Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 178
Текст из файла (страница 178)
ЪСтеаг арргорпасе 81очеа апс( ааЕесу 81аьея сне ш а сЬеписа! Еитпе Ьоой В)аасгу1апит(е В а росепс пеигосохгп апс1 ь аЬаогЬес( сЬгои8Ь йе аЫп (йе еЕЕесса аге ситпи1ас!не). АчоЫ ЬгеасЬтп8 сЬе с)иас. ЪЪтеаг арргорпасе 8!очес апс! а Еасе исаа)с счЬеп сне!8Ь!п8 роснс[егес[ асгу1агпЫе апт) тпесЬу!еле-Ььасгу1апис1е. В1оотЕ (Ьиспап) апсЕ Ыоос) ргос(исса апсЕ Враге(п-Вагг ч!пь.
Ншпап Ь)оой Ыоос1 ргос[исся апс[ Ия гиен тау сопсагп осси1с гпЕессюих спасет!а1а аисЬ аг Ьера6сь В сАгсь апс) Н1Ът сЬас тау геаи1с !и 1аЬ- огасогу-аст!Ытес! гпЕес6опя 1пчеас!8асогх иогЫп8 сн!сЬ ЕВЪт-сгапаЕоппес) 1углрЬоЫаас се11 1тпеа аге а1ао ас па[с оЕ ЕВЪт гпЕесбоп. Апу Ьшпап Ыоой Ыоос( ргос!исся ог с!пиеа аЬои16 Ье сопяйегес[ а ЬюЬагагс) алс) Ье Ьавт(!ет! ассогйп8!у.
ЪСтеаг йароааЫе арргорпасе 81очея сье тпесЬапка! р!ресс!п8 т)еч!сея нног)с тп а Ь!о!о8!са! ааЕесу саЬспес, ргосесс а8аспя аегою! 8епегабоп, авс! йяпЕесс а1! счаасе псасет!а1г ЬеЕоге с!!ароса!, Аисос!аче сопсапипасес1 р!асс!снчаге ЬеЕоге йароааЬ асиос1аче сопсалипасес1!!с)и!<Ь ог сгеас нн!сЬ ЫеасЬ (П)98 [нЕч) 6па1 сопсепсга6оп) Еог ас 1еаас ЗО пс!писеа ЬеЕоге 6!ароаа!. Сипаи!с сЬе 1оса! Ьь6ссиюпа1 ааЕесу оЕ6сег Еог аресгбс Ьапс(1!п8 алс( 6!ароса! ргоседигея Вопс ас1й, Н ВО, тау Ье Ьатгпбг! Ьу шЬа1а6оп, !п8еас!оп, ог г)с!и аЬютрсюп.
ЪСтеат арргорпасе 81очеа апт! 8о881ег. 5-Вгопсо-4-сЫого-3-исйо1у1-!)-сс-Ва!ассоругапоа(йе (ВС1Сс Х-ца1) ь сохк со сЬе еуеа апс1 аЫп апс1 псау Ье Ьаппуи1 Ьу ш Ьа1а6оп, !п8ехс!оп, ог грбп аЬаогр6оп. ЪСтеаг аррторпате 8!онеа апс) ааЕесу цо8- 81ея ВгопюрЬепо! Ыие псау Ье Ьаппуи! Ьу тпЬа1асюп, !п8еас!оп, ог арбп аЬсюгр6оп. ЪЪтеаг арргорпасе 81очеа апс) ааЕесу 81аьея сне !п а сЬеписа1 Ешпе Ьоой л-Витало! ь тгпса6п8 со сЬе лпссось тпетпЬгапея иррег гехр!гасогу !тасс, арбп, апс1 еарес!а1!у сЬе еуея АноЫ ЬгеасЬ!п8 сЬе чароги Ъстеаг арргорпасе 81очеа алс1 гаЕесу 81аьея Усе сп а сЬеписа! 6ппе Ьоой п-Витало! !а а1сю ЫВЫу йалипаЫе.
Кеер аннау Егот Ьеас, граг[ся апс! орел балте. Сасос)у!асе сопса!па агаепк, ь Ь!8Ыу сохк, апс1 гпау Ье Еаса! сЕ спЬа1ес1, !п8еасе<1, ог аЬаогЬес) сЬгои8Ь йе аЫп. 1с ь а роя!Ые саге!по8еп апс[ тау Ье гписа8еп!с. Ъеаг арргорпасе 8!очех апс[ аа(есу 8!атея (Ле сп а сЬелиса1 6ипе Ьоой Сасос(уИс асЫ ь сохк апс( а рояяЫе сагсюо8еп. 1с тау Ье псиса8еп!с апс1 ь Ьаппуи! Ьу нсЬа1а6ол, гп8еабоп, ог а)с!и аЬгюгр6ол. ЪЪеаг арргорпасе 81очеа апт( ааЕесу 81асьея ТЛе оп1у !и а сЬепбса! Еигпе Ьоос1. Ето пос ЬгеасЬе сЬе т[игс. СагЬеп(ссИЫ тау саиае аепя6гасюп Ьу спЬа!а6оп, тп8еа6оп, ог а)с!и аЬаогрс!оп.
ЪСтеаг арргорпасе ц!очеа апс1 ааЕесу 8!аыея А!2.8 Аррепг))х !2: Саипопз С1азььнаге, ргеььиг!хег! шии Ье изег! ьч11Ь ехггеше саигюп. Напг!!е а1аьььчаге ипг!ег часишп, зисЬ аь г!еьксагогь, часишп !гарь, г!гу)па ег)шргпепг, ог а геасгог !ог ьног)с!пи ипг!ег агаоп аггпоьрЬеге, ьч)й арргорпаге саиВоп.
А!ьнауз ннеаг заге1у а1аььеь. Яаьь ьчоо1 шау Ье Ьаппй! Ъу 1пЬа1аг)оп апг) гпау саизе зЫп ггпгагю. Ъчеаг арргорпаге а1очеь апг! шаь)с. 0!игаса!деЬуг!е Ь гохк. 11 В геай1у аЬзогЬед 1ЬгоиаЬ йе з)гш апг! 1ь 1гпга11па ог дезггисг)че 1о йе з)г)п, еуеь, пшсоиз шегпЬгапез, апг! иррег геьр!гагогу !гас!. ЪЪгеаг арргорпаге а!очеь апг! за!агу а1аззез. АЬчауь иье ш а сЬеписа! бэппе Ьоой а!ус!пе гпау Ье Ьапп6л1 Ъу шЬа1а1юп, шаеь11оп, ог зЫп аЬьогргюп. ЪЪеаг а!очез апг! забегу 81аззеь.
АчоЫ ЪгеагЬ|па йе г!изг. биапЫше Ьуг!госЫогЫе В 1гпгаг)па го 1Ье пшсоиз гпешЬгапез, иррег геьр)гагогу !гас!, зЫп, апг) еуез, !1 гпау Ье Ьаппй! Ьу 1пЬа1а11оп, шаек!оп, ог зЫп аЬзогрВоп. Ънеаг арргорпаге ц!очеь апг! ьагегу е1аььеь. АчоЫ ЬгеагМпа 1Ье г!изп биапЫше й1осуапаге гпау Ье Ьаппй! Ьу шЬа1агюп, шцезВоп, ог зЫп аЬзогргюп. Ънеаг арргорп'- а1е а1очеь апг! ьагегу а1аььез. Сиап1йпипп Ьуг!госЫогЫе, зее СиапнИпе Ьуг!госЫопде Сиап1йп1иш !ьой!осуапа1е, зее СиапЫше й!осуапаге биап!йпипп й!осуапаге, зее биапЫ!пе й!осуапа1е Н ВО, зее Вопс асЫ Н ССООХН, зее Апипопиип асе1а1е НС1, зее Нуг)госЫог!с асЫ ЯСОН, зее РоппаЫеЬуде Н СОН, зее МегЬапо! НСОХ!СН ), зее !Уипейу!1оппашЫе НСООН, зее Рогпис асЫ Нергапе гпау Ье Ьаппзи! Ьу )пЬа1а11оп, !пдеьВоп, ог ь)с!и аЬзогргюп.
Ънеаг арргорпаге а!очеь апг) ьагегу а!азьез. 11 !з ехггегпе1у йапппаЫе. Кеер аьнау ггош Ьеаг, ьраг)гь, апг! ореп йагпе. НХО, зее Х!1пс асЫ Н О, зее Нуг!гоВеп регохЫе НОСН СН ХН, зее ИЬапо1аш)пе НОСН СН 8Н, зее 11-Мегсар1оегЬапо! Н РО, зее НурорЬоьрЬогоиз асЫ Нзр04, зее РЬоьрЬогк асЫ (сопсепггагег!) Н 8, зее Нуг!гоиеп зи1РЫе НзЯО4, зее 8и!1иг!с асЫ Нудгах1пе, Х Н4, 1ь Ь)аЬ!у гох)с апг! ехр!оь)че ш йе апЬуг!гоиь ь1аге. 11 шау Ье Ьаппбгг! Ьу шЬа1а11оп, !паек)оп, ог з)гш аЬьогрВоп. АчоЫ Ьгеа1Ыпа йе чарогь. Ънеаг арргорпаге а!очеь, цодц!еь, апг! ргогесВче с1огЬ|па. Ъ)ье оп1у ш а сЬеписа1 6ипе Ьоой 1пьрозе ог" ьо1шюпз сои!а!п)па Ьуг1гах!пе гп ассоЫапсе ьч)й МЯЭ5 гесошшепда11опь.
Кеер аннау Ггош Ьеаг, ьраг)сз, апд ореп !)аде. Нуг!госЫог!с асЫ, НС1, 1з чо!а11!е апг) гпау Ье гага! 1!'1пЬа1ей шдезгед, ог аЬзогЬег! 1ЬгоиаЬ 1Ье ь)г)п. 11 1з ехггегпе!у г!еигис11че го пшсоиь шешЪ|апеь, иррег геьр)гагогу !гас!, еуез, апг! з)г)п. ЪЪеаг арргорпаге а!онез апг! заге1у а1аььеь. !)ье ьч11Ь агеаг саге ш а сЬеписа1 !игпе Ьоой. Ъчеаг до881еь ьнЬеп Ьапс!1!па !агре г)пап!11!еь.
Нааигг/оиь Магег(а!ь А12.9 Нус?гоцеп регох!с?е, Н О, !ь соггоь!че, ?ох|с, апъ? ехггегпе|у с?ашаа|па го гЬе ь?с!и. 1? шау Ье Ьаппуп| Ьу гпЬа|агюп, !паеьг!оп, апс1 ь?с!и аЬьогрИоп. Чгеаг арргорпаге а1очеь апс? ьаЕегу а?аььеь. 1Ле оп!у ш а сЬеппса! Еише Ьоой Нус?гоВеп ьи?6ъ?е, Н Я, !ь ап ехггеше1у гох!с ааь йас саиьеь рага!уяь оЕ ?Ье геьр|гагогу сепгег. 1г |ь !гг!?аг!па апъ? соггояче го гььиеь апс1 гпау саиье о!Еасгогу Еаг!аие. Оо пог ге1у оп ог?ог го с?егесг !?ь ргеьепсе.
Та1се агеаг саге ъчЬеп Ьапд!ша и. Кеер Н В гап)сь !п а сЬеписа! ?шпе Ьоос| ог ш а гоопь ес?и!рред ъч!?Ь арргорпасе чеп61аИоп. Ч/еаг арргорггаге а!очеь апъ? ьаЕегу а1аььеь. 1с !ь а!ьо чегу ИагпшаЫе. Кеер аъчау Егош Ьеаг, ьраг1сь, апд ореп Ваше. Х-Нус?гохуьиссш!ш|с?е Л ап |гг!?апг апъ? гпау Ье Ьапп!и! Ьу шЬа|аиоп, !паеьг!оп, ог ь?с|п аЬьогрИоп, Чгеаг арргорпаге а1очеь апг) ьаЕегу х?аььеь.
НуВгошусш В !ь Ь!цЫу гохк апс? гпау Ье Еага! !Е !пЬа!ег(, !пцеьгес?, ог аЬьогЬес? ?ЬгоиаЬ ?Ье ь?ъ|п. Чгеаг арргорпаъе а1очеь апс? ьаЕегу хоаа!еь. ?Ле оп! у ъп а сЬепъка! |ише Ьоод. 1)о пог Ьгеайе йе с?иьг. НурорЬоьрЬогоиь асЫ, НьРО, Л иьиаИу ьиррИеь? аь а 50",'а ьо1иИоп, ъчЫсЬ гь соггояче апъ? ьЬои1д Ъе Ьапс?!еъ? ъч!?Ь саге. 1г ьЬои1д Ье ЕгеьЫу гИ!игес1 ппгпегИаге!у ЬеЕоге иье. Ч'еаг арргорпаге а1очеь апс? ьаЕесу ц!аььеь. !Ле ш а сЬепнса! !ише Ьоос1.
1поь|го1 шау Ье ЬагшЕи? Ъу !пЬа?а?|оп, !паеьг!оп, ог ь?с!и аЪьогргюп. Чгеаг арргорпаге ц1очеь апс1 ьа/егу ц!аььеь. 1РТС, ьее 1ьоргору1-()-?ъ-гЫоаа!ассоругапоьЫе 1ьоапгу! а1соЬо! гпау Ье ЬаггпЕи! Ьу ъпЬа|аИоп, !паеьг|оп, ог ь?с|п аЬьогргюп апъ? ргеьепгь а г!ь?с оЕ ьег!оиь с(агпаае го йе еуеь. Ч/еаг арргорпаге а!очеь апг? ьаЕегу цоаа1еь. Кеер аъчау Егош Ьеаг, ьраг?сь, апИ ореп Иагпе. 1ьоЬигапо1, ьее 1ьоЬиьу1 а|соЬо| 1ьоЬигу1 а1соЬо! (1ьоЬигапо1) |ь ехсгегпе1у ИапипаЫе апс? шау Ье Ьагпь!Ь1 Ьу шЬа1агюп ог !паеьг!оп. Ч'еаг арргорпаге а1очеь апс? ьаЕегу а!аььеь.
Кеер аъчау Егош Ьеаг, ьраг?сь, апс? орел Ваше. 1ьоргорапо1 !ь !гг!гаг!па апс1 гпау Ье ЬагшЕи! Ъу гпЬа1агюп, !паеьг!оп, ог ь?с!и аЬьогргюп. Чгеаг арргорпасе а!очеь апъ? ьаЕегу В! аяеь, Оо пог Ьгеайе йе чарог. Кеер аъчау ?гош Ьеас, ьраг?сь, апъ? ореп Ваше. 1ьоргору1-)3-?ъ-й!ода!ассоругапоь!с!е (1РТС) шау Ье Ьаппуи! Ьу гпЬа1агюп, !паеьг!оп, ог ь?с!и аЬьогргюп. Ч'еаг арргорпаге а?очеь апъ? ьаЕегу а?аььеь.
1ьогоре яь! ассипш!асеь гп йе йугоЫ апг? |ь а рогепИа! Ьеа!й Ьахагс1. Сопьи1? гЬе 1оса! гагИагюп ьаЕегу оЕЕгсе Еог !игйег аи|г?апсе |п йе арргорг!аге иье апс? сИьроьа! оЕ гагИоасине шагег!а!ь. Чгеаг арргорпасе а1очеь ъчЬеп ЬапсИша гагИоасггче ьиЬьгапсеь, ТЬе иь1 Еогшед с?иг!пц охЫаИоп оЕ ?ъ?аиь! |ь чо1аИ|е.
Чгог?с гп ап арргочес! сЬегйса! Ьагпе Ьоос? ъчИЬ а сЬагсоа1 И!Гег ъчЬеп ехроь|пц йе |ъ(аиь! Со ох|с?|а|па геааеп?ь ьисЬ аь сЫогапипе-Т, 1О1ЭО-СВ?ъ?, ог ас!г?ь. Весаиье йе охЫаИоп ргосеес?ь чегу гарЫ1у апг? ге|еаьеь ?агае апюипгь оЕ чо1аИ|е и~? ъчЬеп сЫогапипе-Т !ь иьед, И !ь ипроггапг со Ье ъчеИ ргерагед Еог еасЬ яер оЕ йе геасИоп, ю ?Ьаг ?Ье ъ?апаег оЕ сопгапппагюп Егогп чо|а61е гаЕИагюп сап Ье пппип!хес?, оЫе1д аИ Еогшь оЕ гЬе !ьогоре ъчиЬ |еад. Ч Ьеп Ьапд1!пц йе !ьогоре, ъчеаг опе ог гъчо ра!гь оЕ арргорпаге а!очеь, с?ерепъ?|пц оп ?Ье апюипг оЕ |ьогоре Ье!па иьеь? апъ? йе с?!ЕЕгси1?у оЕ йе шап!ри!аг!оп гес?и|гег?. КС|, ьее Рогаьяшп сЫогЫе Каре(С?ъ?) ь, ьее Рогаььиип ЕегПсуапЫе К Ре(С?ъ?)ь ЗН О, ьее Роьаььшпь ЕеггосуалЫе КН РО„/К НРО„/К РО, ьее Рогаьь|иш РЬоьрЬаге КМпО, ьее Рогаьь|иш регшапВапаге КОН, ьее Рогаьь!иш ЬудгохЫе Ьаьег гайаг!оп, Ьой ч!ь!Ые апъ? Ьъч!ь|Ъ|е, сап Ье ьегюиь1у Ьагш(и? го йе еуеь апй ь?с!и аис? гпау цепегасе аъгЬогпе сопгапппапгя с?ерепс?|па оп ?Ье с1аы оЕ 1аьег пьес?.
Н|цЬ-роъчег 1аьегь ргойке реггпа- Нагагз(оиз Мазепа!з А12.11 МЯСА, зее Мацпеяит сЫогЫе МяЯО, зее Маяпеяигп зи)1азе 2-[Х-тогрЬо11по)егЬапези!гоше асЫ (МЕЯ) гпау Ье ЬагтЬ|! Ьу !пЬа1аг(оп, !пцезг!оп, ог зЫп аЬзогрг(оп. аеас арргорпа|е я1очез апд загс!у я1аяез. 3-(Х-МогрЬойпо)-ргорапезиНошс асЫ (МОРЯ) тау Ье Ьагт(и! Ьу !пЬа!аг!оп, !пцезг!оп, ог з)с!и аЬзогр6оп. 1| 1з (гг!гаг!пц го ппкоиз |пегпЬгапез апг) иррег гезр|га|огу |гас|. )Чеаг арргорпа|е ц1очез апд за(е|у я1аыез. ()зе |и а сЬетка! !шпе Ьоог).
МпС1, зее Мапяапезе сЫогЫе МОРЯ, зее 3-(Х-МогрЬо1шо)-ргорапези1)ошс асЫ МТХ, зее Ме|Ьоггехаге Хар, зее Яодшт ЙиогЫе Ха НРО, зее Яог((ит Ьудгояеп РЬозрЬаге ХаХ, зее Яог((ит ахЫе ХаХО„|ее Яог))ит шггаге ХаОН, зее Яойизп Ьуг)гохЫе Х,Н, зее Негах)пе ХН4С1, зее Апипоппип сЫогЫе (ХН4)зМо О „4Н О, |ее Апипопш|п то!уЪЙаге ХН ОН, зее Апипопипп Ьуг)гохЫе (ХН4),ЯО4, зее Апипоппип зиНаге (ХН„),Я О, зее Апипопшп| регзи)гаге Х)с)се! хи!гаге, Х(ЯО, !з а саге!поклеп апд тау саше Ьег!|аЫе Яепег!с г)атаЯе.
1| !з а зЫп |ггЬап| апд тау Ье Ьагт(и! Ьу |пЬа1а|юп, )пцезг!оп, ог з!ап аЬзогр|юп. ЪЧеаг арргорпа|е д1очез апд за(егу ц!аяез. (.)зе |п а сЬеписа1 гите Ьоой Оо по| Ьгеа|Ье |Ье с(изг. ХЬЯО4, зее Хк1|е! зиНасе ХНПс асЫ, НХО, !з чо1аЬ!е апг) тпя Ъе Ьапг)1ед зч!|Ь дгеас саге. 1| !з |охк Ьу тЬа!а|юп, !пЯезг!оп, апг) зЫп аЪзогрг!оп. ЪЧеаг арргорпа|е д!очез апз) за!егу яояя!ез. ()зе |и а сЬеписа) |игпе Ьоой Во по| Ьгеа|Ье |Ье чароги Кеер азчау ггот Ьеа|, зраг)гз, апд ореп Еате. РЕС, зее Ро1уейу!епея1усо! РегсЫоПс асЫ п|ау Ье гага! Ьу !пЬа1аг!оп, !пЯезг!оп, ог з1|!и аЬзогр|юп. ЪЧеаг арргорпаге ц1очез ап|1 загегу Я!аяез.