Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 3)

На рисунке 3 представлен спектр зонда Фура -2 AM. При связывании с кальцием происходит характерное изменение спектра возбуждения этого красителя: при возбуждении светом с длиной волны 390 нм происходит уменьшение флуоресценции, а при возбуждении светом, с длиной волны 340 нм - увеличение. Однако, 340 нм является уже ультрафиолетовым светом, и для ее использования необходим микроскоп с кварцевыми линзами. Поскольку в нашем случае был использован обычный микроскоп, то вторая волна была выбрана длиной 390 нм. 360 нм - это изобестическая точка зонда Фура -2, т.е. флуоресцентный сигнал при возбуждении светом этой длины волны не зависит от концентрации Ca²⁺ и есть функция лишь концентрации зонда.

Измерение флуоресценции при возбуждении двумя длинами волн позволяет легко рассчитать [Ca²⁺]_i в клетке по формуле (24):

[Ca²⁺]_i= K_d * b * (R - R_min)/(R_max-R)

где К_d - константа диссоциации комплекса Фура -2 с кальцием, R=F₃₆₀/F₃₉₀ - текущее отношение флуоресцентных сигналов, R_min = F₃₆₀/F₃₉₀|Ca0 - то же отношение в растворе с низкой концентрацией Ca²⁺, R_max = F₃₆₀/F₃₉₀|Ca_¥ - то же отношение в растворе с высокой концентрацией Ca²⁺, b = F₃₉₀|Ca0/F₃₉₀|Ca_¥ - отношение флуоресцентных сигналов в низкой и высокой концентрации Ca²⁺ при возбуждении длиной волны 390 нм. Параметры R_min, R_max и b определяли экспериментально. Для этого были приготовлены базовый раствор (в ммоль/л) : KCl - 100, Tris-Cl - 10 (pH=7.2), Фура -2 - 0.005; раствор с низкой концентрацией Ca²⁺ готовился без добавления Ca²⁺ с добавкой EGTA - 10; раствор с высокой концентрацией Ca²⁺ - с добавкой CaСl₂ - 10. Отношение величин флуоресценции определялось в каплях приведенных выше растворов, помещенных на дно экспериментальной камеры. В результате для нашей системы R_min= 0.33, R_max= 8.9 и b=12.8. Параметр К_d был взял из работы [Grinkiewicz et al, 1985] и равнялся 224 нмоль/л.

3.3Окраска срезов флуоресцентным красителем

Для введения кальций - чувствительного зонда в клетку, срезы инкубировались в растворе Тироде, содержащим эстерифицированную незаряженную форму красителя Фура-2 ацетоксиметилэстер в концентрации 5 мкмоль/л, растворенную в диметилсульфоксиде с добавлением детергента Плуроник F-127 (0.02%). В такой форме краситель проникает в клетку, затем эндогенными эстеразами эфирные группы отщепляются, зонд становится заряженным и покинуть клетку не может. Окраска производилась 20 минут при температуре 35^оС. Концентрация зонда в клетке определялась путем титрования окрашенных клеток раствором красителя, который добавлялся во внеклеточный раствор. Оцененная таким способом концентрация зонда в клетке была в диапазоне 30 - 70 мкмоль/л.

3.4Структура экспериментальной установки для двух-волнового измерения концентрации кальция

Принципиальная схема установки представлена на рисунке 4. Основными элементами ее являются: источник света, система смены фильтров, микроскоп, ФЭУ, модуль предварительной обработки сигнала и компьютер.

Источником возбуждающего света служит ртутная лампа мощностью 50 ватт. Поскольку в качестве кальций - чувствительного зонда использовали индикатор Фура -2 АМ, являющийся по возбуждению двухволновым (см. выше), то для количественного определения [Ca²⁺]_i необходимо было одновременно индуцировать флуоресценцию обеими длинами волн. В нашей конфигурации периодическая смена фильтров возбуждения была реализована при помощи вращения колеса с вмонтированными в него двумя интерференционными фильтрами 360 и 390 нм. Частота вращения была 5 Гц. Управление системой смены фильтров осуществлялось при помощи кальций - измерительного модуля фирмы Luigs und Neumann, Германия. Этот же модуль являлся интерфейсом предварительной обработки.

Оптическая часть установки была смонтирована на базе микроскопа Axioskop, Zeiss. Разделение потоков возбуждающего света и флуоресценции производилось при помощи дихроического зеркала. Свет, прошедший через фильтр для возбуждения флуоресценции, отклонялся дихроическим зеркалом и при помощи высокоаппертурного иммерсионного объектива (40*, апертура 0.75) фокусировался на объекте. Флуоресцентный свет проходил через соответствующий интерференционный фильтр и подавался на фотоэлектронный умножитель (ФЭУ). Для уменьшения уровня шумов фиксированная диафрагма (1 мм) была расположена перед ФЭУ. В результате флуоресцентный сигнал собирался с фокальной плоскости диаметром 50 мкм, что позволило значительно улучшить соотношение сигнал/шум.

Модуль предварительной обработки позволял производить компенсацию автофлуоресценции и, при необходимости, усиливать сигнал, после чего он оцифровывался при помощи цифрового интерфейса TIDA и обрабатывался компьютером при помощи программ Tida 5.0 и Wintida, разработанных в Гейдельберге, Германия.

Рисунок 4. Принципиальная схема экспериментальной установки для двухволнового измерения кальция.

3.5Растворы и смена растворов

При работе со срезами все растворы готовились на основе раствора Тироде (в ммоль/л): NaCl - 125, KCl - 5.4, MgCl₂ - 1, CaCl₂ - 2.5, NaHCO₃ - 26, KH₂PO₄ - 1.6, глюкоза - 10, постоянно аэрировавшийся газовой смесью 95% О₂ + 5% СО₂ (pH=7.4). Бескальциевый раствор готовился эквимолярной заменой CaCl₂ на MgCl₂ и добавкой 1 ммоль/л EGTA, растворы с повышенным содержанием калия или кофеина - заменой NaCl на соответствующее количество KСl или кофеина.

Смена растворов производилась протоком, скорость которого можно было варьировать от 10 до 20 мл/мин. Объем экспериментальной камеры составлял 0.5 мл. Все эксперименты были проведены при температуре (32 С).

4.РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Аппликация АТФ в большинстве нейронов моторной коры (98 из 102) вызывает быстрое и кратковременное повышение концентрации цитозольного кальция [Ca²⁺]_i . Концентрация [Ca²⁺]_i достигает своего максимума на протяжении 6-8 секунд и затем восстанавливается до базального уровня при продолжающемся присутствии АТФ. Отмывание АТФ приводит к восстановлению [Ca²⁺]_i до уровня покоя. Характерный вид АТФ - индуцированного кальциевого транзиента представлен на рисунке 5.

Амплитуда АТФ - индуцированного кальциевого транзиента варьировалась в пределах от 50 до 450 нМ. Среднее значение выброса [Ca²⁺]_i вызванного приложением АТФ в концентрации 100 мкМ находилось в пределах 200-250 нМ.

Наблюдалась доза - зависимость амплитуды ответа от концентрации АТФ в пределах от 10 до 2000 мкМ. На рисунке 7 представлена апроксимация экспериментальных точек сигма - функцией. Концентрация АТФ, при которой амплитуда ответа составляет половину максимальной, - 220 ± 20 мкМ.

Целью наших исследований было определение подтипов пуринорецепторов вовлеченных в генерацию [Ca²⁺]_i транзиента. Известно, что АТФ активирует несколько типов пуринорецепторов, а именно Р₂ пуринорецепторы подтипов Р_2х и Р_2у (Peter Illes et al, 1993, Burnstock and Kennedy 1985), а также Са²⁺ каналы плазмалеммы (Кришталь, 1983).

С целью обеспечения достоверности полученных данных, принимая во внимание тот факт, что работа проводилась на тонких срезах мозга, мы провели серию экспериментов с подавлением распостранения потенциалов действия с помощью тетродотоксина (TTX). При использовании TTX выяснилось, что амплитуда и форма [Ca²⁺]_i транзиентов не изменяется или изменяется незначительно. Полученные результаты позволяют нам предполагать, что получаемые нами данные отображают процессы происходящие в отдельной наблюдаемой клетке. К сожалению мы не имели возможности проводить все эксперименты c тетродотоксином из-за дороговизны препарата. Для изучения характеристик рассматриваемых пуринорецепторов, принимающих участие в генерации [Ca²⁺]_i транзиента, применялись следующие протоколы экспериментов.

1. Приложение АТФ в растворе не содержащем Ca²⁺. Удаление кальция из внеклеточного раствора незначительно влияло на кальциевый транзиент, вызванный аппликацией 10 мкМ АТФ, но в тоже время подавляло на 45% ± 7% кальциевый транзиент вызванный 100 мкМ АТФ. (Рис. 8).

1. 
   

2. Для исследования способности внутриклеточного Ca²⁺ депо к перезаполнению мы последовательно апплицировали АТФ несколько раз с интервалом в 60 секунд в обычном растворе и в растворе не содержащем Ca²⁺ . Как видно из рисунка 9 вторая аппликация АТФ вызывала Ca²⁺ транзиент меньшей (на 30%  4%) амплитуды по сравнению с первой (контрольной) аппликацией. Последующие аппликации АТФ разделенные 60 ти секундным интервалом не вызывали заметного уменьшения амплитуды [Ca²⁺]_i транзинета по сравнению со второй аппликацией в стандартном растворе

В бескальциевом растворе - наоборот, вторая аппликация АТФ вызывала значительное уменьшение Ca²⁺ транзиента на 40%  5% от контроля. Последующие аппликации АТФ в бескальциевом растворе приводили к последовательному уменьшению амплитуды [Ca²⁺]_i транзиента и после двух - трех последовательных аппликаций сигнал исчезал вообще (рисунок 10). Такое уменьшение вероятно обусловлено истощением внутриклеточных депо.

1. Ингибирование захвата Ca²⁺ эндоплазматическим ретикулом тапсигаргином (спецефическим блокатором Ca²⁺ насоса эндоплазматического ретикулума) уменьшало [Ca²⁺]_i транзиенты, вызванные приложением АТФ, на 63%  5% для концентрации АТФ 100 мкМ АТФ (рис. 11). Как видно из рисунка 11 приложение тапсигаргина не влияло на базальный уровень Ca²⁺ в клетке.

1. Приложение кадмия в концентрации 50 мкМ, верапамила в концентрации 100 мкМ и 50 мкМ никеля обратимо уменьшало амплитуду [Ca²⁺]_i транзиента вызванного приложением 100 мкМ АТФ на 35%, 20%, и 15% сответственно. Данные представлены на рисунке 12.

1. 
   

2. Приложение различных агонистов пуринорецепторов вызывало различные по амплитуде ответы. Порядок относительной активности лигандов для данного объекта был следующим ATPS  ATФ = AДФ  ,-methylene ATP  AMФ  УТФ аденозин (ADO), данные преставлены на рисунке 13.

1. 
   

2. Сурамин, известный антагонист Р₂ типа пуринорецепторов, уменьшал [Ca²⁺]_i транзиенты, вызванные приложением 100 мкМ АТФ на 76%  7% и также не изменял концентрацию [Ca²⁺]_i в покое. Данные представлены на рисунке 14.

5.ОБСУЖДЕНИЕ

При исследовании средних слоев неокортекса крыс мы обнаружили их способность отвечать на приложение АТФ. Таким образом мы можем сделать вывод о наличии в данном объекте пуринорецепторов. Ответ на АТФ является доза - зависимым с амплитудой половинного ответа в 220 нМ. Последовательные приложения АТФ, после второго приложения, не вызывали уменьшения амплитуды [Ca²⁺]_in транзиентов. Из этого можно сделать вывод об отсутствии десенситизации данного типа рецепторов.

Исследуя источники повышения цитозольного кальция мы обнаружили, что АТФ активирует как ионотропные так и метаботропные рецепторы. Блокаторы потенциал - управляемых кальциевых каналов такие как кадмий, никель и верапамил уменьшали АТФ - индуцированные кальциевые транзиенты на 35% - 15%, что говорит об опосредованном АТФ активировании потенциал - управляемых каналов.

Для исследования активацию метаботропных рецепторов. Для этого мы прилагали АТФ в бескальциевом растворе, - амплитуда ответа при этом уменьшалась на 45%  7%. Этот результат говорит о том, что внутриклеточные депо принимают участие в генерации [Ca²⁺]_in ответов, причем их вклад близок к половине. При повторных аппликациях АТФ в бескальциевом растворе Ca²⁺ ответ исчезал полностью после второй аппликации, т.е. внутриклеточные депо полностью истощаются. Исследуя путь высвобождения внутриклеточного кальция мы апплицировали тапсигаргин - спецефический блокатор АТФ - азы эндоплазматического ретикулума. [Ca²⁺]_in транзиенты уменьшались на 63%  5% в присутствии тапсигаргина. Аппликация коффеина, агониста рианодиновых рецепторов, в клетках моторной коры 14 дневных крыс не вызывали повышения уровня [Ca²⁺]_in . Следовательно выброс [Ca²⁺]_in из внутриклеточного депо происходит по IP₃ - чувствительному механизму.

В дальнейшем мы исследовали более подробно типы присутствующих пуринорецепторов. Построив ряд активности агонистов для Р₁ и Р₂ пуринорецепторов по амплитудам ответов, мы сделали заключение базирующееся на отсутствии ответа на аденозин, что в нашем объекте присутствуют только Р₂ пуринорецепторы. Проводя дальнейшую субклассификацию Р₂ типа рецепторов мы использовали сурамин - блокатор некоторых типов Р_2х и Р_2у рецепторов. Приложение сурамина уменьшало амплитуду [Ca²⁺]_i транзинета вызванного приложением 100 мкМ АТФ на 76%  5%, что говорит о наличии этих типов рецепторов в исследуемом объекте.

6.ВЫВОДЫ

1. Приложение АТФ в различных концентрациях вызывает Ca²⁺ транзиенты в клетках моторной коры крыс.

2. Ответ на АТФ является доза - зависимым с амплитудой половинного ответа в 220 нМ.

3. АТФ активирует как ионотропный так и метаботропные пути повышения внутриклеточного кальция.

4. В генерации АТФ индуцированного повышения [Ca²⁺]_in принимают участие некоторые типы потенциал - управляемых кальциевых каналов.

5. Высвобождение внутриклеточного кальция происходит из IP₃ чувствительных депо.

6. В данном объекте присутсвуют только Р₂ подтипы пуринорецепторов.

7. Сурамин - антагонист Р2Х₂ и Р2Х₅ и Р2У рецепторов уменьшает амплитуду [Ca²⁺]_in транзиенты, что говорит присутствии некоторых из вышеперечисленных рецепторов.

7.СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. A.Shmigol, A.Verkhratsky & G. Isenberg (1995): Calcium-induced calcium release in rat sensory neurones. Journal of Physiology (London), 489.3 627-636.

2. A.Shmigol, G. Isenberg, P.Kostyuk & A. Verkhratsky (1994): Calcium-induced Ca²⁺ release from internal stores in rat dorsal root ganglion neurones. In: European Journal of Neuroscience, Suppl. 7, Proceedings of the 16th Annual ENA Meeting, p. 146.

3. A.Shmigol, N.Svichar, P.Kostyuk & A.Verkharatsky. (1995): “Incremental” caffeine-induced calcium release in mouse sensory neurones. European Joutnal of Neuroscience, Supple № 8. p111. Proceedings of the 16th Annual ENA Meeting.

4. A.Shmigol, Yu.Usachev, N.Pronchuk, S.Kirischuk, P.Kostyuk & A.Verkhratsky (1994): Properties of the caffeine sensitive intracellular calcium stores in mammalian neurons. Neurophysiology /Neirophiziologia, v. 26 No. 2, p. 16 - 25.

5. A.Verkhratsky, A. Shmigol, S. Kirischuk, N. Pronchuk & P. Kostyuk (1994): Age-dependent changes in calcium currents and calcium homeostasis in mammalian neurons. Annals of the New York Academy of Sciences, v. 747, p365 - 381.

6. Abbracchio, M. P., Burnstock, G. (1994) Purinoceptors: are there families of P_2x and P _2y purinoceptors? Pharmac. Ther. 64: 445-475

7. Anatoly Smigol, Platon Kostyuk, Alexey Verhratsky (1994) Role of caffeine-sensitive Ca²⁺ stores in Ca²⁺ signal termination in adult DRG neurones // NeuroReport v.5, 2073-2076.

8. Anatoly Smigol, Sergey Kirischuk, Platon Kostyuk, Alexey Verhratsky (1994) Different properties of caffeine-sensitive Ca²⁺ stores in peripherial and central mammalian neurones // Pflugers Arch v.426, 174-176.

9. Baker P. F., Blaustein M.P., Hodgkin A.L. and Steinhardt R. A. (1969) The influence of calcium on sodium efflux in squid axons. J. Physiol., Lond. 200, 431‑458.

10. Bean B.P. (1992) Pharmacology and electrophysiology of ATP‑activated ion channels. Trends Pharmacol. Sci. 13, 87 ‑ 90.

11. Belan P., Kostyuk P., Snitsarev V. and Tepikin A. (1993) Calcium clamp in isolated neurones of the snail Helix pomatia. J. Physiol., Lond. 462, 47 ‑ 58.

12. Bronner, F. (1990). Intracellular Ca²⁺ regulation.. New York: Wiley‑Liss.

13. Burk S. E., Lytton J. , MacLennan D. H. and Shull G. E. (1989). cDNA cloning, functional expressing, and mRNA tissue distribution of a third organellar Ca²⁺ pump. J. Biol. Chem. 164, 18561‑18568.

1. Burnstock, G. (1972) Purinergic nerves. Pharmacol. Rev. 24: 509-581

1. Burnstock, G. (1978) A basis for distinguishing two types of purinergic receptor. in: book

1. Burnstock, G. (1990) Co-transmission. Arch. Int. Pharmacodyn. 304: 7-33

1. Burnstock, G., Kennedy, C.(1985) Is there a basis for distinguishing two types of P₂ purinoceptor? Gen.Pharmacol. 16: 433-440

2. Carafoli E. (1992) Calcium pump of the plasma membrane. Physiol. Rev. 71, 129 ‑ 153.

3. Chen, C.-C., Akopian, A.N. et al, (1995) A P_2x purinoceptors expressed by a sybset of sensory neurones. Nature 377: 428 - 431

4. Кришталь О.А., Марченко С.М. (1983). Рецепторы АТФ в сенсорных нейронах млекопитающих. Докл. Акад. Наук УССР.

5. Gianini G., Clementi E., Ceci R., Marziali G., and Sorremtino V. (1992) Expression of a ryanodine receptor Ca²⁺ that is regulated by TGF‑b, Science, 257, 91 ‑ 94.

6. Ginetta Collo et al, (1996) Cloning of P2X₅ andP2X₆ receptors and the distribution and properties of an extended family of ATP-gated ion channels. The J. of Neurosci. 16(8): 2495-2507

7. Gordon, J. L. (1986) Extracellular ATP: effects, sources and fate. Biochem.J. 233: 309-319

8. Grynkiewicz, G., Poenie, M., and Tsien, R.Y. A new generation of Ca²⁺ indicators with greatly improved fluorescent properties. J. Biol. Chem., 260, 3440-3450, 1985.

9. Heizmann C.W. and Hunziker W. (1991) Intracellular calcium‑binding proteins: more sights than insights. Trends Biochem. Sci. 16, 98 ‑ 103.

10. Heschler J. and Schultz G. (1993) G‑proteins involved in the calcium channel signalling system. Curr. Opin. Neurobiol. 3, 360‑367.

11. Hiderman, R. H., Martin, M., Zimmerman, J. K., Pivorun, E. B. (1991) Identification of a unique membrane receptor for adenosin 5,5- P₁,P₄-tetraphosphate. J. Biol. Chem. 266: 6915-6918

12. Hoyle, C. H. V. (1990) Pharmacological activity of adenine dinucleotides in the periphery: possible receptor classes and transmitter function. Gen. Pharmacol. 21: 827-831

13. Hymel L., Inui M., Fleischer S. and Schindler H. (1988). Purified ryanodine receptor of skeletal muscle sarcoplasmic reticulum forms Ca²⁺‑activated oligomeric Ca²⁺ channels in planar bilayers. Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A. 85, 441‑445.

14. Kirischuk S.I., Voitenko N.V., Kettenmann H.O. and Verkhratsky A.N. (1994) Mechanisms of cytoplasmic calcium signalling in cerebellar Bergman glial cells // Neurophysiology v.26, 417-419.

15. Kirischuk, V.Matiash, A.Kulik, N.Voitenko, P.Kostyuk, A.Verkhratsky (1996) Activation of P₂-purino, ₁-adreno and H₁-histamine receptors triggers cytoplasmic calcium signalling in cerebellar Pupkinje neurons // Neuroscience v.73, 643-647

16. Kostyuk and A. Verhratsky (1994) Calcium stores in neurones and glia //Neuroscience v. 63, N.2, 381-404.

17. Kostyuk P. G. (1992). Calcium ions in nerve cell function. Oxford, New York, Tokyo: Oxford University Press.

18. Kuno M., Maeda N. and Mikoshiba K. (1994) IP₃‑activated Ca²⁺‑permeable channels in the incide‑out patches of cultured cerebellar Purkinje cells. Biochem. Biophys. Res. Comm. 199, 1128 ‑ 1135.

19. Lуckhoff A. and Clapham D.E. (1992) Inositol 1,3,4,5‑tetrakisphosphate activates an endothelial Ca²⁺‑permeable channel. Nature 355, 356‑358.

20. Londos, C., Cooper, D. M. F., Wolff, J. (1980) Subclasses of external adenosine receptors. Proc. Natl. Acad. Sci. 77: 2551-2554

21. Lytton J., Westlin M. and Hanley M. R. (1991). Thapsigargin inhibits the sarcoplasmic or endoplasmic reticulum Ca‑ATPase family of calcium pums. Biol. Chem. 266, 17067‑17071.

22. Mackgrill J. J. and Lai F. A. (1994). Solubilization of the type 3 ryanodine receptor from rabbit brain. Biophys. J. 66, A147

23. McPherson P. S., Kim Y. K., Valdivia H., Knudson C. M., Takekura H., Franzini‑Armstrong C., Coronado R. and Campbell K. P. (1991). The brain ryanodine receptor: A caffeine‑sensitive calcium release channel. Neuron 7, 17‑25.

24. N.Voitenko, S.Kirischuk, A.Kulik, A.Verkhratsky (1995) Calcium signalling in granule neurones of the mouse cerebellar slices // Pflugers Archiv European Journal of Physiology, v.430, Supplement 4, R124.

25. Nicholls D.G. (1985) A role for the mitochondria in the protection of the cell against calcium overload. Prog. Brain Res. 63, 97‑106.

26. Pintor, J., Diaz-Rey, M. A., Torres, M., Miras-Portugal, M. T. (1992) Presence of diadenosine polyphosphates-A_p4A and A_p5A-in rat brain synaptic terminals. Ca²⁺-dependent release evoked by 4-aminopyridine and veratridine. Neurosci. Lett. 136: 141-144

27. Ribeiro, J. A., Sebastiao, A. M. (1986) Adenosine receptors and calcium: basis for proposing a third (A₃) adenosine receptor. Prog. Neyrobiol. 26: 179-209

28. Rios E. and Pizarro C. (1991) Voltage‑sensor of excitation‑contraction coupling in skeletal muscle. Physiol. Rev. 76, 849 ‑ 908

29. Ross C. A., Danoff S. K., Schell M. J., Snyder S. H. and Ullrich A. (1992). Three additional inositol 1,4,5‑trisphosphate receptors: Molecular cloning and differential localization in brain and peripheral tissues. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89, 4265‑4269.

30. S.Kirischuk, N.Voitenko, P.Kostyuk, A.Verkhratsky (1995) Calcium signalling in granule neurones studied in cerebellar slices // Cell Calcium v.18, 464-476

31. S.Kirischuk, N.Voitenko, P.Kostyuk, A.Verkhratsky (1996) Age-associated Changes of Citoplasmic Calcium Homeostasis in Cerebellar Granule Neurones in situ: Investigation on Thin Cerebellar Slices. // Experimental Gerontology

32. S.Kirischuk, N.Voitenko, T.Moller, H.Kettenmann and A.Verkhratsky (1995) ATP-induced cytoplasmic calcium mobilization in bergman glial cells // J. Neuroscience v.15, 8234-8248.

33. Scheggerburger R., Zhou Z., Konnerth A. and Neher E. (1993). Fractional contribution of calcium to the cation current through glutamate receptor channels. Neuron 11, 133‑143.

34. Sergej Kirischuk and Alexej Verkhratsky (1996) [Ca²⁺]_i recordings from neural cells in acutely isolated cerebellar slices employing differential loading of the membrane-permeant form of the calcium indicator fura-2 // Pflugers Arch. -Eur. J. Physiology v.431, 977-983

35. Sergej Kirischuk, Nana Voitenko, Platon Kostyuk, Alexej Verkhratsky (1996) Calcium signalling in granule neurones studied in cerebellar slices // Cell Calcium v.19, 59-71

36. Shmigol A., Kirischuk S., Kostyuk P. and Verkhratsky A. (1994). Different properties of caffeine‑sensitive Ca²⁺ stores in peripheral and central mammalian neurones. Pflьgers Arch. 426, 174‑176.

37. Shmigol, D.Eisner & A.Verkhratsky (1995): Cyclic ADP ribose enhances Ca²⁺-induced Ca²⁺ release in mouse sensory neurones. Journal of Physiology, London, v. 483P, p63P.

38. Shmigol, N. Svichar, P. Kostyuk & A. Verkhratsky (1996) Gradual caffeine-induced Ca²⁺ release in mice DRG neurones is controlled by cytoplasmic and intraluminal Ca²⁺. Neuroscience, 73 N 4, 1061-1067

39. Shmigol, P. Kostyuk & A. Verkhratsky (1995): Thapsigargin blocks plasmalemmal voltage-operated calcium channels in mouse DRG neurones. Journal of Physiology, London, v. 483P, p64P.

40. Soltoff, S. P., McMillian, M.K., Talamo, B.R., Cantley, L. C.(1993) Blockade of ATP binding site of P₂ purinoceptors in rat parotid acinar cells by isothiocyanate compounds. Biochem. Pharmacol. 45: 1936-1940

41. Tatsumi H. and Katayama Y. (1993) Regulation of intracellular free calcium concentration in acutely dissociated neurones from rat nucleus basalis.J.Physiol., Lond.464,165‑181.

42. Tepikin A. V., Kostyuk P. G., Snitsarev V. A. and Belan P. V. (1992a). Extrusion of calcium from a single isolated neuron of the snail Helix pomatia. J. Membrane Biol. 123, 43‑37.

43. Thayer S.A. and Miller R.J. (1990) Regulation of the intracellular free calcium concentration in single rat dorsal root ganglion neurones in vitro. J.Physiol. (London), 425, 85 ‑ 115.

44. Ursula Windscheif, (1996) Purinoceptors: from history to recent progress. Review. J. Pharm. Pharmacol. 48: 993-1011

45. Van Calker, D., Muller, M., Hamprecht, B. (1979) Adenosine regulates via two different types of receptors, the accumulation of cyclic AMP in cultured brain cells. J. Neurochem. 33: 999-1005

46. Verkhratsky & A.Shmigol (1996) Calcium-induced calcium release in neurones. Cell Calcium, v.19, No 1, 1-14.

47. Voitenko N., Kirischuk S., Verkhratsky A. (1995) Mechanisms of cytoplasmic calcium signalling in cerebellar granule neurones in situ. // Експериментальна та клінічна фізіологія, збірник наукових праць до 100-річчя кафедри фізіології Львівського медичного університету, р.357.

48. Zhou Z. and Neher E. (1993). Calcium permeability of nicotininc acetylcholine receptor channels in bovine adrenal chromaffine cells. Pflugers Arch. 425, 511‑517.

49. Zhou Z. and Neher E. (1993). Mobile and immobile calcium buffers in bovine adrenal chromaffin cells. J.Physiol., Lond. 469, 245‑273.

4

Характеристики

Список файлов реферата