Кокряков - Биология антибиотиков животного происхождения - 1999 (947290), страница 24
Текст из файла (страница 24)
В частности, в 10» клеток нейтрофилов человека содержится 3.9Ы.9 мг миелопероксидазы, 1.2Ю.2 — катепсина б, 2.7~0.6 — эластазы, 4.3~1.2 — лвктоферрина (01ззоп, 1977) и 7.2 мг лизоцима. Поэтому функциональная неполноценность нейтрофилов, обусловленная наследственно детерминируемыми дефицитами или отсугствием в них отдельных представителей группы антимикробных катионных белков и пептидов, представляет редко встречающееся явление (НШ, 1984; ОаИш, 1992).
Гораздо чаще в клинической практике имеют место случаи развития аутоинфекциониых заболеваний и гнойных осложнений у больных хирургических, пульмонологических, педиатрических клиник, ожоговых центров и отделений реанимации, которые сопряжены с приобретенными дефицитами содержания этих белков (Мазинг, 1988; Пигаревский, 1988). В дополнение к этому общеизвестны факты низкого уровня сопротивляемости организма новорожденных инфекциям и вследствие этого склонность к септическому течению заболеваний у детей в ранний постнатальный период онтогенеза (МШег, 1969; %Изоп, 1986; НШ, 1987; Саго, СаИХ, 1989).
По мнению этих авторов, недостаточность хемотаксиса нейтрофилов и незавершенный характер фагоцитоза, осуществляемого ими, являются одними из ведущих причин сниженной резистентности новорожденных к инфекции. В то же самое время некоторые конкретные механизмы полома фагоцитоза в данных условиях остаются невыясненными, Это побудило нас провести комплексное морфобиохимическое и функциональное исследование с целью определения роли катионных белков и пептидов в обес- печении фагоцигарной функции нейтрофилов человека и некоторых лабораторных животных в ранний постнатальный период их развития.
Результаты сравнительного биохимического определения общего кислоторастворимого белка, миелопероксидазы, эластазы и катепсина б в нейтрофилах пуповинной крови новорожденных и взрослых доноров (табл. 2) однозначно свидетельствуют о дефиците этих сое-, динений в клетках детей. Параллельная оценка содержания гранулярных катионных белков и пептидов с использованием лизосомаль но-катионного теста (Пигаревский, 1975; Пигаревский и др., 1990) соответствует данным этого анализа.
Подобная же закономерность изменения содержания катионных белков в нейтрофилах отпервыхдней рождения до периодаполовозрелости установлена нами при обследовании белых беспородных крыс (табл. 3) и кроликов породы «Шиншилла» (табл. 4). Необходимо отметить, что дефициту гранулярных катионных белков нейтро-, филов кролика соответствовали низкие значения такого важного функционального показателя их активности, как завершенность фагоцитоза. Последнее обстоятельство является, по-видимому, одной из возможных причин генерализации листериозного и герпетического инфекционных процессов у животных 7-дневного возраста, которые у ~ половозрелых особей протекают локально благодаря полной инактивации микроорганизмов в фагоцитах очага повреждения (Пигарев- .
ский и др., 1990). Сведения подобного рода были ранее получены только для миело-, пероксидазы крыс (СЫзсепзеп, КосЬз~е1п, 1985) и лактоферрина нейтрофилав человека (Ргеешапп е1 а1., 1985). Таким образом, нами установлен временный (преходящий) дефицит антимикробных белков и пептидов нейтрофилов в период раннего постнатального развития человека и животных (кролик, крыса), который может составлять причину функциональной неполноценности фагоцитов и быть расценен как один из факторов риска развития ' аутоинфекционных заболеваний и септических осложнений. В дополнение к этому (благодаря сопряженно проведенным биохимическому и морфологическому анализам) впервые получены строгие доказательства объективности данных цитохимического определения содержания катиоиных белков и пептидов нейтрофилов при использовании лизосомально-катионного теста.
Биологическая значимость антибиотических пептидов и белков однозначно просматривается в анализе явления резорбтивной клеточной резистентности (Пигаревский, 1978, 1992). Гипотеза о резорбтивнои клеточной резистентности как особой форме антимикробной защиты организма человека и животных был» выдвинута проф. В.Е. Пигаревским (1978) на основании результатов работ по исследованию морфодинамики воспалительных очагов повреждения при инфекционной патологии. Морфологический анализ инфицированных органов и тканей при хламидиальной (Пигаревский, Толыбеков, 197б) и псевдотуберкулезной (Мазинг, Юнусова, Таблица 2 Показатели содержании катионнык белков а нейтрофилак человека Примечание.
Здесь и в табл. 3, 4 ЛКТ вЂ” лизосомально-катионный тест. ОКБ — общий кислоторастворимый белок. Таблица 3 Показатели содержании катионнык белков а нейтрофнлак крыс Таблица 4 Показатели содержании катноннык белков и функциональной активности нейтрофилоа кролика Примечание.
ААКБ — антибактериальнаа активнос1ь катиоиных белков. ) фекцкях оказал, что махрофаги воспалительных очагов в дуктов распада нейтрофилов (ядер, хроматина, гранул и их отдель птидных компонентов), благодаря чему они становятся резистентными к микробному паразитированию. Опыты по инахтивации этих возбудителей ш ч1го ядерными гистонами (Пи ., 1975) и гаревскии и др., ) и гранулярными хатионными белхами иейтрофилов (Кокряков и др., 1977) частично свидетельствовали в пользу выдвинутой концепции. С целью дальнейшего обоснования биологической значимости рассматриваемого явления и расшифровки его конхретных морфобиохимичесхих механизмов нами было проведено комплексное ния пе ит исследование с использованием в качестве основного бъ перитонеальных макрофагов кролиха, выделенных из очага асептического воспаления на разных сроках посл Тжое воспалеыие характеризуется ыадежно воспроизводимой во 4— времени диыамихой смены лейкоцитарных попу .
В иы-,7цирующего раствора 8 ч после введения в брюшную полость инту~ рую к ови. оЗбчэ крахмала наблюдается интенсивный выход туда ф крови. До ч этот тип клеток является преобладающим в эксудате. В дальнейшем происходит зжономерная смена клеточных цопунее ляций в очаге воспаления и к 48 ч махрофаги составля е 90 % клеток эксудата, причем около 50 % из них содержат морфологически идентифицируемые остатки ядер и гр федующие 3 сут наблюдается постепенное исчезновение компонентов нейтрофилов из макрофагов в результате их переваривания в гранулярном аппарате последних. Подобная динамвха клеточных режций в очаге воспаления позволяет п ет получать мжрофаги с различным содержанием резорбированных антимикробыых белков нейтрофилов (миелопероксидаза, лактоферрин, дефенсины лова, 1989).
и др,) и использовать их в витральных тест-системах (М Д азинг, ДаниВ первои серии экспериментов изучали соотношение функциональной жтивности (фагоцитарное число и индекс, дыхательный дения в п взрыв) и количества миелоперохсидазы гранулоцитарного еритонеальных мжрофагах кроляха, выделенных из о га- происхожнизма на азных с р сроках развертывания асептического воспаления из орга(табл. 5).
Установлена четкая положительная хоррелятив ме показ жду ателями функциональной жтивности мжрофагов и соая хоррелятивная связь держанием в них миелопероксидазы, которое максимально в 2-сугочных клетках. Можно допустить, что именно с увеличением количества антимикробных белков нейтрофилов в вакуолярном аппарате макпотенциала по рофагов связано повышение их цитоцидного п сравнению с исходными интжтными клетками. Подобный эффект наблюдапи зарубежные исследователи (ЬосЫеу, К1еЬапогг, 1983) при добавлении миелопероксидазы в инкубационную среду ль зу процесса резорбтивной клеточной резистентности позволяет более Таблица 5 Показатели функциональной активности и седериаиив аитииикробивзк белков макрефагев Примечание.
Здесь и в табл. б ФЧ вЂ” фагоцитарное число (процент фагоцитов, участвующих в фагоцитарном процессе, от общего числа клеток). ФИ вЂ” фагоцитарный индекс (число фагоцитированных микробов на 1 клетку). НСТ-позитивная клетка — клетка, способная к восстановлению красителя ннтросинего тетразолиевого (НСТ). » — р < 0.001, "" — р < 0.01, »»» — р с 0.05 по сравнению с соответствующими показателями резидентных перитонеальных макрофагов.
строго оценивать значение отдельных фрахций катионных белков нейтрофилов в модуляции фагоцитарной ахтивности макрофагов. Нами было изучено влияние лактоферрина и дефенсинов кролика, исходно отсутствующих в резидентных перитонеальных макрофагах, на фагоцитоз последними стафилокохков ш Мхо. Установлено дозозависимое стимулирующее функциональную жтивность макрофагов действие испытанных белхов (табл. 6). При этом выявлено, что лахтоферрин имеет большее влияние на поглотительную способность клетох, тогда ках дефенсины в концентрации 50 мхг/мл ахтивнее стимулировали дыхательную фунхцию махрофагов.
Первое может найти частичное объяснение в рамках представления об опсонизирующих свойствах лактоферрина (ВиБеп, Агшз1гоп8, 1979; Ьппа, К1егзхепЬопш, 1985, 1987), имеющего рецепторы на некоторых типах мжрофагов (31е1пшапп е1 а1., 1982). Таким образом, совокупность приведенных экспериментальных данных свидетельствует в пользу выдвинутой В.Е. Пигаревским (1978) гипотезы о резорбтивной клеточной резистентности как об одном из механизмов осуществления неспецифических защитных реакций в организме человека и животных. Ряд зарубежных исследователей также установили сходные воздействия со стороны катионных белков нейтрофилов на функции мжрофагов (СашрЬе11, ЖаЫ, 1983; Ьеип8, 0огеп, 1989; БсЬше1се1 е1 а1., 1990). Из этого следует, что эстафетная передача катионных пептидов и бедхов (дефенсинов, катепси- 97 7 В.
Н. Коапааоа Таблица б Фуниинональнаа активность резидентных нернтонеалышх макрофагоа после их предварительной ннкубацнн с белкамн нейтрофилоа « — р к 0.05, «« — р к 0.01, ««« — р к 0.005 по сравнению с соответствующими показателями контроля. на О, эластазы, лактоферрина, миелопероксидазы) от нейтрофилов к махрофагам может рассматриваться в качестве одного из биохимических механизмов межклеточной кооперации, направленных на обеспечение барьерных функций организма против инфекционных факторов в период, предшествующий развитию специфических иммунных реакций (приобретенного иммунитета).
При этом резорбированные катионные белки и пептиды нейтрофилов через модуляцию функциональной активности макрофагов могут участвовать в формировании уже и специфических защитных реакций организма. Отдельные сведения в этом направлении исследований получены как отечественными (Долгушин, 1989), так и зарубежными (ТсЬогхещвЫ е1 а1., 1984) учеными. По их мнению, биологически активные соединения нейтрофилов могут играть важную роль в инициации каскада клеточно-гуморальных взаимодействий, направленных на формирование специфического иммунного ответа при инфекционной патологии. Исследования последних лет продемонстрировали еще ряд возможных путей вовлечения антимикробных пептидов и белков в регуляцию защитных реакций организма. В частности, японскими исследователями (х'опп81йа е1 а1., 1996) было изучено влияние дефенсинов как одного из ведущих молекулярных факторов кислороднезависимой антимикробной системы нейтрофильных гранулоцитов на ряд функциональных свойств этих клеток, таких как адгезия, хемотаксис, поглощение объектов фагоцитоза, продукция супероксид-аниона (ОО,).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
