11443 (684999), страница 7

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 7)

Кровь для исследований брали в следующей последовательности:

1) перенесли кровь на часовое стекло;

2) приготовили мазок;

3) перенесли кровь в пробирки с консервирующим раствором;

4) перенесли кровь в трансформирующий раствор;

5) подсчитывали эритроциты в камере Горяева;

6) определяли гемоглобин на спектрофотометре;

7) фиксировали и окрашивали мазки крови;

8) определяли гемоглобин на спектрофотометре;

9) подсчитывали косвенным методом количество лейкоцитов;

10) определяли лейкоцитарную формулу [57].

Мазки приготавливали следующим образом: держа предметное стекло за узкие края переносили на него каплю крови. Другой рукой приставляли шлифовальное стекло узким краем к стеклу с кровью справа от капли под углом 45° и продвигали его влево до соприкосновения с кровью. Выжидали пока кровь расплывется по всему ребру шлифовального стекла и затем легким быстрым движением вели его слева направо до тех пор, пока не будет исчерпана вся капля. После приготовлений мазки сушили на воздухе до исчезновения влажного блеска [57].

Фиксировали и окрашивали мазки способом окраски по Паппенгейму. Предметные стекла ставили в киевский аппарат для массовой окраски мазков и заливали красителем-фиксатором Мая-Грюнвальда. Через 3 мин его заменяли рабочим красителем Романовского. Продолжали окрашивание в течение 15 мин, после чего краситель сливали, а мазки промывали водопроводной водой. Потом стекла ставили под углом для высушивания [57].

Определяли следующие показатели крови: концентрацию гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов, общего белка в сыворотке крови, лейкоцитарную формулу, цитометрические характеристики эритроцитов.

Подсчет эритроцитов и лейкоцитов проводился с помощью камеры Горяева. Эритроциты считали в 5 больших квадратах камеры, а лейкоциты будут подсчитаны косвенным методом. Определяемую величину получали по формуле (1).

Х = , (1)

где Х- число клеток в 1 мкл крови; а – количество подсчитанных клеток; y – степень разведения крови; n – количество малых квадратов.

для эритроцитов:

Х_э = = а*12500;

для лейкоцитов:

Х_л = = а*2500 [53].

Для определения гемоглобина использовали гемиглобинцианидный метод на ФЭК с использованием ацетонциангидрина. Расчет содержания гемоглобина будет проводиться по формуле (2):

Hb, г/л = , (2)

где Е_оп – экстинция опытной пробы; Е_ст – экстинция стандартного раствора; С – концентрация гемиглобинцианида в стандартном растворе (59,75 мг%); К – коэффициент разведения крови; 0,01 – коэффициент для пресчета концентрации гемоглобина из мг в г*л ^-1 [53].

Концентрацию белка крови рыб определяют с помощью коэффициента преломления сыворотки на рефрактометре. Коэффициент преломления довольно точно свидетельствует о количественном содержании в сыворотке белка, которое определяется по таблице [53].

Концентрацию общего белка в сыворотке крови (в г*л ^-1) определяют по графику, используя найденный коэффициент преломления [53].

Подсчет лейкоцитарной формулы крови на окрашенных препаратах проводили с использованием светового микроскопа с применением иммерсии (увеличение 90х15, 100х15). На мазках подсчитывали 200 лейкоцитов по общепринятой методике. При идентификации лейкоцитов использовали классификацию клеток крови рыб Н.Т. Ивановой (1983). Подсчет лейкоцитарной формулы проводился по следующим группам лейкоцитов: нейтрофилы, среди которых выделяли: миелоциты нейтрофильные, метамиелоциты нейтрофильные, палочкоядерные нейтрофилы, сегментоядерные нейтрофилы; псевдоэозинофилы, эозинофилы, псевдобазофилы, моноциты; малые и большие лимфоциты.

Окрашенные мазки изучали с помощью системы анализа изображений «ВидеоТест - Морфо», которая представляет собой автоматизированное рабочее место, предназначенное для проведения морфологического, стереологического и морфометрического анализа изображений со статистической обработкой полученных результатов. Мазок устанавливается под микроскоп, соединенный с TV-камерой. Телевизионный сигнал с TV-камеры передавался на плато ввода изображений и для визуализации на монитор видеоконтрольного устройства или видеоокно монитора компьютера. В плате ввода TV-сигнал оцифровывался, и изображение в цифровой форме передалось в ОЗУ компьютера для обработки и анализа. Программа позволила получить измерения различных параметров эритроцитов, провести статистическую обработку результатов, получить графики зависимости параметров [53].

Статистическую обработку полученных результатов выполняли по общепринятым методикам [1, 40, 47] в программе «Microsoft Exel 2003». Для расчета ряда показателей использовались стандартные статистические показатели, такие как: среднее значение - М, ошибка средней - m, среднеквадратическое отклонение - σ и коэффициент вариации - CV. Для подтверждения достоверности различий использовали критерий Стьюдента – St.

3 Характеристика крови линя, выращенного в искусственных условиях УЗВ

3.1 Характеристика крови двухгодовалого линя.

Для оценки физиологического состояния выращенной рыбы использовали концентрационные показатели крови, а также лейкоцитарную формулу, которые характеризуют белковый обмен, дыхательную и защитную функции организма.

Средняя масса исследованных двухгодовалых линей составляла 13 г, средняя длина – 75,4 мм. Результаты исследования морфофизиологических характеристик линя представлена в таблице 3.

Таблица 3 – Морфофизиологическая характеристика двухлетков линя

Показатель	М±m	σ	CV, %
Mасса, г	13,00±2,17	9,24	12,2
Длина, мм	75,40±4,13	4,85	37,3
P порки, г	9,80±1,75	3,91	39,9
Индекс почки, %	8,60±0,76	1,70	19,8
Индекс печени,%	15,50±1,48	3,31	21,4
Индекс селезенки, %	4,00±0,77	1,72	42,8

Масса и длина двухлетков линя, выращенных в условиях УЗВ, не отличались от таковых показателей у линей такого же возраста из естественных условий [6].

Лейкоцитарная формула линя представлена в таблице 4 и на рисунке 4

Таблица 4 - Лейкоцитарная формула линя, %

Рисунок 4 - Лейкоцитарная формула двухгодовалых линей, выращенных в УЗВ

Общее количество нейтрофилов в крови линя составило 3,38%. Среди них преобладали юные нейтрофилы – миелоциты, что свидетельствует об активации нейтрофилопоэза. Обращает на себя внимание высокий процент псевдоэозинофилов (12,0±6,82). Что, вероятно, связано со специфическими условиями в УЗВ.

3.2 Характеристика крови производителей линя, выращенных в условиях УЗВ

Морфофизиологические показатели, исследованных производителей линей представлены в таблице 5 и на рисунке 5.

Таблица 5 – Морфофизиологические показатели производителей линя

Рисунок 5 – Длина и масса производителей линя, выращенных в УЗВ

Применение критерия Стьюдента показало, что между самками и самцами по длине и массе нет достоверных различий.

Гематологическая характеристика производителей линя, выращенных в условиях УЗВ, представлена в таблице 6.

Таблица 6 – Гематологическая характеристика производителей линя, выращенных в УЗВ

различия достоверны при (при р<0,05)

Лейкоцитарный состав крови производителей линя, выращенных в УЗВ, представлен основными группами клеток: агранулоцитами – лимфоцитами (большими и малыми) и моноцитами, и гранулоцитами – нейтрофильными миелоцитами и метамиелоцитами, палочко- и сегментоядерными нейтрофилами, эозинофилами. Общее число нейтрофилов в крови самок и самцов линя составило 7,63±1,23 и 7,38±1,88% соответственно; общее число лимфоцитов - 85,13±2,78 и 85,25±0,83%. Достоверных различий в лейкоцитарной формуле между самками и самцами линя нами не обнаружено, что подтверждает единообразие клеточного состава белой крови внутри вида среди одновозрастных рыб и отражает отсутствие полового диморфизма по этому показателю у линя такого возраста и физиологического состояния. На рисунке 6 представлена лейкоцитарная формула производителей линя.

Характеристики

Список файлов ВКР