1625912753-65e6da6a77981678ec57885d9870b7c6 (800502)

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла

К-2. Кинетика гидролиза n-нитрофенилфосфата щелочнойфосфатазой

Приборы и реактивы:

-термостат (30⁰С)
-секундомер
-спектрофотометр
-кювета с длиной оптического пути 1 см
-пипетки на 1; 2; 5 и 10 мл
-ванночка со льдом для хранения раствора фермента
-0,02 М раствора NaOH
-раствор фермента с активностью 0,1 ФЕ/мл
-0,05 М глициновый буфер, рН 10, содержащий 5*10^-4 М MgSO₄ (раствор В)
-0,01 М раствор n-нитрофенилфосфата в 0,05 глициновом буфере, рН 10, содержащем 5*10^-4 М MgSO₄ (раствор А)

Химическая реакция:

Экспериментальная часть:

а) Приготовление рабочих растворов субстрата
Необходимо приготовить рабочий раствор А, содержащий 0,05 М глициновый буфер, рН 10, содержащий 5*10^-4 М MgSO₄ (раствор В) и 0,01 М раствор n-нитрофенилфосфата в 0,05 глициновом буфере, рН 10, содержащем 5*10^-4 М MgSO₄ (раствор А). Растворы готовили исходя из раствора А, разбавляя его раствором В так, чтобы объем рабочего раствора составлял 5 мл.

б) Измерение скорости гидролиза n-нитрофенилфосфата
Методика:
В пробирку налили 4,5 мл рабочего раствора и поместили в термостат (30⁰С) на 10 минут. В пробирку с рабочим раствором, находящимся в термостате, внесли 0,5 мл раствора фермента, перемешали, включив секундомер. На протяжении всего эксперимента пробирку с рабочим раствором не вынимали из термостата.
Через 2; 5; 10 и 15 минут от начала реакции из реакционной смеси отобрали пробы по 1 мл, быстро влили их в пробирки с 9 мл 0,02М раствором NaOH и тщательно перемешали. Из оставшихся 0,5 мл рабочего раствора и 4,5 мл 0,02 М NaOH приготовили контрольный раствор.
Замерили оптическую плотность контрольного раствора (D_контр) и каждой отобранной пробы на спектрофотометре в кюветах 1 см при 400нм против воздуха.

Ход работы:
В ходе эксперимента обнаружилось нехватка раствора фермента. Выданного фермента хватило на три приготовления реакционной смеси из рабочих растворов с концентрациями 0,01 М; 0,005 М; 0,003 М. У коллеги также хватило раствора фермента только на три реакционной смеси, поэтому было принято решение обменяться полученными результатами для более точной дальнейшей обработки результатов.

Полученные результаты:

Обработка результатов:

График зависимости (D-D_контр ) от времени при концентрации рабочего раствора 0,01 М.

График зависимости (D-D_контр ) от времени при концентрации рабочего раствора 0,005 М.

График зависимости (D-D_контр ) от времени при концентрации рабочего раствора 0,003М.

По начальным линейным участкам кинетических кривых вычислили скорости реакций в в 1/мин по следующей схеме: рассчитали для концентрации 0,01 скорости реакций в точках 2 и 5 минут, 5 и 10 минут, так как в этих участках прослеживается линейная зависимость. Далее взяли из четырех значение среднее.

Результаты свели в таблицу.

Далее рассчитали скорости реакций в моль/л*мин, воспользовавшись формулой , 15.2*10³ л/моль*см – молярный коэффициент экстинкции n-нитрофенола при 400 нм, 10 – коэффициент, учитывающий разбавление реакционной смеси 0,02 М раствором NaOH при остановке реакции. Рассчитанные скорости гидролиза n-нитрофенилфосфата, а также обратные им величины свели в таблицу.

Построили график зависимости 1/V от 1/S.

Из графика нашли значения V_{max =} 8,24*10^-6 моль/(л*мин) _,K_m =0,000219 моль/л

Вывод: проанализировав рассчитанные результаты скорости гидролиза n-нитрофенилфосфата при разных концентрациях и найденную по графику максимальную скорость можно сказать, что эксперимент прошел удачно и результаты соответствуют друг другу.
Скорость гидролиза 1 рабочего раствора практически соответствует V_max, показывая, что в ходе эксперимента еще не достигнута максимальная скорость и близкое значение подтверждает достоверность результатов. Причем с уменьшением концентрации рабочего раствора снижается скорость гидролиза, что тоже показывает логичность результатов.

11

Характеристики

Тип файла документ

Документы такого типа открываются такими программами, как Microsoft Office Word на компьютерах Windows, Apple Pages на компьютерах Mac, Open Office - бесплатная альтернатива на различных платформах, в том числе Linux. Наиболее простым и современным решением будут Google документы, так как открываются онлайн без скачивания прямо в браузере на любой платформе. Существуют российские качественные аналоги, например от Яндекса.

Будьте внимательны на мобильных устройствах, так как там используются упрощённый функционал даже в официальном приложении от Microsoft, поэтому для просмотра скачивайте PDF-версию. А если нужно редактировать файл, то используйте оригинальный файл.

Файлы такого типа обычно разбиты на страницы, а текст может быть форматированным (жирный, курсив, выбор шрифта, таблицы и т.п.), а также в него можно добавлять изображения. Формат идеально подходит для рефератов, докладов и РПЗ курсовых проектов, которые необходимо распечатать. Кстати перед печатью также сохраняйте файл в PDF, так как принтер может начудить со шрифтами.

Список файлов лабораторной работы