Диссертация (1145852), страница 13
Текст из файла (страница 13)
Относительный уровень мРНК гена LXRß в макрофагах,активированных M-CSF, после 5 суток культивирования у пациентов сатеросклерозом (N=15) и в контрольной группе (N=19), * p<0.001. Нормированиерезультатов проведено с помощью измерений соответствующих показателей длягена ß-актина. Ось абсцисс - исследуемые группы; ось ординат - относительныйуровень мРНК (отн. ед.).85Рисунок 20.
Относительный уровень мРНК гена PPARγ в макрофагах,активированных M-CSF, после 5 суток культивирования у пациентов сатеросклерозом (N=15) и в контрольной группе (N=19), * p<0.001. Нормированиерезультатов проведено с помощью измерений соответствующих показателей длягена ß-актина. Ось абсцисс - исследуемые группы; ось ординат - относительныйуровень мРНК (отн. ед.).86Уровень мРНК LXRα в макрофагах в исследуемых группах не отличался,(p=0.06) (Рисунок 21). Медиана 0.58 (мин-макс 0.12-1.30) и 0.82 (мин-макс 0.341.77) для группы пациентов с атеросклерозом и контрольной группы,соответственно.Рисунок 21.
Относительный уровень мРНК гена LXRα в макрофагах,активированных M-CSF, после 5 суток культивирования у пациентов сатеросклерозом (N=15) и в контрольной группе (N=19). Нормирование результатовпроведено с помощью измерений соответствующих показателей для гена ß-актина.Ось абсцисс - исследуемые группы; ось ординат - относительный уровень мРНК(отн.
ед.).Известно, что ядерные рецепторы, такие как PPARγ и LXRα/LXRßмодулируют атерогенез на различных его стадиях – от аккумуляции липидов87макрофагами до локального воспалительного ответа (Soumian et al., 2005).Несмотря на наличие большого количества информации о роли LXRα, LXRβ иPPARγ как противовоспалительных и антиатерогенных медиаторах, в настоящеевремя практически нет данных о роли экспрессии данных генов в развитииатеросклероза.Поэтому мы провели определение уровня мРНК этих транскрипционныхфакторов в макрофагах, активированных колониестимулирующим фактором МCSF.Было показано статистически значимое снижение содержания PPARγ мРНКв макрофагах, после 5 суток культивирования у пациентов с атеросклерозом посравнению с контрольной группой. Полученные данные могут свидетельствоватьо том, что уменьшение уровня мРНК PPARγ может быть ассоциировано сразвитием атеросклероза.Как было продемонстрировано ранее, PPARγ вносит вклад в процессрегуляции дифференциации моноцитов в макрофаги (Tontonoz et al., 1998).
Влитературе существуют значительные противоречия относительно роли PPARγ вразвитии атеросклероза. Наши данные согласуются с результатами, в которых былоотмечено снижение уровня экспрессии PPARγ в атеросклеротических бляшках(Soumian et al., 2005) и в макрофагах, коррелировавшее с прогрессиейатеросклероза (Giaginis et al., 2011). С другой стороны, было показано значительноеповышение содержания PPARγ в макрофагах человека при атеросклерозе (Amorusoet al., 2009).
В исследовании Pucci и соавт. было отмечено повышение экспрессиигена PPARγ как в моноцитах, так и в атеросклеротических бляшках (Pucci et al.,2011). Однако данное увеличение уровня мРНК гена PPARγ было показано на фонеприема статинов, которое не наблюдалось у лиц, вошедших в наши выборки. Вработе Sueyoshi и др. (Sueyoshi et al., 2010) также было выявлено, что уровеньPPARγ мРНК в атероматозных бляшках был достоверно выше, чем содержаниеPPARγ мРНК в интиме сосуда. Таким образом, вышеприведенные исследованияставят вопрос о том, является ли повышение экспрессии PPARγ положительно88модулирующимфакторомразвитияатеросклероза,фактором,негативновлияющим на атерогенез или не имеющим прямой патофизиологической роли вэтом процесс.
В пользу того, что повышение экспрессии гена PPARγ имеетположительное влияние на развитие атеросклероза, свидетельствуют данные о том,что активация PPARγ способствует дифференциации моноцитов человека в антивоспалительные М2 макрофаги (Bouhlel, 2007). Кроме того, существованиеположительной корреляции между уровнем мРНК гена PPARγ и маркерами М2макрофаговватеросклеротическихбляшкахтакжеможетслужитьдоказательством данного предположения (Bouhlel, 2007). В недавно проведенноммета-анализе, было показано, что снижение экспрессии гена PPARγ на фоненосительства аллельного варианта 12A (P12A) гена PPARγ, повышает рискразвития ССЗ (Wu et al., 2012).
Вышеизложенные результаты дают возможностьпредположить, что экспрессия PPARγ может быть связана с формированиематеросклеротических бляшек и PPARγ участвует в ранних стадиях развитияатеросклероза у человека.В настоящей работе для определения роли изменения уровня экспрессииLXRα, LXRβ у лиц с атеросклерозом мы провели анализ уровня мРНК LXRα и LXRβв макрофагах пациентов с атеросклерозом по сравнению с контрольной группой.LXR играют ключевую роль в патогенезе атеросклероза, регулируяэкспрессию важных генов, вовлеченных в липидный гомеостаз и воспалительнуюреакцию в макрофагах (Bensinger et al., 2008; Oosterveer et al., 2010).
Более тогоустановлено, что LXR ингибируют атеросклероз in vitro и in vivo (Calkin et al.,2012). При этом было продемонстрировано, что активация LXR увеличивает ОТХза счет усиления экспрессии транспортеров ABCA1 и ABCG1 в макрофагах, чтоотражает механизм LXR-зависимой защиты от атеросклероза (Calkin et al., 2012).Кроме того, в мировой литературе есть данные, указывающие на то, что не толькоОТХ из макрофагов является средством реализации антиатерогенного потенциалаLXR. В отсутствии транспортеров ABCA1 и ABCG1 активация LXR приводила кснижению степени тяжести атеросклеротического повреждения сосудов и89уменьшению воспаления у ЛНП -/- мышей с ABCA1 -/- и ABCG1-/- в макрофагах(Kappus et al.,2014).
В целом, наши результаты согласуются с этими данными,указывающими на то, что влияние LXR может не вносить существенного вклада науровень ABCA1 и антиатерогенный потенциал LXR может реализоваться путемвлияния на воспалительные процессы (Kappus et al.,2014).В нашем исследовании установлено сниженное содержания мРНК LXRβ вмакрофагах, активированных M-CSF, после 5 суток культивирования у пациентовс атеросклерозом по сравнению с контрольной группой, в то время как всодержании мРНК LXRα разница не показана, что может свидетельствовать овлиянии экспрессии LXRβ в развитии атеросклероза.В недавней работе Shchelkunova с соавторами было показано, увеличениеэкспрессии гена LXRβ в макрофагах, нагруженных модифицированными ЛПНП, посравнению с контрольными макрофагами (Shchelkunova et al., 2013). Необходимоотметить, что взаимодействие с модифицированными ЛПНП существенноусиливает воспалительный потенциал макрофагов и дальнейшую аккумуляциюлипидов.
Также влияние повышенной концентрации эфиров холестерина в клеткена уровень экспрессии генов ядерных рецепторов LXR подтверждаются в работеAlbrehch и соавторов. Так, в атеросклеротических бляшках сосудов уровень мРНКгена LXRα был повышен по сравнению со здоровыми артериями (Albrecht et al.,2004). Таким образом, данные о взаимосвязи уровня экспрессии генов LXR и уровняхолестерина в клетке могут объяснять снижение содержания мРНК LXRβ вмакрофагах после 5 суток культивирования у пациентов с атеросклерозом посравнению с контрольной группой наблюдаемое в нашем исследовании.Суммируя наши результаты, можно предположить, что уровни экспрессиигенов LXRß и PPARγ в макрофагах могут быть значимыми факторами,ассоциированными с развитием атеросклероза.903.6 Корреляция между содержанием липидов в плазме крови и уровнеммРНК ABCА1, LXRα, LXRβ, MMP-9, PPARγ и уровнем белка ABCA1При анализе вклада уровня мРНК ABCА1, LXRα, LXRβ, PPARγ, MMP-9 иуровня белка ABCА1 в макрофагах, активированных M-CSF, на развитиеатеросклероза была оценена их корреляция с показателями липидного обмена.В контрольной группе мы обнаружили корреляцию уровня мРНК ABCA1 вмакрофагах, с уровнем Х-ЛПВП (коэффициент корреляции r =0.74, p <0.05)(Рисунок 22).
Такой корреляции в группе пациентов не было. Не обнаруженовыраженных корреляций между уровнем Х-ЛПВП и уровнем белка ABCA1 вмакрофагах и у лиц контрольной группы, и у пациентов.Рисунок 22. Корреляция между уровнями мРНК ABCA1 и Х-ЛПВПмакрофагов контрольной группы (r = 0.74, p <0.05).91В то же время есть данные, что лица с экстремально низкими уровнем ХЛПВП плазмы крови (менее 0.9 ммоль/л у мужчин, менее 1.1 ммоль/л у женщин)характеризуются пониженным уровнем экспрессии гена ABCA1 в макрофагах(Holven et al., 2013).Действительно, в настоящее время, опосредованный транспортером ABCA1отток холестерина, рассматривается как один из ключевых моментов образованияпре-β-ЛПВП и, следовательно, концентрации Х-ЛПВП в плазме крови (Oram,2002).
При дефекте транспортера ABCA1 обедненные липидами частицы апо АI нетрансформируются в пре-β-ЛПВП и далее в нативную форму ЛПВП. Былоотмечено, что нокаут ABCA1 в тонком кишечнике мышей сопровождаетсяснижением уровня Х-ЛПВП на 30%, а при одновременном нокауте ABCA1 как втонком кишечнике, так и в печени уровень Х-ЛПВП был уменьшен на 90%(Brunham et al., 2006). В работе Singaraja и соавторы было показано, чтоальтернативный промотор в интроне 1 гена ABCA1 приводит как к повышеннойэкспрессии гена ABCА1, так и к возрастанию уровня ЛПВП, что в свою очередьдает основание предположить связь между уровня мРНК ABCA1 и уровнем ЛПВП(Singaraja et al., 2001). Кроме того, в этой работе была также выявлена линейнаякорреляция между транспортом холестерина из макрофагов и уровнем ЛПВП вплазме крови, что свидетельствует о прямой ассоциации между повышеннымуровнем оттока холестерина из клеток и пропорциональном увеличением уровняЛПВП in vivo (Singaraja et al.
, 2001).Таким образом, вышеизложенные результаты могут указывать на то, чтовысокий уровень экспрессии ABCA1 может индуцировать образование частицЛПВП (Denis et al. 2003), однако механизм влияния уровня мРНК ABCA1 вмакрофагах на уровень Х-ЛПВП в плазме крови остается не до конца изученным.Наше исследование продемонстрировало отсутствие корреляции уровняэкспрессии генов LXRα, LXRß, PPARγ и MMP-9 с показателями липидного спектракрови. Логично предположить, что только уровень мРНК генов ядерныхрецепторов и MMP-9 не определяет концентрацию липидов плазмы крови.92Полученные данные свидетельствует, что в липидный обмен вовлечены многиефакторы, и нет прямой связи между показателями липидного спектра крови суровнем транскрипционных факторов.ЗаключениеНами было показано, что вариант G319 гена АВСА1 снижает относительныйриск развития атеросклероза у жителей Санкт-Петербурга.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
