diplom (678186), страница 4
Текст из файла (страница 4)
2.2.2.1. Определение концентрации этанола в жидком экстракте листьев лопуха
В круглодонную колбу вместимостью 200 - 250 мл отмеривают точное количество экстракта. При содержании этанола выше 50 % отмеривают 25 мл жидкого экстракта, которые перед отгонкой разбавляют водой до 75 мл.
Для равномерного кипения в колбу с жидкостью помещают капилляры, пемзу или кусочки прокаленного фарфора.
Приемник (мерную колбу вместимостью 50 мл) помещают в сосуд с холодной водой, собирают около 48 мл отгона, доводят его температуру до 20 С и добавляют воды до метки. Отгон должен быть прозрачным или слегка мутным.
Плотность отгона определяют денсиметром или с помощью пикнометра при температуре 20 С и по алкоголиметрической таблице № ГФ XI находят соответствующее содержание этанола в процентах по объему.
Содержание этанола (X) в процентах по объему вычисляют по формуле:
Х = 50 * а / б,
где 50 - объем отгона в мл, а - содержание этанола в процентах по объему, б - объем исследуемого экстракта, взятый для отгона, мл.
2.2.2.2. Определение плотности жидкого экстракта
Чистый сухой пикнометр взвешивают с точностью до 0.0002 г, заполняют с помощью маленькой воронки очищенной водой немного выше метки, закрывают пробкой и выдерживают в течение 20 минут в термостате, в котором поддерживают постоянную температуру воды 20 C с точностью до 0.1 С. При этой температуре уровень воды в пикнометре доводят до метки, быстро отбирая излишек воды при помощи пипетки или свернутой в трубку полоской фильтровальной бумаги. Пикнометр снова закрывают пробкой и выдерживают в термостате еще 10 мин., проверяя положение мениска по отношению к метке. Затем пикнометр вынимают из термостата, фильтровальной бумагой вытирают внутреннюю поверхность горлышка пикнометра, а также весь пикнометр снаружи, оставляют под стеклом аналитических весов в течение 10 мин. и взвешивают с той же точностью.
Пикнометр освобождают от воды, высушивают, споласкивая последовательно этанолом и эфиром (сушить пикнометр путем нагревания не допускается), удаляют остатки эфира продуванием воздуха, заполняют пикнометр испытуемой жидкостью и затем производят те же операции, что и с очищенной водой.
Плотность Р (г / куб. см) вычисляют по формуле :
Р20 = [[(M2 - М) *0.99703] / (M1 - M)] + 0,0012, где
М - масса пустого пикнометра, г;M1 - масса пикнометра с очищенной водой, г; М2 - масса пикнометра с испытуемой жидкостью, г; 0.99703 - значение плотности воды при 20 С и барометрическом давление 1011 гПа (760 мм рт. ст.)
2.2.2.3. Определение сухого остатка.
5 мл жидкого экстракта помещают во взвешенный бюкс, выпаривают на водяной бане и сушат 3 ч. при (102.5 2.5) С, затем охлаждают в эксикаторе 30 мин. и взвешивают.
2.2.2.4. Определение тяжелых металлов
К 1 мл жидкого экстракта или 1 г густого или сухого экстракта прибавляют 1 мл концентрированной серной кислоты, осторожно сжигают и прокаливают. Полученный остаток обрабатывают при нагревании 5 мл насыщенного раствора аммония ацетата. Фильтруют через беззольный фильтр, промывают 5 мл воды и доводят объем фильтрата до 200 мл 10 мл полученного раствора должны выдерживать испытания на тяжелые металлы (не более 0.01 % в препарате).
Результаты анализов по стандартизации жидких экстрактов лопуха войлочного на 25, 40, 70 % этаноле представлены в таблице № 5.
Таблица 5
Стандартизация жидких экстрактов листьев лопуха войлочного, изготовленных на 25 %, 40 % и 70 % этаноле
| Экстрагент | Концентрация этанола, % | Сухой остаток, % | Плотность, г / см | Тяжелые металлы, % |
| 25 % | 22.31 | 10.22 | 0.971 | не более 0.01 |
| 40 % | 36.89 | 11.41 | 0.968 | не более 0.01 |
| 70 % | 64.21 | 12.05 | 0.945 | не более 0.01 |
Вывод: жидкие экстракты на 25, 40, 70 % этаноле удовлетворяют требованиям ГФ XI.
2.3. Исследования противовоспалительных свойств сухих экстрактов листьев и корней, полученных на 25 %, 40 %, 70 % этаноле, сухого водного раствора извлеченног из листьев лопуха войлочного
2.3.1. Характеристика воспалительного процесса
Воспаление является защитно-приспособительной реакцией организма при различных повреждениях. Однако в ряде случаев восстановительные процессы переходят из нормальных в патологические и участвуют в формировании многих заболеваний. Воспалительный процесс - результат взаимодействия флогогенного начала и макроорганизма. Участие последнего зависит прежде всего от его реактивности, которая определяется состоянием регуляторных систем как высших, дистальных - нервной, эндокринной, иммунной, так и местных - физиологически активных веществ, выступающих в очаге воспаления в качестве медиаторов и модуляторов воспаления [Дыгай А.М., Клименко Н.А., 1992]. Большинство авторов в развитии воспаления выделяют следующие классические стадии: 1) повреждение тканей и клеток; 2) выделения медиаторов и реакция микроциркуляторного русла (сосудистая фаза); 3) проявления повышенной проницаемости - экссудации, миграции клеточных элементов (сосудисто-клеточная фаза); 4) пролиферация с последующей репарацией (фаза реконструкции) . При воздействии химического и физического раздражителя вслед за разрушением тканей (первичной альтерацией) происходит экссудация, затем - пролиферация и репарация, тогда как при действии биологических агентов процесс начинается чаще с экссудации, далее наступает расплавление тканей (вторичная альтерация) с последующей пролиферацией и репарацией. Вид воспаления зависит от причины, вызывавшей его, особенностей пораженной ткани, реактивности организма и др. На модели каррагенинового воспаления наблюдается три фазы выделения медиаторов: в первую фазу высвобождается гистамин и серотонин, во вторую - кинины. Простагландины являются посредником поздней фазы воспаления, развивающегося при каррагениновом отеке через 3 часа, максимум концентрации ПГЕ2 - через 12 - 24 часа. Активация этой третьей фазы воспаления зависит от включения в процесс системы комплемента [Чернух А.М., 1979]. Защитные реакции регулируются и нервно - гуморальными механизмами. В результате интеграции каскада реакций возникает комплекс сосудистых и клеточных реакций, характеризующих острое воспаление. При последующей ликвидации патогенетического агента развивается заключительная фаза воспалительного процесса - репарация, которая заканчивается заживлением дефектов ткани и прекращением реакций. Восстановительную (регенерационную) стадию воспаления лучше всего рассмотреть на модели заживления раневого повреждения, причем асептическая рана, в случае заживления первичным натяжением, имеет менее выраженную воспалительную реакцию, чем при заживлении вторичным натяжением [Фенчин К.М., 1979]. Для последнего характерно заживление раны вследствие выполнения дефекта грануляционной тканью, которая развивается в условиях открытого дефекта, она всегда соприкасается со внешней средой, будучи долго не покрытой эпителием, в то время как молодая соединительная ткань при первичном натяжении развивается под струпом или в условиях зашитой раны [Есипова И.К., 1966]. Если организм не способен удалить источник раздражения, то увеличивается выход в очаг воспаления полиморфноядерных лейкоцитов и выделение из них большого количества лизосомальных энзимов, вызывающих деструкцию тканей и развитие неспецифического хронического воспаления [Тринус Ф. П. и др., 1987]. В общем хроническое воспаление отличается тканевым ответом, характерным своей длительностью, развитием моноцитарного инфильтрата и пролиферацией соединительной ткани. Различают первичное хроническое воспаление и вторичное. Если повреждающий агент, вызывающий воспаление продолжает находиться в тканях, то развивается гранулема (гранулематозное воспаление). Развитие гранулемы является фазным: а) вокруг возбудителя образуется инфильтрат юных мононуклеарных фагоцитов; б) далее происходит созревание и скопление (агрегация) этих клеток с образованием зрелой гранулемы; в) дальнейшее созревание с формированием эпителиоидной гранулемы [Чернух А.М., 1979]. Развитие гранулемы происходит путем экссудации и пролиферации. Уже к 7 дням (а иногда и раньше) организуется зрелая гранулема (типа чужеродного тела). Существенное значение в патогенезе хронического воспаления принадлежит взаимодействию макрофагов и компонентов комплемента. На ранних этапах формирования гранулемы ведущая роль отводится метаболизму сульфатированных гликозаминогликанов.
Таким образом, воспаление - сложный многоступенчатый процесс, представляющий собой динамический каскад биологических причинно - следственных явлений, проходящих в своем развитии через ряд стадий и фаз. Фармакодинамику противовоспалительных средств необходимо исследовать с учетом фазности воспалительных изменений и значения тех или иных процессов в развитии этих фаз [Тринус Ф.П. и др., 1987].
2.3.2 Материалы и методы исследования
Для исследования были использованы сухие экстракты и сухие водные извлечения, полученные ранее другими дипломниками.
Опыты проводили на белых неинбредных мышах массой 20 - 25 гр. и крысах линии Wistar массой 250 - 300 гр., полученных из коллекционного фонда НИЛ экспериментального биомедицинского моделирования ТНЦ СО РАМН (сертификат имеется).
Острое асептическое воспаление вызывали введением под плантарный апоневроз левой задней лапки 1 % раствор каррагенина в объеме 0.05 мл мышам и 0.1 крысам . Величину отека определяли по разности масс воспаленной и невоспаленной лап животного, процент прироста рассчитывали по формуле:
масса больной __ масса здоровой
конечности конечности
_____________________________________ х 100%
масса здоровой конечности
Репаративная способность препаратов изучена на модели заживления кожного повреждения [Фенчин К.М., 1979]. На депилированном участке кожи спины у мышей под легким эфирным наркозом вырезали лоскут кожи размером 10 x 10 мм. Для моделирования более длительного заживления струп регулярно (через сутки) снимали. О ходе заживления судили по среднему диаметру раны и срокам полной грануляции и эпителизации раневого дефекта. Укорочение срока заживления ран расчитывали в процентах по формуле:
время полного заживления __ время полного заживления
ран в контроле ран в опыте
__________________________________________________________ х 100%
время полного заживления ран в контроле
Пролиферативное хроническое воспаление исследовали на модели "ватной" гранулемы. Стерильный ватный тампон (13 мг) имплантировали с помощью иглы (А1 -20 х 40 - 1 17 И25) крысам под кожу спины между лопатками. Исследуемые препараты вводились ежедневно со дня трансплантации в течение 7 дней. На 8 сутки животных забивали, гранулема вычленялась, взвешивалась в сыром и затем высушенном виде.
Умерщвление животных производили методом дислокации цервикального отдела позвоночника. Результаты исследований обрабатывались методом непараметрической статистики Вилкоксона - Манна - Уитни.
2.3.3 Результаты исследования
Изучение противовоспалительных и ранозаживляющих свойств растительных средств из лопуха войлочного проводили в условиях экспериментальных моделей патологических состояний у мышей и крыс. В работе воспроизводили острое асептическое воспаление (каррагениновое), хроническое пролиферативное ("ватная" гранулема) и регенерация кожного повреждения.
В первой серии экспериментов регенеративную активность препаратов исследовали на модели кожного "лоскута" у мышей. Для моделирования длительного заживления струпы периодически снимали. В связи с этим раны заживляли вторичным натяжением, для которого характерно развитие грануляционной ткани [Фенчин К.М., 1979]. Беспородные мыши - самки, используемые в эксперименте, получали сухой экстракт корней 70, сухой экстракт корней 40, сухой экстракт корней 25, сухой экстракт листьев 70, сухой экстракт листьев 40, сухой экстракт листьев 25. Для сопоставления фармакологической активности все препараты вводились в одной дозе - 50 мг / кг в лечебном режиме: через час после нанесения кожного повреждения, затем ежедневно однократно до момента заживления. Растительные средства вводились внутрижелудочно (per os). Измерение раны проводили сразу же после снятия струпа, длительность наблюдения - 20 дней. У контрольных животных, которым вводилась дистиллированная вода, полное заживление ран наблюдали на 20 сутки (табл. 6, прилож.). Существенную активацию регенерации вызвал сухой экстракт листьев 25 - уже с 5 дня раны в 1.2 раза были меньше контрольных, а на 15 сутки - полное заживление у всех животных, т.е. на 28.6 % сокращались сроки регенерации. Аналогично и сухой экстракт корней 25 на 5 и 8 день достоверно снижал средний диаметр раны в 1.2 и 1.4 раза соответственно, но судя по срокам заживления процент ускорения репарации составил 9.6 % , как и в остальных исследуемых группах (кроме сухого экстракта листьев 70).
Во второй серии экспериментов было изучено влияние растительных препаратов на хроническое воспаление, для воспроизведения которого использовали модель "ватной" гранулемы. Исследуемые извлечения вводились в меньшей дозе (25 мг / кг), с учетом коэффициента пересчета дозировки с мышей на крыс. Фитопрепараты и препарат сравнения - индометацин получали крысы -самки линии Wistar в лечебном режиме в течение 7 дней. Индометацин в исследуемой дозе обладал более выраженной антиэкссудативной активностью (37 % торможения), но не оказывал достоверного влияния на развитие грануляционной ткани (табл. 7, прилож.). Сухой экстракт корней 70 вызывал уменьшение массы сухого компонента на 21 % и на 26 % снижал содержание экссудата. Остальные извлечения из лопуха войлочного не оказали статистически значимого противовоспалительного эффекта на этой экспериментальной модели, хотя тенденция обнаружена у сухого экстракта корней 40 и сухого экстракта листьев 25.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
