Отзыв на автореферат 3 (Структурные и каталитические свойства ферментов перекисного окисления липидов – 1215-липоксигеназ), страница 2

Связывание LOX с липидным бислоем было проведено сиспользованиемкрупныходнослойныхвезикул(везикулвнутреннихмитохондриальных мембран) в качестве модельных мембран. Эти данные показали,что степень гибкости LOX строго определяется степенью взаимодействия двухдоменов и что присутствие лиганда активного центра понижает способность ферментак мембранному связыванию.3. Формат диссертацииАвтореферат докторской диссертации состоит из 50 страниц (включая списоклитературы) и содержит 23 рисунка, 11 таблиц и 8 схем, которые четко и наглядноотражают основные результаты работы.

Диссертация написана хорошим языком,рисунки хорошего качества и содержат соответствующие аннотации, схемы оченьинформативны. К сожалению, моего знания русского языка не достаточно дляобнаружения опечаток и орфографических ошибок.4. Критические замечания и открытые вопросыТема 1: С моей точки зрения тематика раздела по синтезу и применению зондовактивного центра раскрыта полностью.Тема 2:I) Диссертант его коллеги обнаружили возможные пути перемещения кислорода внутримолекулы фермента и подтвердили свои результаты с помощью экспериментов вобласти мутагенеза.

К сожалению, в работе не предоставлены доказательствафункциональности этих путей на основе кристаллографических исследований. Донастоящего времени не удалось измерить распределение электронной плотностикислорода в соответствующих туннелях и полостях молекулы фермента.Кристаллографические исследования в условиях повышенных концентрацийкислорода и/или ксенона могло бы быть использовано.Тема 3:I) Наличие димеризации фермента было показано на примере ALOX15, ALOX5 иизоформ СОХ. Так, для СОХ2 сообщалось, что в ее димере только один мономерявляется каталитически активным, в то время как второй выполняет рольаллостерического регулятора.

Для ALOX15 подобное явление может также иметьместо, однако требуются дополнительные экспериментальные доказательства,подтверждающие гипотезу.II) Диссертант предположил, что лиганды активного центра уменьшают степеньмеждоменовой подвижности. Эти данные подтверждаются методом МРР. Так какмеждоменовая подвижность припятствует кристаллизации фермента, сокристализацияфермента с лигандом могла бы поспособствовать процессу кристаллизации. Ксожалению, лиганды активного центра, синтезированные диссертантом, не былииспользованы в кристаллографических исследованиях.III) Диссертант показал, что взаимодействие ALOX15 с мембраной изменяет структуруэтого фермента.

Эти данные согласуются с предыдущими исследованиями,указывающими на рост оксигеназной активности фермента в присутствии небольшихколичеств биомембран по отношению к жирным кислотам. К сожалению, подробноеописание структурные изменения ALOX15 в присутствии мембранн еще не завершено.5. Общая оценкаИ. Иванов является одним из ведущих специалистов по молекулярной энзимологиилипоксигеназ в мире. Он имеет огромный опыт в области химии эйкозаноидов и внесзначительный вклад в область знаний о молекулярных аспектах функционированиялипоксигеназ. Настоящая докторская диссертация представляет собой прекраснуючасть научной работы, которая адекватно отражает впечатляющиую научную карьерудиссертанта.

Я настоятельно рекомендую данную диссертационную работу.Проф., др. мед. наукХартмут Кюн.