Автореферат (1151324), страница 3

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 3)

Первая группа – интактные. Крысамконтрольной (второй) группы вводили внутрибрюшинно однократно стерильнуюводу для инъекций (ОАО «Новосибхимфарм», г. Новосибирск). Животным опытныхгрупп в том же режиме вводили циклофосфамид (ЦФ, АО «Биохимик» г. Саранск) вдозах 20, 40, 60 и 80 мг/кг (Телегин, 2012; Kasamoto et al., 2014; Takahashi et al., 2014).Животных эвтаназировали путем делонгации (Ибрагимова и др., 2014).Индикаторы перекисного окисления липидов. В плазме крови определялисодержание гидроперекисей липидов (ГП) и малонового диальдегида (МДА). Вгомогенатах головного мозга, сердца, печени, почек, надпочечников, селезенки итимуса крыс определяли содержание диеновых конъюгатов (ДК) и МДА (Валеева идр., 2008; Гаврилов и др., 1987; Ибрагимова и др. 2012; 2013; Jnaneshwari et al., 2013).Оценка состояния системы антиоксидантной защиты организма (АОЗ).В крови крыс определяли суммарную антиокислительную активность (АОА)сыворотки крови, активности каталазы и пероксидазы в эритроцитах крови,содержание церулоплазмина (ЦП) в сыворотке крови (Валеева и др., 2008;Ибрагимова и др., 2012; 2013).Содержаниемакро-имикроэлементовопределялиметодоматомно-эмиссионной спектроскопии на спектрометре Optima 2000 DV (PerkinElmer, США) вЦентре биотической медицины, г.

Москва. В головном мозге, почках и печени белыхрандобредных лабораторных крыс после внутрибрюшинного однократного введенияЦФ (40 мг/кг) определяли содержание (мкг/г) 30 биоэлементов ‒ 5 макроэлементов:12кальций, фосфор, калий, натрий, магний; 9 жизненно необходимых элементов:железо, цинк, медь, марганец, молибден, хром, кобальт, селен, йод; 6 условножизненно необходимых элементов: бор, кремний, никель, ванадий, мышьяк, литий ‒и 10 токсичных элементов: олово, серебро, стронций, алюминий, свинец, кадмий,ртуть, бериллий, сурьма, лантан (Ибрагимова и др., 2012; 2013).Оценку уровня биоэлементов, системы антиоксидантной защиты организма ииндикаторов ПОЛ проводили с использованием медианы. Нижний и верхнийпороговые уровни определяли как 2,5-й и 97,5-й персентили соответственно. В работеиспользовали уровень значимости p < 0,05 (Хафизьянова и др., 2006).Генетические эффекты модуляторов липидного обменаИсследования выполнены на белых лабораторных рандобредных самцахмышей массой 20 г (1,5‒2-месячный возраст).

На каждый опытный и контрольныйвариант брали по 6 самцов. Животные содержались в условиях вивария согласномеждународным критериям на подстилку rinofix, корм и воду ad libitum. Приопределении мутагенного и антимутагенного эффекта лиганды адренорецептороввводили подкожно однократно. Через 8 ч внутрибрюшинно вводили индуктормутаций ‒ алкилирующий цитостатический препарат ‒ циклофосфамид (ЦФ) в дозе30 мг/кг. Мутаген и биологически активные вещества (БАВ) растворяли вфизиологическом растворе непосредственно перед введением животным. За 2,5 ч доокончания опыта мышам внутрибрюшинно вводили 2,5 мг/кг колхицина. Через 24 чпосле инъекции производили забор крови из хвостовой вены мыши, изготавливалимазок и проводили исследование под микроскопом. Подсчитывали количество клетокс микроядрами из 2000 проанализированных клеток (Ильинских и др.

1991).В эксперименте использовали следующие лекарственные препараты: эпинефрина гидротартрат (ЭГТ) ‒ стимулятор - и -адренорецепторов (АР),использовали лекарственую форму препарата в ампулах (0,18%) (Харьковскоепроизводственное химико-фармацевтическое объединение «Здоровье», г. Харьков,Украина); фенилэфрин (ФЭР) ‒ стимулятор -АР, использовали лекарственную формупрепарата в ампулах (1%) (Госкоммедбиопром, Опытный завод ГНЦЛС,г. Харьков, Украина); орципреналин (ОРП) – стимулятор -АР, использовали лекарственную формупрепарата в ампулах (0,05%) (Познаньский фармацевтический завод «Польфа»,г. Познань, Польша);13 пророксан (ПРС) ‒ блокатор -АР, использовали лекарственную форму препаратав таблетках по 0,015 г или в ампулах (1%) (АО «Ай си эн октябрь», г. СанктПетербург); пропранолол (ППЛ) ‒ блокатор -АР, использовали лекарственную формупрепарата в таблетках по 40 мг или в ампулах (0,1%) (ISIS PHARMA, г.

Цвиккау,Германия) (Ибрагимова и др., 2011б; 2014а; Lee et al., 2013; Tayel et al., 2012; Wardet al., 2014).Нарис.1представленосодержаниелабораторныхэкспериментов(практическая часть диссертационного исследования).МутагеныГеномЛипидомХимическиеэлементыДНК-связанныелипидыОбщие липидыбактерийАтомноэмиссионнаяспектроскопияГазоваяхроматографияМетиловыеэфиры жирныхкислотМассспектрометрияИндикаторыПОЛМикроядерный тестЛекарственныесредстваЛигандыадренорецепторовВысокоэффективнаяжидкостнаяхроматографияКомпьютерноемоделированиеСистемаантиоксидантнойзащитыФерментыСпектрофотометрияРис. 1.

Содержание лабораторных экспериментов (практическая часть диссертационногоисследования).14РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕЖирнокислотные маркеры общих липидов грамотрицательной играмположительной бактерий в зависимости от температуры и фазы роста.Жирнокислотные маркеры общих липидов грамположительной бактерииBacillus subtilis в зависимости от температуры и фазы ростаДля поиска маркеров фазы роста и влияния температуры на мембранныелипиды среди жирных кислот (ЖК) Bacillus subtilis нами был выбран штамм OSU-142(Karlidag et al., 2007; Slabbinck et al., 2009; Tighe et al., 2000).На рис.

2 представлены результаты определения ЖК состава общих липидовграмположительной бактерии B. subtilis OSU-142 в логарифмической фазе (24 чкультивирования) при различных температурах: 24 оС, 28 оС, 34 оС, 37 оС и 39 оС, а нарис. 3 ‒ в стационарной фазе (36 ч культивирования). На рис. 2 приведены величинысодержания (свыше 1%) жирных кислот с четным числом атомов углерода ‒ 14:0,15:0 изо, 15:0 антеизо, 16:0, 17:0 изо и 17:0 антеизо, которые составляют свыше 96%ЖК состава общих липидов известных бактерий.

Наибольший уровень характерендля С16 кислот ‒ 15:0 изо и 15:0 антеизо (Ибрагимова и др., 2012а).Рис. 2. Влияние температуры на жирнокислотный состав общих липидовграмположительной бактерии Bacillus subtilis штамма OSU-142 в логарифмической фазе(24 ч культивирования). По оси ординат – содержание жирной кислоты, %. По оси абсцисс –температура, оС, для следующих жирных кислот последовательно: 1 ‒ 14:0, 2 ‒ 15:0 изо, 3 ‒15:0 антеизо, 4 ‒ 16:0, 5 ‒ 17:0 изо, 6 ‒ 17:0 антеизо.15Из данных, представленных на рис. 2, следует, что содержание 14:0 кислоты ‒самое низкое (1‒1,3%) из всех детектируемых жирных кислот (она не определяетсяуже при 34 оС, 37 оС и 39 оС) (Ибрагимова и др., 2012а).На рис. 2 приведены значения содержания разветвленных С16 и С18 кислот впрофиле МЭЖК общих липидов Bacillus subtilis OSU-142 при различныхтемпературах и в зависимости от фазы роста.

Очевидно, что содержание изомера С16кислоты ‒ 15:0 антеизо ‒ максимально для данной бактерии и практически не зависитот температуры культивирования, что согласуется с ключевой ролью этой кислоты вдругих бактериях (Annous et al., 1997). Однако содержание 15:0 изо кислоты,оставаясь неизменным (в пределах интервала достоверности, 23‒26%) при 24 оС,28 оС и 34 оС, увеличивается до 29% при 37 оС и 39 оС.

Из данных, представленных нарис. 2, следует, что содержание С18 кислот – 17:0 изо и 17:0 антеизо – с температуройувеличивается: 17:0 изо с 12,5% при 24 оС до 18% при 39 оС, а 17:0 антеизо с 8% при24оС до 12% при 39оС (Ибрагимова и др., 2012а).Содержание неразветвленных 14:0 и 16:0 жирных кислот в общих липидахграмположительной бактерии B. subtilis OSU-142 уменьшается при повышенныхтемпературах 37 оС и 39 оС по сравнению с 24оС (табл.

1). Содержание разветвленныхС16 и С18 жирных кислот 15:0 изо, 17:0 изо и 17:0 антеизо с температуройувеличивается, в то время как содержание 15:0 антеизо изомера практически неизменяется. В качестве биомаркера влияния температуры на ЖК профиль штаммаOSU-142 B. subtilis в логарифмической фазе целесообразно использовать лишь одинпараметр, а именно соотношение 15:0 изо и 17:0 изо жирных кислот.На рис.

3 представлены данные по ЖК-составу общих липидов этой жебактерии после 36 ч культивирования, что соответствует ранней стационарной фазе.Основные жирные кислоты (МЭЖК профиля) представлены преимущественно темиже кислотами, за исключением 14:0 ‒ ее нет ни при 24 оС и 28 оС, ни при 37 оС. Встационарной фазе содержание 15:0 изо кислоты практически не изменяется стемпературой, уровень 15:0 антеизо уменьшается, а 16:0 кислота исчезает совсем при37 оС.

Содержание 17:0 изо и 17:0 антеизо кислот в стационарной фазе, так же как и влогарифмической фазе, увеличивается с температурой: от 24 оС к 37 оС, однако такойпараметр, как их соотношение (табл. 1), не может быть использован в качествемаркера (Ибрагимова и др., 2012а).16Таблица 1Биомаркеры и их соотношение в составе метиловых эфиров жирных кислот общихлипидов штамма грамположительной бактерии B. subtilis OSU-142 при различныхтемпературах и фазах ростаЖирныекислоты15:0 антеизо17:0 антеизо15:0 антеизо /17:0 антеизо15:0 изо /17:0 изо15:0 изо /15:0 антеизо1 7:0 изо /17:0 антеизо24 ºC41,47,55,5Фазы роста (содержание ЖК, %)Логарифмическая*Стационарная**28 ºC 34 ºC 37 ºC 39 ºC 24 ºC28 ºC37 ºC39,638,036,937,143,542,641,09,59,712,812,26,28,68,54,13,92,93,07,14,94,82,31,81,91,71,42,22,21,60,60,60,60,70,70,70,60,71,51,31,41,21,42,31,52,2* 24 ч культивирования.

** 36 ч культивирования.Рис. 3. Влияние температуры на жирнокислотный состав общих липидов грамположительнойбактерии Bacillus subtilis штамма OSU-142 при стационарной фазе (36 ч культивирования). Пооси ординат – содержание жирной кислоты, %. По оси абсцисс – температура, оС, дляследующих жирных кислот последовательно: 1 ‒ 15:0 изо, 2 ‒ 15:0 антеизо, 3 ‒ 16:0, 4 ‒ 17:0изо, 5 ‒ 17:0 антеизо.17Из приведенных данных (рис.

Характеристики

Список файлов диссертации