Автореферат (1154481), страница 3
Текст из файла (страница 3)
Серым цветом выделеныокрашенные клетки. Справа показана типичная гистограмма при проведенииисследования. Ось абсцисс – интенсивность флюоресценции, нм;ось ординат – количество клеток, тыс. событий.Таблица 4Влияние Ах на клеточный циклВремя инкубации, часы487296Кон.конц-ия Ах, М10-410-510-610-410-510-610-410-510-6Процентное соотношение кол-ва ОК SW620в разных фазах клеточного циклаS/G1S/G2G1/G20,472,3176,80,85,87,90,76,29,20,39,727,80,76,59,10,76,49,80,600,6191,5307,50,6-12Таким образом, in vitro на ОК SW620 выявлено слабое митогенноедействие Ах. Наиболее выраженное влияние на ОК Ах оказывает вдиапазоне концентраций 10‾6–10‾4М/лунку.
Пролиферативная активность ОК после однократного применения Ах достигает максимума к72-му и продолжается до 96 часа.IN VIVO ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ АЦЕТИЛХОЛИНА НА РОСТИ РАЗВИТИЕ ПОЛИПОВ ТОЛСТОЙ КИШКИРабота iv vivo проводилась в несколько этапов. Задачами первогоявлялись: 1) определение условий проведения оперативного вмешательства; 2) определение и профилактика основных осложнений послеоперационного периода; изучение степени вовлеченности Ах впроцесс заживления раны; 3) оценка динамики колебаний концентрации Ах в окружающих тканях; 4) уточнение токсического действияканцерогенного вещества (1,2-азоксиметан или АОМ) для индукциироста полипов; определение рабочих концентраций и кратность введения для индукции роста полипа.
Задачи второго этапа: 1) уточнитьособенности роста полипов на фоне изменения уровня Ах;2) определить в биоматериале концентрацию EGF; ММР-3 и ММР-9;3) сопоставить данные с данными исследований in vitro.ПАТОФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ ВНУТРЕННИХ ОРГАНОВПРИ МОДЕЛИРОВАНИИ ЯЗВЫ ТОЛСТОЙ КИШКИПри моделировании язвы толстой кишки (ТК) у крыс применялимодификацию модели язвы желудка по Okabe, с использованием разработанного аппликатора, который устанавливали на расстоянии 2 смот выхода ободочной кишки из слепой. При моделировании язвы, образовавшиеся поражения ТК визуализировались до 21–22-го дня, атопографически определялись до 70-го дня; у 12,5% животных выявлены стриктуры ТК.
Модифицированная нами модель язвы желудка поOkabe с учетом уменьшения диаметра окна аппликатора и времениэкспозиции с кислотой оказалась технически воспроизводимой на ТК,что можно использовать для экспериментального моделирования язвенных повреждений ТК. Типичная картина внутренней поверхностиТК представлена на рис. 6. Сравнение групп «интактные» и «язва» показало, что при индукции повреждения возникают зоны десквамации,лимфоидной пролиферации; формировались очаги разрушения ворсинок и клеточной трансформации, также формировались гиперпластические полипы (рис.
7 и 8). Характерные для воспалительной реакцииизменения в группе «язва» обнаруживали даже на 70-й п/о день.13АВБР и с . 6. Макрофотография препарата толстой кишкиА – «интактные»; Б – 72 часа (павшее животное); В – 14-е сутки.Кругами выделены область язвы, типичные измененияслизистой оболочкиРис. 7. Микрофотография образцов толстой кишки крыс.Окраска гематоксилином-эозином.
Увеличение – А – ×400, Б – ×100, В – ×450.А – образец ткани от интактных животных; Б – образец ткани интактныхживотных, 1 см от выхода слепой кишки; В – образец Б, увеличенный участок.1 – выстилка однослойным цилиндрическим каёмчатым эпителиемс многочисленными бокаловидными клетками; 2 – мышечный слойР и с . 8. Микрофотография среза кишки, группа «язва»Окраска гематоксилином-эозином. Увеличение А – ×50; Б – ×100; В – 200;Г – 200.
1 – мышечный слой; 2 – лимфоидная инфильтрация;3 – зона десквамации слизистой оболочки; 4 – белковые наложенияна поверхности ворсинок; 5 – кровенаполненные сосуды14Изменения, связанные с воспалением, подтверждает реакция селезенки – наблюдали статистически значимые изменения анатомическихразмеров органа (табл. 5).Таблица 5Анатомические изменения селезенкиПараметры сравненияГруппаКол-во,nДлина, смШирина, смВес, гМе (25;75)%Ме (25;75)%Ме (25;75)%Интактные83,8 (3,4; 4,0)3,0 (2,9; 3,3)1,8 (1,6; 1,9)Язва105,6* (4,9; 6,2)3,8◊ (3,5; 3,9)3,0□(2,9; 3,5)* статистически значимое увеличение длины селезенки у прооперированныхживотных р=0,00005 (Манн-Уитни-тест); ◊ статистически значимое увеличениеширины селезенки у прооперированных животных р=0,0002 (Манн-Уитни-тест);□ статистически значимое увеличение веса селезенки у прооперированных животных р=0,00005 (Манн-Уитни-тест).В нашем исследовании в группе «язва» были обнаружены патологические изменения в тканях легких: эмфиземы и очаги перибронхита,признаки перенесенной пневмонии (рис.
9), что нами было связано сдинамикой системного действия Ах в тканях животных.Р и с . 9. Общий вид легких у крыс: А – «интактные» и Б – «язва»1 – единичные кровоизлияния на боковых поверхностях легких;2 – крупное кровоизлияние; 3 – участок взятия образцадля морфологического исследованияВ группе «язва» была определена концентрация Ах в области воспаления ТК в послеоперационный период (3–20-й день) и проведеносравнение с «интактными».
Динамику изменения концентрации Ах вСОТК групп определяли биохимический методом титрования Хестрина(в модификации Трубицыной И.Е.). Изменения концентрации Ах носили времязависимый характер: нарастание происходило к 3-м суткам(0,52±0,04 мг/мг ткани), достигало максимума к 5-му п/о дню15(1,2±0,04 мг/мг ткани), далее 2 дня наблюдали плато-эффект, которыйпредвещал падение концентрации Ах к 12-му дню от 0,95±0,04 мг/мг до0,6±0,04 мг/мг ткани.
У «интактных» изменения количества Ах не наблюдали, его уровень составлял 0,38±0,03 мг/мг ткани. При индукцииязвы СОТК концентрация Ах изменяется со временем и его эффектыминимальны после 12-го дня. Процесс воспаления ТК не носит узконаправленного действия, его последствия имеют генерализованный эффект (поражение легких), что позволяет по-новому взглянуть на проблему послеоперационных осложнений со стороны органов дыхания.ПАТОФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ ВНУТРЕННИХ ОРГАНОВНА ФОНЕ ПРИМЕНЕНИЯ КАНЦЕРОГЕНА АОМЗадачей этого исследования являлось определение степени изменения СОТК после инъекций АОМ. Канцероген вводили дважды на 0 и14 день эксперимента. При макроскопии ТК видимых изменений неотмечали. Для морфологического анализа были отобраны образцытканей ТК на расстоянии 2 см от выхода из слепой кишки (аналогиятопографии язвенного дефекта).
Морфологическая картина соответствовала начальному этапу опухолевого роста (рис. 10): наличие многоядерных клеток; гиперпластических участков слизистой оболочки,многочисленные тубулярные аденомы.При осмотре селезенки были обнаружены признаки пролиферации:сглаженность углов органа, бугристость и выраженное кровенаполнение (при поперечном разрезе края не сопоставлялись); заметное изменение картины микроскопических препаратов: наличие гемосидероза вгруппе «АОМ», что подтверждает возможность гепатотоксическогодействия АОМ.БАР и с . 10. Микрофотография гистологических образцов,окрашенных гематоксилином-эозином:А – микроскопический вид ворсинки (контроль), ×400; Б – картина типичныхизменений в толстой кишке крыс после в/б введения АОМ 15 мг/кг,двукратно, с промежутком 14 дней между введениями.Полип слизистой оболочки толстой кишки, ×400.16Макроскопические изменения печени проявлялись изменениемцвета органа в сторону оранжево-охрянистой гаммы, у 2 животных из25 малые доли имели вид мускатного ореха.
Морфологически установлено наличие жировой дисторофии, в группе с введением АОМ этиизменения были типичны (рис. 11).Р и с . 11. Микрофотографии образцов ткани печени.Окраска гематоксилином-эозином, 400. А – крысы «интактные»; Б – «АОМ»АОМ 15 мг/кг веса, двукратно, в/бБыли получены данные о полиорганном действии АОМ, утверждена схема его применения однократно по 15 мг/кг в/б, дважды, с промежутком 14 дней; для животных весом более 250 граммов; длительность всего эксперимента – 70 дней.ПАТОФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ ВНУТРЕННИХ ОРГАНОВПРИ МОДЕЛИРОВАНИИ ЯЗВЫ В СОЧЕТАНИИС ВВЕДЕНИЕМ КАНЦЕРОГЕНА АОМДля исследования формировали группы животных: «интактные»,«язва», «АОМ» и «язва+АОМ». Оперировали животных из групп «язва» и «язва+АОМ» – 1-й день эксперимента. Для групп «АОМ» и «язва+АОМ» 14-й п/о день служил 1-м днем для введения АОМ, второевведение совпадало с 28-м п/о днем, а 70-й п/о день – конечная точка,после чего оценивали макроскопическую картину органов дыхания,состояния печени, селезенки и ТК.
Отбирали биологический материал:образцы СОТК и кровь для ИФА-определения концентрации ММР-3,ММР-9 и EGF. Для проведения морфологического анализа отбиралиобразцы тканей кишечника, печени и селезенки.При морфологической оценке состояния ТК было показано синхронное развитие полиполипоза и аденокарцином.
Количество полипов на гистологическом срезе ТК достигало 5-8 штук на 2 см ленты;17при этом степень дисплазии определялась как высокая (рис. 12). Провели сравнительную морфометрическую оценку высоты полипов и ихплощади в группах «АОМ» и «язва+АОМ». Установлено, что в группе«язва+АОМ» существовало статистически значимое различие в высотеи площади полипов по сравнению с группой «АОМ».
В группе «АОМ»среднее количество полипов составило 2–3 полипа средней площади352279±71370,4 мм² и средней высоты 933,0±233,3 мм, с умереннойстепенью дисплазии. Для группы «язва+АОМ» эти показатели былииными – среднее количество полипов составило 1-3; средняя площадьбыла 188393,0±72808,7 мм²; средняя высота – 437,0±125,6 мм (табл. 6).Таблица 6Морфометрические показатели слизистой оболочкитолстой кишки у крыс групп 2 и 4Измеряемые параметры, мкмАОМВысота каёмчатых энтероцитовповерхности слизистой оболочкиВысота бокаловидных энтероцитов криптТолщина слизистой оболочкиТолщина подслизистой оболочкиТолщина кишечной стенкиАВГруппыАОМ + язва21,3±2,422,5±7,624,0±4,1414,4±73,424,0±3,6551,5±60,031,5±8,6546,6±185,866,4±32,4723,0±231,8БГР и с . 12.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
