÷åñêàÿ ñîðáöèÿ ïðè pH 4.8 íàêðåìíèåâûå ÷àñòè÷êè ïðèâîäèò ê ïîíèæåíèþ ýòîé òåìïåðàòóðû íà12 20 ◦ Ñ [6].Äëÿ èçó÷åíèÿ âëèÿíèÿ òåìïåðàòóðû ðàñòâîðà íà êîíôîðìàöèþ14Ðèñ. 6.

Ñõåìà 3-5 ýòàïîâ èììîáèëèçèöèè ëèçîöèìà. (À) Òðåòèéýòàï õèìè÷åñêàÿ ñîðáöèÿ ãëóòàðîâîãî àëüäåãèäà ê NH2 ãðóïïàì,çàêðåïëåííûì íà ïîâåðõíîñòè. (Á) ×åòâåðòûé ýòàï õèìè÷åñêàÿñîðáöèÿ ëèçîöèìà (L) ê ãëóòàðîâîìó àëüäåãèäó. (Â) Ïÿòûé ýòàï áëîêèðîâêà íåïðîðåàãèðîâàâøèõ àëüäåãèäíûõ ãðóïï.ìîëåêóë, ôèçè÷åñêè ñîðáèðîâàííûõ íà ðàçëè÷íûõ ïîäëîæêàõ, è äëÿîïðåäåëåíèÿ òåìïåðàòóðû êîíôîðìàöèîííîãî ïåðåõîäà â ìîëåêóëàõëèçîöèìà áûëà ïðîâåäåíà ñåðèÿ ýêñïåðèìåíòîâ ïî àãðåãàöèè ëèçîöèìà íà ñâåæåñêîëîòîé ïîâåðõíîñòè ñëþäû, ñëþäû ñî ñëîåì 3àìèíîïðîïèëñèëàòðàíà è çîëîòà ïðè òåìïåðàòóðå 50 ◦ Ñ.Íà îáðàçöå ñëþäû, íàõîäÿùåìñÿ â áóôåðíîì ðàñòâîðå â òå÷åíèå11 äíåé, áûëè îáíàðóæåíû ïîðîîáðàçíûå àãðåãàòû, êîòîðûå óæå áûëè îáíàðóæåíû ðàíåå [7], ñì. ðèñ.