Диссертация (1150042), страница 8
Текст из файла (страница 8)
Однакоконцентрации многих минорных ЖК являются важными диагностическими маркерами,например, активности стеарил-КоА-, Δ6- и Δ5-десатураз, а также соотношение ω-6/ω-3 полиненасыщенных ЖК в крови связывают с риском возникновения сердечно-сосудистых заболеваний, инсулинорезистентностью и пр.В работе [121] исследовали поведение ЖК в плазме и эритроцитах при длительномхранении при сильной заморозке. После отбора крови у доноров, из нее получали плазмуи замораживали при -80 °С. Эритроциты трижды отмывали в буфере HEPES и также замораживали при -80 °С.
Перед заморозкой проанализировали жирнокислотный составпроб. Результаты исследования показали, что произошли изменения в составе ЖК в триглицеридах плазмы, а именно: уменьшение С14:1 на 0,11 мольн. % и увеличение C22:5ω-332на 0,04 мольн. %. При анализе эритроцитов после хранения наблюдалось несколько статистически значимых изменений по сравнению со свежими образцами, но изменения былиочень малы. Значительное увеличение было отмечено у С14:0, С15:0 и С22:5ω-3 кислот по0,07, 0,04 и 0,06 мольн.
%, соответственно. В целом исследования показали стабильностьЖК в плазме и эритроцитах при хранении их при -80 °С.В работе [122] было проведено исследование условий хранения цельной крови. Удобровольцев отбирали кровь в вакуумную пробирку с гепарином для предотвращения коагулирования. Затем аликвоту цельной крови объёмом 500 мкл отбирали в пробирку с добавленным бутилированным гидрокситолуолом (БГТ). Образцы хранились при -80 °С и-20 °С. Исследование показало отсутствие влияние условий хранения на общее содержаниеЖК. Однако были выявлены статистически значимые закономерности между содержаниемНЖК, ПНЖК и МНЖК в образцах, хранившихся в различных условиях.
Количество НЖКзначительно не отличались в образцах, хранившихся при разных температурах, в то времякак концентрации МНЖК уменьшались в пробах, хранившихся при -20°С по сравнению собразцами, хранившимся при -80°С. С другой стороны, концентрация ПНЖК, общая концентрация ω-6 и ω-9 ЖК и их индивидуальные значения были значительно выше в образцах,хранившихся при -20 °С, как в относительных величинах, так и в абсолютных.
В работе[123] указано, что добавка БГТ положительно влияет на стабильность ЖК в плазме припродолжительном хранении в условиях -20С, в особенности на суммарную концентрациюэйкозапентаеновой и догозагексаеновой кислот, являющуюсяся важным маркером ишемических болезней сердца [124,125].Влияние условий хранения на состав ЖК икры тунца и кефали исследован в работе[126]. Жирно-кислотный состав образцов изучали после 0, 15, 30, 90 и 180 дней храненияпри температуре +4 °C.
В образцах икры кефали содержание общего количества ЖК (НЖК,МНЖК и ПНЖК) с течением времени уменьшается. В то время как в икре тунца наблюдалинезначительное снижение в течении 30 дней ПНЖК, а затем резкое их уменьшается после90 и 180 дней наблюдений. Но при этом содержание НЖК м МНЖК увеличивалось на протяжении всего периода исследования. Например, содержание докозагексаеновой кислоты(C22:6n-3), которая являлась доминантной ПНЖК в икре, в течение исследования уменьшилось вдвое, а эйкозапентаеновой - на треть.
Обе ω-3 ЖК образуются путем элонгации идесатурирования альфа-линолевой кислоты [127] в организме. Также авторы обнаружилидостоверную корреляцию между изменениями концентраций некоторых классов ЖК (вбольшей степени ПНЖК) и биогенными аминами (БА) в течение продолжительного хранения. Амино-липидная корреляция имеет место как между общим содержанием БА и ЖК,так и конкретными полиаминами, такими как спермидин, спермин и ПНЖК.33Таким образом напрашивается вывод об имеющемся ряде противоречий в результатах оценки влияния условий хранения биологических образцов, что вынуждает провестисобственное исследование.
Одной из задач работы являлось установление влияния условийхранения на результаты хроматомасс-спектрометрического определения свободных и этерифицированных ЖК в плазме крови.1.4. Характеристика объектов исследования: химические соединения, потенциальновлияющие на метаболизм липидов в организме.Жирные кислоты являются общепринятым объектом медицинских исследований,являясь важным маркером патологий и тяжести метаболических нарушений. Однако в токсикологии им уделяется незаслуженно мало внимания, в то время как ЖК могут быть полезными как при контроле терапевтического процесса, так и при оценке тяжести отравления, понимании механизмов воздействия и возможных отставленных эффектах.
Поэтомуисследования влияния на жирнокислотный состав различных токсикантов и фармпрепаратов и сопоставление этого влияния с известными токсическими и фармацевтическими действиями представляются весьма актуальными.1.4.1 Фосфорорганические соединенияМеханизм токсического действия фосфорорганических соединений (ФОС) обусловлен, главным образом, фосфорилированием сериновых фрагментов в активных центрахацетилхолинэкстеразы (AChE, EC 3.1.1.7) и, соответственно, ингибировании этого фермента [128].
AChE катализирует гидролиз нейротрансмиттера ацетилхолина с образованием холина и ацетата в ходе передачи нервного сигнала. Однако помимо AChE, в человеческом организме присутствует более 1000 сериновых гидролаз, и большая их часть не охарактеризована физиологическими функциями. По разным оценкам, около 50 из них могутявляться мишенями для ФОС. Профиль ингибирования различными ФОС для каждой гидролазы неодинаков [129]. Среди наиболее изученных можно выделить NTE (neuropathy target esterase, EC 3.1.1.5), деацилирущую фосфатидилхолины в мембранах [130,131], олеамидгидролазу (FAAH, EC 3.5.1.99), моноацилглицероллипазу (MAGL, EC 3.1.1.23) [132],лецитилхолестеролацилтрансферазу (LCAT, EC 2.3.1.43) [133], NTE-R (EC 3.1.1.5),KIAA1363 (EC 3.1.1.13), гормон-чувствительную липазу (HSL, EC 3.1.1.79).
Некоторые липазы участвуют и в детоксификации ФОС в организме, так KIAA1363 гидролизует хлорпирифос-оксон и параоксон до диалкилфосфатов [134].Помимо нейротоксичности, ФОС вызывают различные физиологические отклонения, включая центрально-периферическую дистальную сенсомоторную аксонопатию, из34вестную как отставленный нейротоксический эффект (ОНЭ) [135] или ФОС-индуцированная отставленная полинейропатия (ОПН) [136], которая может не сопровождаться снижением активности эритроцитарной AChE [137].
ФОС могут вызывать иммунотоксичность[138] и окислительный стресс [139], кроме того, они могут влиять на клеточный метаболизмуглеводов и липидов и приводить к инсулино-резистентности и нарушениям гомеостазаглюкозы [140,141]. Экспонирование ФОС приводит повышению уровня глюкозы в сыворотке крови [142], вызывая гипергликемию [143].
В качестве объяснения возможных механизмов нарушения гомеостаза глюкозы предполагают стимуляцию глюкогенеза и гликогенолиза в печени или активацию гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой оси.Таблица 5 - Известные факты влияния ФОС на метаболизм липидовДоза, (LD50***), способ Орган илиФОСЭффектСсылкавведения, животныеобразецДиазинон128мг/кг,(300-400 Плазма24 часа: ОХ≈*, ФЛ↓, [144]мг/кг), per os, крысыЛПВП-Х↓, ЛПНП↑,ТГ↑Малатион400 мг/кг (5400-5700 ПлазмаЛПВП≈,ОХ↓**, [145]мг/кг), per os, крысыЛПНП↑, ТГ↑Хлорпирифос50 мг/кг (95-270 мг/кг), Плазмаподкожно, крысыФенитротион50 мг/кг (250-800 мг/кг), Плазмаподкожно, мыши0,04-0,36мг/кг/день Плазма(180-330 мг/кг), per os,крысы12 мг/кг (25-80 мг/кг), в СывороткаДМСО в глаза, кроликиДиметоатДихлофосХлорфенвинфос 0,3 мг/кг (9,6-39 мг/кг),внутрижелудочно,крысы, 14 дней подрядЗоман100 мкг/кг, подкожно,крысы0,4ЛД50 дважды с интервалом 1 часRVX0,4ЛД50 дважды с интервалом 1 часМозгМозг8-24 часа: ЛПВП↓, [146]ОХ≈ЛПНП↑, ТГ↑ТГ↑ в 1,7 раз[132]Арахидоновая к-та↓, [147]Сфингозины↓, ЛизоФХ↑ЛПВП↑ Tmax 4 ч, [148]ЛПНП↓ Tmin 4 ч,ЛПОНП≈,ТГ↑,ЭЖК↑ Tmax 24 ч,СЖК↓ - тенденцияТГ↑ на 73%, ФЛ↓ на [149]22%, СЖК≈, ОХ≈СЖК↑[204]Сыворотка ТГ≈[137]Сыворотка ТГ≈[137]Примечание: * - не изменялся, ** - быстро восстановился до нормы, *** - per os для крыс.Сокращения: ФЛ – фосфолипиды, ОХ – общий холестерол, ЛПВП – липопротеины высокой плотности,ЛПНП – липопротеины низкой плотности, ТГ – триглицериды, ДГ – диглицериды, ЛПВП-Х – холестеролЛПВП, ФХ – фосфатидилхолины, СЖК – свободные ЖК.В дополнение к гипергликемиии, некоторые авторы [150,151] указывают на гиперлипидемию, а именно на увеличение концентрации триглицеридов в крови при отравлении35ФОС.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
