Главная » Просмотр файлов » Автореферат

Автореферат (1145916), страница 4

Файл №1145916 Автореферат (Гены WOX и PIN в регуляции соматического эмбриогенеза у Medicago truncatula) 4 страницаАвтореферат (1145916) страница 42019-06-29СтудИзба
Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 4)

При этом изменения в экспрессии других генов,ассоциированных с СЭ, также имеют место в каллусах со сверхэкспрессией STF, однакоони происходят только на поверхности каллуса – там, где формируются соматическиеэмбрионы, поэтому их невозможно выявить, измеряя уровень экспрессии в каллусахцеликом.Аналогичный эксперимент мы провели, используя каллусы растений с потерей функциигена STF (генотип stf) (25 шт.) и, в качестве контроля, каллусы дикого типа (29 шт.) Кнашему удивлению, потеря функции STF не снизила эмбриогенность каллусов и дажепривела к небольшому увеличению степени эмбриогенности (p<0,05) (данные непредставлены).Мы также измерили уровни экспрессии 25 предполагаемых генов-мишеней STF в СЭ вэтих каллусах и сравнили их с таковыми в каллусах дикого типа на стадии 60 дней смомента начала культивирования, однако различий не выявили (данные не представлены).Таким образом, в результате анализа интенсивности СЭ у растений со сверхэкспрессиейи с потерей функции гена STF, мы показали, что приобретение функции STF приводит кувеличению эмбриогенности, а потеря функции STF не снижает эмбриогенность.Следовательно, хотя STF, вероятнее всего, участвует в СЭ, его функции не являютсянеобходимыми для этого процесса.2.2.2.

Анализ способностей к СЭ у растений со сверхэкспрессией гена MtWOX9-1Мы получили каллусы растений со сверхэкспрессией MtWOX9-1 и сравнилиинтенсивность СЭ у них с таковой у каллусов растений дикого типа. Былопроанализировано 20 каллусов со сверхэкспрессией MtWOX9-1 и 24 каллуса дикого типа.Интенсивность СЭ, измеренная аналогично предыдущим экспериментам, у каллусов сосверхэкспрессией MtWOX9-1 была приблизительно в два раза выше, чем у каллусов дикоготипа (p<0,01) (Рисунок 9).Рисунок 9. (а) Каллусы собразующимисясоматическимиэмбрионами(60денькультивации).Верхнийряд—каллусысосверхэкспрессиейMtWOX9-1.

Нижний ряд —каллусы дикого типа. (б)Средняя доля поверхности каллуса, занимаемая эмбрионами, у каллусов дикого типа икаллусов со сверхэкспрессией MtWOX9-1. Ошибки отражают доверительные интервалы,рассчитанные с помощью t-критерия Стьюдента (уровень значимости 0,05).С целью поиска предполагаемых генов-мишеней MtWOX9-1 в ходе СЭ, мы измерилиуровни экспрессии нескольких генов, экспрессия которых, согласно нашим данным,ассоциирована с СЭ, на стадиях 30 и 60 дней с момента начала культивации. Мы взяли ванализ следующие гены: MtWOX11-like, STF, SLM1, MtAGL15, MtSHR и MtLEC1A. Вотличие от каллусов с изменённым уровнем экспрессии гена STF, в данном случае всеанализируемые нами гены изменяли характер экспрессии в каллусах со сверхэкспрессиейMtWOX9-1 (Рисунок 10).Рисунок 10. Уровни экспрессии генов MtWOX11-like (а), STF (б), SLM1 (в), MtAGL15 (г),MtSHR (д), MtLEC1A (е) в каллусах дикого типа (серые столбцы) и каллусах сосверхэкспрессией MtWOX9-1 (белые столбцы) на сроках культивирования 30 дней и 60 дней.Планки погрешностей указывают стандартные отклонения.

Эксперимент проводили в двухбиологических повторностях.В настоящий момент сложно сказать, является ли какой-либо из исследованных геновмишенью MtWOX9-1 в ходе СЭ. Скорее всего, изменения уровня экспрессии большинстваих них являются следствием изменённого состояния каллуса, а не непосредственнойактивации транскрипции за счёт MtWOX9-1.Дальнейший более подробный анализ, в частности, полный анализ транскриптомакаллуса со сверхэкспрессией MtWOX9-1, позволит выявить другие гены с изменённойэкспрессией и, возможно, мишени этого ТФ.2.2.3.

Анализ способностей к СЭ у растений с потерей функции гена MtWOX11-likeДля изучения функций гена MtWOX11-like мы приобрели семена растений,предположительно содержащих вставку транспозона Tnt1 в этом гене, из коллекцииинсерционных мутантов M. truncatula (http://medicago-mutant.noble.org/mutant/) (Tadege etal., 2008) – линию NF8274. Затем с помощью генотипирования мы выявили растения,гомозиготные по потере функции MtWOX11-likeМы получили каллусы этих растений и сравнили интенсивность СЭ с таковой у каллусоврастений дикого типа. Было проанализировано 60 каллусов mtwox11-like и 17 каллусовдикого типа. Нам не удалось выявить каких-либо различий в интенсивности СЭ междумутантными растениями и диким типом (данные не представлены).Таким образом, несмотря на активацию экспресcии в ходе СЭ, функции MtWOX11-like неявляются необходимыми для этого процесса.

Возможно, другие ТФ из семейства WOXвыполняют ту же роль в СЭ и замещают действие MtWOX11-like в случае потери егофункции.2.3. Поиск белков, взаимодействующих с транскрипционными факторами STF иMtWOX9-1 и важных для СЭС помощью дрожжевой двугибридной системы мы проверили взаимодействие ТФ STF иMtWOX9-1 с другими ТФ, которые, предположительно, участвуют в эмбриогенезе. Мывыбрали гены M.

truncatula MtBBM1 (Medtr7g080460), MtBBM3 (Medtr4g065370),MtAGL15A (Medtr4g109830), MtSHR (Medtr4g097080), MtLEC1A(Medtr1g039040),MtMINI3(Medtr3g009470), MtFUS3(Medtr7g059330), близкие гомологи соответствующихгенов A. thaliana, согласно базе данных Phytozome.Согласно полученным нами данным, STF и WOX9-1 не взаимодействуют с MtBBM1,MtBBM3, MtMINI3, MtFUS3, MtSHR и MtAGL15, однако они оба взаимодействуют сMtLEC1A (Рисунок 11). Наблюдаемое взаимодействие STF и WOX9-1 с MtLEC1A, повидимому, не является ложноположительным результатом, поскольку аналогичныйэксперимент, проведённый с вектором, содержащим кодирующую область MtLEC1A, иконтрольным вектором (pGBKT7), не привёл к росту колоний дрожжей на селективнойсреде (данные не представлены).Рисунок 11.

Результаты анализа взаимодействия белков с использованием дрожжевойдвугибридной системы. Рост колонии S. cerevisiae на селективной среде указывает навзаимодействие указанных в таблице белков.Далее мы проверили взаимодействие STF и MtWOX9-1 с MtLEC1A с помощью методаBiFC (бимолекулярная флуоресцентная комплементация). Для этого мы клонироваликодирующую последовательность гена MtLEC1A в векторы pEarleygate201-YN иpEarleygate202-YC, присоединив таким образом к ней последовательность, кодирующуюлибо N-терминальный, либо C-терминальный фрагмент флуоресцентного белка YFP.ПлазмидыpEarleygate201-YN+STF,pEarleygate202-YC+STF,pEarleygate201-YN+MtWOX9-1, pEarleygate202-YC+MtWOX9-1, содержащие N- илиС-терминальные фрагменты YFP и кодирующие последовательности генов STF иMtWOX9-1, были любезно предоставлены доктором Миллионом Тадеге, ГосударственныйУниверситет Оклахомы, США).Затем мы трансформировали листья Nicotiana benthamiana четырьмя сочетаниями этихплазмид:1) pEarleygate201-YN+MtWOX9-1 и pEarleygate202-YC+MtLEC1A2) pEarleygate202-YC+ MtWOX9-1 и pEarleygate201-YN+MtLEC1A3) pEarleygate201-YN+STF и pEarleygate202-YC+MtLEC1A4) pEarleygate202-YC+STF и pEarleygate201-YN+ MtLEC1AТаким образом, в случае взаимодействия анализируемых в клетках табака образовывалсябы полноценный белок YFP, способный к свечению.Полученные результаты не подтвердили взаимодействие STF и MtLEC1A (данные непредставлены), однако взаимодействие MtWOX9-1 и MtLEC1A подтвердилось в обоихисследованныхсочетаниях(MtWOX9-1+С-терминальныйконецYFPиMtLEC1A+N-терминальный конец YFP, и наоборот) (Рисунок 12).Рисунок 12.

Результаты бимолекулярной флуоресцентной комплементации. а. Клетки N.benthamiana, трансформированные конструкциями pEarleygate201-YN+MtWOX9-1 иpEarleygate202-YC+MtLEC1A.б.КлеткиN.benthamiana,трансформированныеконструкциями pEarleygate202-YC+ MtWOX9-1 и pEarleygate201-YN+MtLEC1A. Желтоесвечение ядер указывает на образование функционального белка YFP вследствиевзаимодействия указанных транскрипционных факторов.Таким образом, MtWOX9-1 взаимодействует с MtLEC1A в клетках растений.2.3.1. Анализ функций гена MtLEC1A в СЭДля изучения функций гена MtLEC1A мы приобрели семена растений,предположительно содержащих вставку транспозона Tnt1 в этом гене, из коллекцииинсерционных мутантов M.

truncatula (http://medicago-mutant.noble.org/mutant/) (Tadege etal., 2008) – линию NF7292.С помощью генотипирования имеющихся у нас растений линии NF7292 мы получили дварастения, являющихся гомозиготными мутантами по гену MtLEC1A. Одно из двухполученных гомозиготных растений было стерильным.Интенсивность СЭ у растений с потерей функции MtLEC1A была значительно снижена.Из 17 каллусов с потерей функции MtLEC1A, на 60 день после начала культивации лишь 2каллуса имели соматические эмбрионы, в то время как из 23 каллусов растений дикого типав этом эксперименте на таких сроках соматические эмбрионы наблюдались на 21 каллусе(Рисунок 13).Рисунок 13. Оценка способностей к СЭ у растений спотерей функции гена MtLEC1A (а) Каллусы дикого типа(65 дней после начала культивации) (б) Каллусы mtlec1a(65 дней после начала культивации).Полученные данные позволяют предполагать наличиеважной роли MtLEC1A в СЭ, но не доказывают его.Растения из используемой нами коллекции мутантовсодержат вставки транспозона Tnt1 во множестве локусов,и существует возможность того, что мутантный фенотипопосредован наличием вставки в каком-либо другом местегенома.

Анализ большей выборки мутантов, а также вставка в геном мутантовфункциональной копии MtLEC1A помогут подтвердить или опровергнуть нашипредположения.Близким гомологом гена MtLEC1A является ген LEC1 A. thaliana, для которого былопоказано непосредственное участие в развитии эмбриона.LEC1 является одним из немногих ТФ, которые определяют не только развитиеопределённых органов или тканей у эмбриона, не только конкретные стадии эмбриогенеза,но и наличие эмбриональных черт в целом.

Характеристики

Тип файла
PDF-файл
Размер
657,22 Kb
Предмет
Высшее учебное заведение

Список файлов диссертации

Гены WOX и PIN в регуляции соматического эмбриогенеза у Medicago truncatula
Свежие статьи
Популярно сейчас
Почему делать на заказ в разы дороже, чем купить готовую учебную работу на СтудИзбе? Наши учебные работы продаются каждый год, тогда как большинство заказов выполняются с нуля. Найдите подходящий учебный материал на СтудИзбе!
Ответы на популярные вопросы
Да! Наши авторы собирают и выкладывают те работы, которые сдаются в Вашем учебном заведении ежегодно и уже проверены преподавателями.
Да! У нас любой человек может выложить любую учебную работу и зарабатывать на её продажах! Но каждый учебный материал публикуется только после тщательной проверки администрацией.
Вернём деньги! А если быть более точными, то автору даётся немного времени на исправление, а если не исправит или выйдет время, то вернём деньги в полном объёме!
Да! На равне с готовыми студенческими работами у нас продаются услуги. Цены на услуги видны сразу, то есть Вам нужно только указать параметры и сразу можно оплачивать.
Отзывы студентов
Ставлю 10/10
Все нравится, очень удобный сайт, помогает в учебе. Кроме этого, можно заработать самому, выставляя готовые учебные материалы на продажу здесь. Рейтинги и отзывы на преподавателей очень помогают сориентироваться в начале нового семестра. Спасибо за такую функцию. Ставлю максимальную оценку.
Лучшая платформа для успешной сдачи сессии
Познакомился со СтудИзбой благодаря своему другу, очень нравится интерфейс, количество доступных файлов, цена, в общем, все прекрасно. Даже сам продаю какие-то свои работы.
Студизба ван лав ❤
Очень офигенный сайт для студентов. Много полезных учебных материалов. Пользуюсь студизбой с октября 2021 года. Серьёзных нареканий нет. Хотелось бы, что бы ввели подписочную модель и сделали материалы дешевле 300 рублей в рамках подписки бесплатными.
Отличный сайт
Лично меня всё устраивает - и покупка, и продажа; и цены, и возможность предпросмотра куска файла, и обилие бесплатных файлов (в подборках по авторам, читай, ВУЗам и факультетам). Есть определённые баги, но всё решаемо, да и администраторы реагируют в течение суток.
Маленький отзыв о большом помощнике!
Студизба спасает в те моменты, когда сроки горят, а работ накопилось достаточно. Довольно удобный сайт с простой навигацией и огромным количеством материалов.
Студ. Изба как крупнейший сборник работ для студентов
Тут дофига бывает всего полезного. Печально, что бывают предметы по которым даже одного бесплатного решения нет, но это скорее вопрос к студентам. В остальном всё здорово.
Спасательный островок
Если уже не успеваешь разобраться или застрял на каком-то задание поможет тебе быстро и недорого решить твою проблему.
Всё и так отлично
Всё очень удобно. Особенно круто, что есть система бонусов и можно выводить остатки денег. Очень много качественных бесплатных файлов.
Отзыв о системе "Студизба"
Отличная платформа для распространения работ, востребованных студентами. Хорошо налаженная и качественная работа сайта, огромная база заданий и аудитория.
Отличный помощник
Отличный сайт с кучей полезных файлов, позволяющий найти много методичек / учебников / отзывов о вузах и преподователях.
Отлично помогает студентам в любой момент для решения трудных и незамедлительных задач
Хотелось бы больше конкретной информации о преподавателях. А так в принципе хороший сайт, всегда им пользуюсь и ни разу не было желания прекратить. Хороший сайт для помощи студентам, удобный и приятный интерфейс. Из недостатков можно выделить только отсутствия небольшого количества файлов.
Спасибо за шикарный сайт
Великолепный сайт на котором студент за не большие деньги может найти помощь с дз, проектами курсовыми, лабораторными, а также узнать отзывы на преподавателей и бесплатно скачать пособия.
Популярные преподаватели
Добавляйте материалы
и зарабатывайте!
Продажи идут автоматически
6392
Авторов
на СтудИзбе
307
Средний доход
с одного платного файла
Обучение Подробнее