Диссертация (1151514), страница 6
Текст из файла (страница 6)
В., Максимов В. И., Шевелев Н. С.,2005; Воронин Е. С. и соавт., 2002; Симонян Г. А., Хисамутдинов Ф. Ф.,1995).Гемоглобин определяли гемоглобин-цианидным колориметрическимметодом (Антонов Б. И., 1991). Для анализа брали опытную, стандартную иконтрольнуюпробы.Дляподготовкиопытнойпробык5млтрансформирующего раствора добавляли 20 мкм (0,02 мл) испытуемойкрови,тщательноперемешивалииоставлялина10мин.Затемколориметрировали при зеленом светофильтре (длина волны 500-560 нм) вкювете толщиной слоя 10 мм против контрольной пробы, в качествеконтрольной пробы брали трансформирующий раствор.
Стандартнаяпроба– это стандартный раствор гемоглобинцианида. Количество гемоглобинаопределяли по формулеГде Еоп – оптическая плотность опытной пробы; Ест – оптическая плотностьстандартной пробы; С – концентрация гемоглобинцианида в стандартномрастворе (59,75 мг на 100 мл; 0,001 – коэффициент для пересчета 1 мг в 1 г;К – коэффициент разведения крови) рассчитывали в 1 л крови.32Лейкограмму определяли на мазках крови, которые фиксировалиметиловым спиртом, окрашивали по Романовскому-Гимза, клеточный составизучали и подсчитывали по общепринятой методике в четырех условныхзонах, разделенных поперечной и продольной осевыми линиями, визуальнопроведенными через центр мазка.
В каждой зоне сосчитали 25% клеток оттребуемого количества (100 или 200). Лейкограмму выражали в процентах(Симонян Г. А., Хисмутдинов Ф. Ф., 1995).Биохимические. Концентрацию общего белка в сыворотке кровиопределяли рефрактометром ИРФ-22 и биуретовым методом; белковыефракции – турбидиметрическим методом (Антонов Б. И., Яковлева Т. Ф.,,Дерябин Б. И., 1991); содержание кальция – по реакции с о-крезолфталеинкомплексомипо(Капитаненко А. И.,восстановлениюфосфорномолибденовойкислотыДочкин И.
И., 1988); неорганического фосфора –ванадит-молибдатным реактивом (Антонов Б. И., Яковлева Т. Ф., Дерябин Б.И., 1991; Капитаненко А. И., Дочкин И. И., 1988); резервную щелочностькрови – диффузионным методом (Шубич М. Г.,1980);содержаниеглюкозывсывортоткеНачаев Б. С.,кровиопределялиглюкозооксидазным методом (Камышников В. С., 2004; Ramakrishnan S.,2012), содержание общего холестерина в сывороткепо методу Илька(Кондрахин И. П., 2004) активность аспартатаминотрансферазы (АсАТ) иаланинаминотрансферазы (АлАТ) определяли по методу Райтмана-Френкеля(Маршалл В. Д., 2000, Виноградова Р.
П., 2002).Клеточныефакторыопсонофагоцитарнойрезистентностиреакции,учитываяопределялипостановкойфагоцитарнуюактивность,фагоцитарное число, фагоцитарный индекс и фагоцитарную емкость.При постановке опсонофагоцитарной реакции в качестве тест-пробыиспользовали инактивированную культуру белого стафилококка, штамм209-6. Реакцию ставили сразу после взятия крови. Для этого в стерильныепробирки, каждая из которых содержала по 0,25 мл 2% растворалимоннокислого натрия, добавляли по 0,5 мл двухмиллиардной суточной33взвеси тест-культуры, убитой путем нагревания при 70ºС в течение 30 мин, итщательно перемешивали содержимое. Затем пробирки ставили на 30 мин втермостат при температуре 37ºС. По истечении времени из содержимогокаждой пробирки готовили мазок, который фиксировали метиловым спиртомиокрашивалипоРомановскому-Гимза.Подсчетфагоцитированныхмикробов (тест-микробов) производили в 100 лейкоцитах.
Из показателейфагоцитозаучитывали:фагоцитарнуюактивность–процентфагоцитирующих лейкоцитов к числу подсчитанных; фагоцитарное число –среднее количество фагоцитированных микробных клеток, приходящихся наодин из просмотренных лейкоцитов; фагоцитарный индекс – среднееколичествомикробныхклеток,фагоцитированныходнимактивнымлейкоцитом; (Петров А. М., Воронин Е. С., 1999; Петров Р.
В., 1997).Гуморальные факторы резистентности определяли:1) По бактерицидной активности сыворотки крови, которую определялипо методикеЕмельяненко П. А. (1987), где в качестве тест-культурыиспользовали кишечную палочку (суточной агаровой культуры E.Coliштамма К-12). В пробирку с 4,5 мл стерильного МПБ добавляли по 1 млиспытуемой сыворотки.
Затем пастеровской пипеткой во все пробиркивносили по одной капле в 2 млрд. взвеси суточной культуры кишечнойпалочки. Контролем служила пробирка с бульоном и культурой, а вместосыворотки в нее добавляли равное количество 0,9% раствора хлористогонатрия. Содержимое пробирок перемешивали, и после измерения исходнойоптической плотности смеси ставили их в термостат при 37ºС на 3 ч, послечего производили повторное измерение оптической плотности.
Экстинкциюопределяли при 540 нм на ФЭК в кюветах шириной 5 мм и зеленомсветофильтре. Расчет активности делали по формуле:где А – бактерицидная активность сыворотки крови, %;– оптическаяплотность после 3 ч инкубации; Еоп – оптическая плотность перед34инкубацией;– оптическая плотность холостой пробы после 3 ч инкубации;е – оптическая плотность холостой пробы перед инкубацией;2) по лизоцимной активности сыворотки крови, которую определяли пометодике Е.И. Соколова (1998).
Суточную агаровую культуру микрококкасмывали стерильным 0,9% раствором хлористого натрия и готовили взвесь,оптическая плотность которой на колориметре ФЭК 56-М составляла 20% врабочей кювете шириной 3 мм при зеленом светофильтре. В стерильныепробирки разливали по 1,47 мл приготовленной взвеси микробов, добавлялив каждую по 0,03 мл исследуемой сыворотки крови, помещали в термостатпри температуре 37ºС на 2 ч, затем колориметрировали и после установленияоптической плотности вычитали из нее контроль.
Лизоцимную активностьплазмы крови вычисляли в процентах.Климатические и микроклиматические –климатические факторывнешней среды (температура окружающего воздуха влажность и скоростьдвижения воздуха, атмосферное давление воздуха, концентрация О2, SO2,СО, NO2) изученына базе агрометеостанции «Усть-Кинельский» всоответствии с методикой Федеральной службы по гидрометеорологии имониторингуокружающейсреды;микроклиматическиепараметры:измерение температуры и относительной влажности воздуха в помещениях –аспирационным психрометром МВ-4В, недельным термографом М-16А,скорость движения воздуха – крыльчатым анемометром МС-13, содержаниев воздухе диоксида углерода – по Гессу, аммиака – универсальнымгазоанализатором УГ-2(Кузнецов А.
Ф. с соавт., 2001), бактериальнойзагрязненности воздушной среды в помещениях – с помощью аппаратаКротова.Физико-химические свойстваВоднитаисследовали в условияхлаборатории рентгеновской дифрактометрии на растровом электронноммикроскопе JEOL JSM – 6390A с энергодисперсионным рентгеновымспектром JEOL JED – 2300 и в институте экспериментальной медицины ибиотехнологии Самарского государственного медицинского университета35(лаборатория рентгеновской дифрактометрии, электронной и зондовоймикроскопии НИЧГОУ ВПО «Самарский государственный техническийуниверситет»).Статистическая обработка. Цифровой материал, полученный вэксперименте, обработан биометрическими методами с вычислениемобщепринятых констант (Лакин Г.
Ф., 1990;Рокицкий П. Ф., 1976) ипрограммы Microsoft Exel 2010.3.2 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ3.2.1 Физико-химические данные кормовой добавки Дигидрокверцетини ВоднитДигидрокверцетин – (3,5,7,3',4'-пента-гидроксифлаванон, рисунок 1)флавоноид растительного происхождения, получаемый из древесинылиственницы сибирской (LarixsibricaLedeb.), по химическому строениюявляется соединением, родственным кверцетину.Рисунок 1 – Формула дигидрокверцетинаДигидрокверцетин – представляет собой порошок светло-желтогоцвета.
Выход дигидрокверцетина - 1,7-1,8% от массы абсолютно сухойдревесины (а.с.д.), степень чистоты - 94-96%. Выход арабиногалактана - 15,419,3%отмассыа.с.д.Онобладаетсильнейшейантиоксидантнойактивностью, тормозит процессы перекисного окисления липидов клеточныхмембранилипопротеидовсывороткикрови,атакжепроявляет36антитоксическое действие(Теселкин Ю. О., Жамбалова Б. А.,1997; ТутельянВ.А.
и др 2005).Массоваядолявлаги–до10%,температураплавленияДигидрокверцетина - 234-236°С. Растворимость в воде при различнойтемпературе имеет экспоненциальный характер: при комнатной температуре– 0,1%; при 40°С – 0,3%; при 60°С – 1,0% и при 90°С – от 3 до 5,3%.Дигидрокверцетин хорошо растворим в водно-спиртовых средах, спиртах.Растворимость Дигидрокверцетина в водно-спиртовой среде увеличивается с0,1 до 18% по мере возрастания доли спирта от 30 до 90% . Кроме того,Дигидрокверцетин проявляет хорошую растворимость в этилацетате. Так,при температуре 20°С растворимость Дигидрокверцетина составляет около1,9%; при 40°С – 8 -12%, при 70°С – 28%. Нерастворим в неполярныхрастворителях (Гексан, хлороформ) (Пат. РФ №2000797, опубл.
15.10.1993;Пат. РФ №2014841, опубл. 30.06.1994).Способ получения Дигидрокверцетина заключается в том, чтоизмельченную до частиц размером 1-3 мм древесину лиственницыподвергают экстракции 10-25% водным раствором этилового спирта прикипячении в течение 1-2 ч при гидромодуле 10-15, затем экстрактфильтруют, концентрируют под вакуумом, охлаждают и смешивают с 4кратным объемом 96% этилового спирта, высаживая арабиногалактан,оставшийся раствор концентрируют до образования сухого остатка, которыйсмешивают с 96% этиловым спиртом в соотношении 1:50-70, добавляютактивированный уголь и кипятят в течение 10-15 минут, раствор фильтруютчерез слой оксида алюминия и концентрируют под вакуумом с получениемДигидрокверцетин (Левданский А. В., Кузнецов В. А., Пат.
№ 2454410).ПриродныйКрасноярскогоминералрайонаВоднитСамарскойВодинскогообластиотноситсяместорождениякприроднымминералам осадочного типа с характерным запахом серы и залегает вместности, на территории которой не установлены очаги особо опасных,карантинных заболеваний человека, животных и птиц (справка № 48 от3725.06.09 ГОСО «Красноярская станция по борьбе с болезнями животных).Цвет минерала от светло- до серо-жёлтого. Хорошо крошится, вскипает припопадании на него 10% соляной кислоты.По данным Винниченко Г. В., Моляновой Г. В., Григорьева В. С. (Пат.№2480025 РФ, МПК А23К1/175, 2013) в результате микробиологическогоисследованиянасодержаниепатогенноймикрофлорывусловияхлаборатории научно-производственного центра племзавода «Гибридный»свинокомплекса ЗАО «СВ-Поволжское» Самарской области не былоустановлено присутствие в природном минерале Воднит сальмонелл,интеропатогенноготипакишечнойпалочки,анаэробныхмикроспор.Результаты микробиологического анализа и архивные документы, дают намоснование считать, что природная минеральная кормовая добавка Воднитбактериалогически безопасна, эпизоотологически благополучна.В условиях лаборатории кафедры геологии и геофизики НИЧ ГОУВПО Самарского государственного технического университета методомрентгеновской дифрактометрии, электронной и зондовой микроскопии,установиликоличественноеиэлементов в минерале Воднит.качественноесодержаниехимическихРезультаты исследований отражены втаблице 2.Таблица 2.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
