166697 (740385)

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла

Методики анализа витаминов

Витамин А

(Мол. вес 299,22)

Являясь сильно ненасыщенным соединением, витамин А легко реагирует с кислородом воздуха и окисляющими агентами.

Наличие в молекуле спиртовой группы обусловливает реакции с хлорангидридами кислот с образованием производных — бензоат, ацетат и др. в-нафтойнокислый эфир представляет кристаллическое вещество, также обладающее витаминным действием.

Качественные реакции

1. Максимум абсорбции при 328 нм.

2. В хлороформном растворе с треххлористой сурьмой появляется синее окрашивание.

Количественное определение

Реакция с треххлористой сурьмой используется и для количественного определения. Синюю окраску сравнивают со стандартной шкалой так называемых синих единиц.

5—10 г драже экстрагируют хлороформом для извлечения витамина А, хлороформ отгоняют. Остаток омыляют 0,5 н. раствором спиртового раствора едкого кали в продолжение ½ часа. После этого из смеси извлекают неомыляемую фракцию серным эфиром 3—4 порциями (по 50—100 мл), соединенные эфирные вытяжки промывают водой, высушивают безводным сульфатом натрия, растворитель нацело удаляют выпариванием в токе углекислоты, остаток растворяют в хлороформе, чтобы в 1 мл раствора содержалось от 10 до 40 ИЕ витамина А.

К 0,2 мл хлороформного раствора добавляют 1 каплю уксусного ангидрида и 2 мл хлороформного раствора треххлористой сурьмы. Появляющуюся синюю окраску немедленно сравнивают с подходящей по цветности пробиркой стандартной шкалы или в ступенчатом фотометре, фотоколориметре и т. д.

При визуальном способе определения наиболее точные результаты получаются, если окраска по интенсивности укладывается в пределах 4—10-й пробирок.

Для приготовления шкалы пробирок-эталонов 75 г химически чистого сульфата меди и 3,5 г химически чистого нитрата кобальта растворяют в 500 мл воды. Полученный раствор разбавляют водой, как указано ниже.

Реакция витамина А с треххлористой сурьмой протекает быстро, достигая максимума приблизительно через 10 секунд; при низких температурах (0—1°) окраска более устойчива; яркий (дневной или искусственный) свет заметно влияет на быстроту выцветаемости.

Витамин В1 (Тиамин-бромид бромистоводородный)

(Мол. вес 435,2)

1. Качественные реакции. При прибавлении к подкисленному разведенной азотной кислотой 1%-ному раствору нескольких капель раствора нитрата серебра выпадает творожистый осадок, не растворимый в азотной кислоте.

2. Тиохромная проба основана на переводе тиамина красной кровяной солью в щелочной среде в тиохром, растворимый в бутиловом или изоамиловом спирте с синей флуоресценцией:

К 5 мл раствора тиамина (с содержанием 0,01 мг) в делительной воронке добавляют 5 мл 1%-ного раствора красной кровяной соли, перемешивают и оставляют стоять в течение 2 минут. Затем добавляют 20 мл изобутилового спирта и сильно перемешивают, встряхивая в течение 1 минуты, отделяют спиртовый слой и фильтруют. Тиохром, полученный в результате окисления тиамина, обусловливает синюю флуоресценцию.

1. Тиамин дает осадки с некоторыми общими алкалоидными реактивами, например с реактивом Драгендорфа (пикриновая кислота не дает осадка).

Количественное определение

1. После нейтрализации (по бромтимоловому синему) тиамин-бромид определяется аргентометрически.

2. Другой метод основан на свойстве витамина В1 образовывать с диазотированным пара-амино-ацетофеноном соединение фиолетово-красного цвета, которое нерастворимо в воде, со многими органическими растворителями образует цветные растворы, допускающие сравнение с эталонными растворами. Из органических растворителей применяют обычно ксилол или толуол.

Для определения тиамина, растворенного в однородном бесцветном растворителе, нет необходимости извлекать цветное соединение из раствора. В этих случаях прибавляют изопропанол в количестве, достаточном для растворения цветного соединения, и проводят определение по стандартному раствору.

Для анализа берут такое количество препарата, в котором содержится 100 микрограммов (0,0001 г) тиамина. Эталон готовят растворением 50 мг витамина Вх (точная навеска) в 500 мл 50% по объему) этанола, содержащего 1 каплю 4 н. соляной кислоты. Хотя этот эталонный раствор можно сохранять при комнатной температуре в течение нескольких месяцев, предпочитают все же готовить его на срок не более 1 месяца. Кроме эталонного раствора заготовляют: 1) 0,03%-ного раствора пара-амино-ацетофенона в 0,2 н. соляной кислоте; 2) 0,1%-ный раствор нитрита натрия; 3) 1 н. и 2,5 н. растворы едкого натра; 4) 50%-ный этанол (по объему); 5) толуол; 6) изопропанол и 7) 4 н. соляную кислоту.

Для приготовления реактива под названием диазораствор А в небольшой склянке смешивают 10 мл раствора пара-амино-ацетофенона и 2 мл раствора нитрита натрия и охлаждают не менее 2 минут в ледяной воде. Перед пользованием к смеси прибавляют 3 мл 1 н. раствора едкого натра и взбалтывают. Реактив под названием диазораствор Б готовят так же, как и раствор А, с той лишь разницей, что вместо 1 н. раствора едкого натра к раствору Б прибавляют 2,5 н. раствора едкого натра.

Испытуемый ампульный раствор смешивают с таким количеством перегнанной воды, чтобы каждый миллилитр смеси содержал около 100 микрограммов тиамина. В калиброванную пробирку на 10 мл вливают 1 мл смеси, прибавляют 2 мл 50%-ного этанола и помещают в водяную баню при температуре 60°. Через 1 минуту приливают 1 мл диазораствора А, сильно взбалтывают и снова оставляют в бане на 2—-3 минуты. Затем смесь охлаждают, прибавляют 1 каплю 4 н. соляной кислоты и изопропанол до метки, взбалтывают и сравнивают в колориметре с контрольным раствором, изготовляемым смешением 1 мл воды с 1 мл эталонного раствора тиамина, 1 мл 50% этанола и 1 мл диазораствора А по методу, описанному выше.

1. Для определения витамин В1 по другому методу растворяют 0,4—1,5 мг его в 10 мл воды, прибавляют 0,5 мл реактива с фосфорно-вольфраматом и 0,4—0,6 мл 10%-ного раствора едкого натра. Появляется синее окрашивание. Титруют 0,002 н. раствором красной кровяной соли, 1,82 мл которого соответствует 1 мг витамина В^ до исчезновения синего окрашивания.

Реактив готовят следующим образом: 10 г вольфрамата натрия растворяют в 75 мл воды, прибавляют 8 мл 85%-ной фосфорной кислоты и слабо нагревают в течение 2 часов. Если раствор зеленеет, прибавляют немного бромной воды после нагревания в течение указанного времени и избыток брома удаляют кипячением. По охлаждении доводят до 100 мл.

Витамин В2 (Рибофлавин. Лактофлавин)

(Мол. вес 376,2)

Качественные реакции

1. 0,001%-ный раствор (1 мг: 100) рибофлавина — бледного зеленовато-желтого цвета в проходящем свете с интенсивной желтовато-зеленой флуоресценцией, исчезающей от прибавления минеральных кислот или щелочей.

2. При восстановлении цинком в уксуснокислом или солянокислом растворе рибофлавин переходит в лейкофлавин, присоединяя 2 атома водорода.

Количественное определение

1. Непосредственно колориметрированием желтых растворов рибофлавина.

2. По азоту. К 0,3 г рибофлавина (точная навеска), предварительно высушенного в течение 18 часов в вакуум-эксикаторе над серной кислотой, в кьельдалевской колбе прибавляют 1 г бензойной кислоты и определяют содержание азота, разрушая смесь не менее 5 часов. Содержание азота должно быть не менее 14,5% и не более 15,2%.

Витамин В6 (Пиридоксин. Адермин)

(Мол. вес 205,6)

Качественные реакции

1. С фосфорно-вольфрамовой кислотой адермин образует нерастворимое соединение (осадок).

2. С хлорным железом адермин дает красное окрашивание.

3. Смешивают 1 мл 0,01%-ного раствора с 1 мл 0,04%-ного раствора 2,6-дихлорхинонхлоримида в абсолютном алкоголе и затем прибавляют 1 каплю раствора аммиака — появляется синее окрашивание.

Количественное определение

1. Колориметрическое определение основано на превращении четвертичного основания в фиолетового цвета соединение типа кар-бопиридинцианина, которое колориметрируют, сравнивая со стандартом.

2. Солянокислую соль адермина можно определять титрованием раствором щелочи при индикаторе бромтимоловом синем; для проверки оттитрованную жидкость вновь титруют 0,1 н. раствором нитрата серебра.

Фолиевая кислота (Птероилглутаминовая кислота)

(Мол. вес 441,21)

Качественные реакции

1. Получение азокрасителя.

2. Спектр поглощения в ультрафиолете (при рН 11) имеет максимум при 255, 282 и 365 нм.

Количественное определение

При восстановлении фолиевой кислоты в солянокислом растворе цинковой пылью в числе других продуктов отщепляется пара-амино-бензойная кислота, которую диазотируют нитритом натрия. Полученная соль диазония сочетается с N-(1-нафтил)-этилендиаминди-гидрохлоридом в присутствии сульфамата аммония NH2SO2 ONH4

При этом наблюдается фиолетовая окраска раствора, интенсивность которой пропорциональна концентрации и измеряется в фотоколориметре или в спектрофотометре.

Требуются реактивы: 1) раствор желатины (1,5 г желатины и 0,1 г бензойной кислоты растворяют в 100 мл воды), 2) 10%-ный раствор соляной кислоты, 3) 0,1%-ный раствор нитрита натрия, 4) 8%-ный раствор мочевины и 5) 0,1%-ный раствор N-(1-нафтил)-этилендиаминдигидрохлорида.

Точно 0,05 г пара-аминобензойной кислоты с температурой плавления 186—187° отвешивают в стаканчике емкостью 15—20 мл, растворяют в 96%-ном этиловом спирте, переливают в мерную колбу емкостью 50 мл, стаканчик промывают 3—4 раза спиртом (общее количество спирта 25 мл), раствор доводят водой до метки и перемешивают. Из этого раствора отбирают 1 мл в колбу емкостью 250 мл, прибавляют 175 мл воды, 45 мл 10%-ного раствора соляной кислоты, 2,5 мл раствора желатины, доводят до метки водой и перемешивают. В 1 мл раствора содержится 0,004 мг пара-аминобензойной кислоты.

В четыре колбы емкостью 15—20 мл вливают пипеткой 1, 2, 3 и 4 мл приготовленного раствора и доводят объем раствора в каждой колбе водой до 5 мл и прибавляют по 0,7 мл 10%-ного раствора соляной кислоты, по 1 мл 0,1%-ного раствора нитрита натрия, хорошо перемешивают и оставляют на 5 минут. Затем в каждую колбу прибавляют по 1 мл 8%-ного раствора мочевины, перемешивают и вновь оставляют на 5 минут. После этого в каждую колбу прибавляют по 1 мл 0,1%-ного раствора N-(1-нафтил)-этилендиаминдигидрохлорида, по 1,3 мл воды, перемешивают, оставляют на 10 минут и затем определяют окраски раствора" электрофотоколориметром со светофильтром 550 нм. Для получения стандартной кривой на оси ординат наносят показания гальванометра, а на оси абсцисс — количество миллиграммов и соединяют прямой линией точки пересечения перпендикуляров, восстановленных из соответствующих точек осей графика.

Определение общего количества (связанной и свободной) р-аминобензоилглутаминовой кислоты в препаратах

Точную навеску препарата (0,049—0,050 г) в стаканчике емкостью 15—20 мл смачивают несколькими каплями воды и растворяют в 0,1 н. растворе едкого натра. Раствор переливают в мерную колбу емкостью 50 мл, стаканчик промывают несколько раз 0,1 н. раствором едкого натра, сливая промывную жидкость в ту же колбу. Объем раствора доводят 0,1 н. раствором едкого натра до метки и хорошо перемешивают. Из полученного раствора отбирают 1 мл в мерную колбу емкостью 100 мл, добавляют 75 мл воды, 18 мл 10%-ного раствора соляной кислоты, 1 мл раствора желатины, доводят до метки водой и перемешивают (раствор А).

К 75 мл раствора в конической колбе емкостью 150 мл прибавляют 0,5 г цинковой пыли и оставляют на 15 минут при частом перемешивании. Раствор фильтруют через сухой фильтр в сухую колбу, отбрасывая первые 15—20 мл фильтрата. К 2 мл фильтрата в колбе емкостью 15—20 мл прибавляют 3 мл воды, 0,7 мл 10%-ного раствора соляной кислоты и далее поступают, как указано при получении стандартной кривой.

Определение свободной п-аминобензоилглутаминовой кислоты

К 2 мл раствора А в колбе емкостью 15—20 мл добавляют 8 мл воды и далее поступают, как описано при определении общего количества пара-аминобензоилглутаминовой кислоты. Содержание фолиевой кислоты в граммах (х) вычисляют по формуле

где а — общее количество свободной и связанной пара-аминобензоилглутаминовой кислоты, найденной по калибровочной кривой, в миллиграммах; b — количество свободной пара-аминобензоилглутаминовой кислоты, найденной по калибровочной кривой, в миллиграммах; 25 и 10 — постоянные коэффициенты; 3,22 — фактор пересчета пара-аминобензоилглутаминовой кислоты на фолиевую кислоту.

Витамин В12 (Цианкобаламин)

Качественные реакции

Характеристики

Тип файла документ

Документы такого типа открываются такими программами, как Microsoft Office Word на компьютерах Windows, Apple Pages на компьютерах Mac, Open Office - бесплатная альтернатива на различных платформах, в том числе Linux. Наиболее простым и современным решением будут Google документы, так как открываются онлайн без скачивания прямо в браузере на любой платформе. Существуют российские качественные аналоги, например от Яндекса.

Будьте внимательны на мобильных устройствах, так как там используются упрощённый функционал даже в официальном приложении от Microsoft, поэтому для просмотра скачивайте PDF-версию. А если нужно редактировать файл, то используйте оригинальный файл.

Файлы такого типа обычно разбиты на страницы, а текст может быть форматированным (жирный, курсив, выбор шрифта, таблицы и т.п.), а также в него можно добавлять изображения. Формат идеально подходит для рефератов, докладов и РПЗ курсовых проектов, которые необходимо распечатать. Кстати перед печатью также сохраняйте файл в PDF, так как принтер может начудить со шрифтами.

Список файлов реферата