Главная » Просмотр файлов » Диссертация

Диссертация (1145852), страница 11

Файл №1145852 Диссертация (Экспрессия генов транскрипционных факторов LXRalpha, LXRbeta, PPARgamma и транспортера ABCA1 при атеросклерозе) 11 страницаДиссертация (1145852) страница 112019-06-29СтудИзба
Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 11)

В нашей работе был показан пониженныйотносительный риск развития атеросклероза у носителей варианта G319 генаАВСА1 по сравнению с лицами, у которых отсутствует вставка нуклеотида G в 319положении гена АВСА1 (OR = 0.55 (95%ДИ: 0.86 – 0.35)). Таким образом, вносительствоаллелиG319генаАВСА1ассоциированососнижениемотносительного риска развития атеросклероза в популяции Санкт-Петербурга.Ассоциации полиморфных вариантов гена ABCA1 с показателями липидногоспектра плазмы крови ни в группе пациентов, ни в контрольной группе выявленоне было.Ранее в исследовании Zwarts и соавт. было показано, что носительство аллелиG в положении 319 гена АВСА1 ассоциировано со снижением локального идиффузного атеросклероза по сравнению с вариантом, когда аллель G в положении319 отсутствовала (Zwarts et al., 2002).

Однако механизмы, объясняющиефункциональный эффект этого варианта на развитие и прогрессированиеатеросклероза, остаются в настоящее время не изученными. Поскольку вариант319insG расположен в 5`-нетранслируемой области гена АВСА1, возможнопредположить, что вставка нуклеотида G в 319 положении гена АВСА1 можетзатрагивать регуляторные элементы, отвечающие за стабильность мРНК генаАВСА1. Что, в свою очередь, может приводить как к измененной экспрессии генаАВСА1, так и, соответственно, влиять на эффективность ОТХ. Однако работы,направленные на выявление ассоциации между носительством варианта G вположении 319 гена АВСА1 с концентрацией и активностью АВСА1 транспортера,не проводились.

Для выяснения механизмов, обусловливающих возможные72антиатерогенные свойства варианта 319insG гена АВСА1, необходимы дальнейшиеисследования.3.2 Уровень мРНК гена ABCА1 в макрофагах, активированных М-CSFисследуемых группАнализ литературы показывает, что ОТХ является ключевых звеномлипидного обмена в макрофагах. Поскольку транспортер холестерина ABCA1необходим для обеспечения эффективного ОТХ, можно предположить, что приразвитии атеросклероза экспрессия гена ABCA1 в макрофагах может бытьизменена.В настоящем исследовании для измерения уровня мРНК ABCA1 был созданбанк макрофагов, активированных фактором M-CSF. Уровень мРНК гена ABCA1через 5 суток культивирования клеток в присутствии M-CSF определяли методомколичественной ПЦР в режиме реального времени с флуоресцентными зондамиTaqMan на приборе CFX96 Touch (BioRad, США). Во всех экспериментахприменяли метод стандартных кривых.Значения уровня мРНК гена ABCA1, нормированного на соответствующиепоказатели для референсного гена, представлены на Рисунок 14.

Мы показали, чтов макрофагах пациентов с атеросклерозом уровень мРНК ABCA1 (медиана 1.60(мин-макс 0.83-2.73)) повышен по сравнению с макрофагами лиц контрольнойгруппы (медиана 0.66 (мин-макс 0.15-1.66)) (p <0.001). Повышение уровня мРНКгена ABCA1 указывает на измененную экспрессию гена АВСА1 и, соответственно,может модифицировать эффективность ОТХ и влиять на темпы атерогенеза.73Рисунок 14. Относительный уровень мРНК гена ABCA1 в макрофагах,активированных M-CSF, после 5 суток культивирования у пациентов сатеросклерозом (N=15) и в контрольной группе (N=19), * p<0.001. Нормированиерезультатов проведено с помощью измерений соответствующих показателей длягена ß-актина. Ось абсцисс - исследуемые группы; ось ординат - относительныйуровень мРНК (отн. ед.)Показано, что нокаут ABCA1 в макрофагах мышей сопровождаетсяусилением атеросклеротических повреждений сосудов.

У мышей с нокаутом генаABCA1 выявлялось усиление отложения липидов в макрофагах сосудистой стенкибез изменений уровня липидов в плазме крови (Yvan-Charvet et al., 2007). При этомтрансплантация костного мозга от мышей с нокаутом гена АВСА1 мышам свыключенным геном рецептора к холестерину низкой плотности (стандартноймодели атеросклероза) приводит к увеличению степени атеросклеротическихповреждений сосудов, не влияя на уровень Х-ЛПВП в плазме крови (Van Eck et al.,742002). В то же время мыши, которым был трансплантирован костный мозг отмышей линии с гиперэкспрессией гена АВСА1, характеризовались уменьшениемстепени атеросклеротических повреждений сосудов (Van Eck et al., 2006).

Крометого, были получены результаты о значительном уменьшении in vivo ОТХ вмакрофагах АВСА1-дефицитных мышей (Wang et al., 2007). Таким образом,исследование экспрессии гена ABCA1 именно в макрофагах актуально дляизучения развития атеросклероза.Интересно, что в работе Sivapalaratnam и соавт. напротив, было отмеченоснижение экспрессии гена ABCA1 в циркулирующих моноцитах у пациентов,страдающих коронарной болезнью сердца и перенесших инфаркт миокарда вмолодом возрасте (до 40 лет) (Sivapalaratnam et al., 2012). Этот результат мог бытьобусловлен тем, что все пациенты, принявшие участие в этом исследовании,принимали симвастатин (Sivapalaratnam et al., 2012).

В то же время известно, чтостатитны, к которым относится и симвастатин, снижают экспрессию генов ABCA1и ABCG1 в моноцитах у человека (Wong et al., 2008; Genvigir et al., 2010). Важноотметить, что в нашем исследовании пациенты не получали статинов и другихгиполиподемических препаратов, что дает возможность адекватной оценкиассоциации уровня мРНК гена ABCA1 и развитием атеросклероза. Кроме того,показано что популяции макрофагов в организме человека отличаютсягетерогенностью и эффективностью накопления холестерина (Waldo et al, 2008).Таким образом, данные экспрессии гена ABCA1, полученные на циркулирующихлейкоцитах и моноцитах периферической крови в работе Sivapalaratnam и соавт.могут не отражать патологические процессов, происходящих в интиме артерии.

Внашем исследовании для определения уровня мРНК были использованымакрофаги, активированные фактором M-SCF, которые являются наиболееадекватной моделью для изучения патологических процессов при атерогенезе вклетках интимы in vivo (Di Gregoli, Johnston, 2012).С другой стороны, полученные нами данные, согласуются с результатами, вкоторых показано повышение уровня экспрессии гена ABCA1 в атероматозныхбляшках по сравнению со здоровыми артериями (Albrecht et al., 2004). В75исследовании Liu и соавт.

было также продемонстрировано увеличение уровняэкспрессии гена ABCA1 в артериях с различной степенью выраженностиатеросклеротических повреждений по сравнению со здоровыми артериями (Liu etal., 2012). Сравнение пациентов с аневризмой сонной артерии и пациентов саневризмой брюшной аорты с лицами контрольной группы без признаковатеросклероза показало, что уровень мРНК ABCA1 при атеросклерозе повышен(Soumian et al., 2005), что также согласуется с полученными нами данными.Суммируя результаты, можно заключить, что повышение уровня экспрессиигена ABCA1 в макрофагах может являться значимым фактором в развитии ипрогрессировании атеросклеротического процесса Поскольку ABCA1 являетсяодним из ключевых белков ОТХ, можно предположить, что изменение уровняэкспрессии гена ABCA1, отмеченное нами в макрофагах, может влиять на скоростьОТХ из сосудистой стенки при развитии атеросклероза и проведение дальнейшихисследований путей регулирования экспрессии гена ABCA1 может статьперспективным направлением в разработке новых фармакологических подходовпри лечении атеросклероза.3.3 Измерение уровня белка ABCА1 в макрофагах, активированных МCSFИзмерение ABCA1 в макрофагах было проведено с использованием методавестерн блоттинга в группе больных с атеросклерозом и в контрольной группе.Пример результатов вестерн блоттинга приведен на Рисунок 15.Нами выявлено снижение относительного содержания белка ABCA1(медиана 0.14 (мин-макс 0.07-0.54)) в макрофагах пациентов через 5 сутоккультивирования по сравнению с контрольной группой (медиана 0.44 (мин-макс0.14-0.97)) (p <0.001) (Рисунок 16).76Рисунок 15.

Результаты вестерн-блоттинга белка ABCA1 в макрофагах,активированных М-CSF. Показаны результаты для различных представителейгруппы пациентов (дорожки 1, 2) и контрольной группы (дорожки 3, 4).Рисунок 16. Уровень белка ABCA1 в макрофагах, активированных M-CSF,после 5 суток культивирования у пациентов с атеросклерозом (N=15) и вконтрольной группе (N=19), * p<0.001. Нормирование результатов проведено спомощью измерений соответствующих показателей для гена ß-актина. Ось абсцисс- исследуемые группы; ось ординат - относительный уровень мРНК (отн.

ед.).77Известно, что усиление транспорта холестерина из периферических клеток,посредством ОТХ, основным белком которого и является транспортер ABCA1,предотвращает от образования пенистых клеток, обеспечивая атеропротективныесвойства данного процесса. Таким образом, полученные данные могутсвидетельствовать о нарушении элиминации холестерина из макрофагов упациентов с атеросклерозом. Подобные результаты отмечены и при изучениитрансгенных животных.

Так, селективная инактивация ABCA1 в макрофагах как влинии мышей с отсутствием рецептора ЛПНП -/-, так и у апоЕ -/- мышейдостоверно увеличивал уровень атеросклеротического повреждения сосудов приотсутствии изменений в липидном профиле (Aiello et al., 2002). Кроме того, у линиимышей с нокаутом гена ABCA1 -/- также было продемонстрировано усилениеатеросклероза без изменения уровня липидов в плазме крови (Zhu et al., 2008).В то же время при пересадке костного мозга с гиперэкспрессией гена ABCA1было отмечено резкое снижение уровня атеросклеросклеротического повреждениясосудов (Van Eck et al., 2006). Эти данные свидетельствуют о том, что количествобелка ABCA1 отражает степень атеросклеротического повреждения сосудов иуровень белка ABCA1 может служить маркером атерогенеза.

Характеристики

Список файлов диссертации

Экспрессия генов транскрипционных факторов LXRalpha, LXRbeta, PPARgamma и транспортера ABCA1 при атеросклерозе
Свежие статьи
Популярно сейчас
Почему делать на заказ в разы дороже, чем купить готовую учебную работу на СтудИзбе? Наши учебные работы продаются каждый год, тогда как большинство заказов выполняются с нуля. Найдите подходящий учебный материал на СтудИзбе!
Ответы на популярные вопросы
Да! Наши авторы собирают и выкладывают те работы, которые сдаются в Вашем учебном заведении ежегодно и уже проверены преподавателями.
Да! У нас любой человек может выложить любую учебную работу и зарабатывать на её продажах! Но каждый учебный материал публикуется только после тщательной проверки администрацией.
Вернём деньги! А если быть более точными, то автору даётся немного времени на исправление, а если не исправит или выйдет время, то вернём деньги в полном объёме!
Да! На равне с готовыми студенческими работами у нас продаются услуги. Цены на услуги видны сразу, то есть Вам нужно только указать параметры и сразу можно оплачивать.
Отзывы студентов
Ставлю 10/10
Все нравится, очень удобный сайт, помогает в учебе. Кроме этого, можно заработать самому, выставляя готовые учебные материалы на продажу здесь. Рейтинги и отзывы на преподавателей очень помогают сориентироваться в начале нового семестра. Спасибо за такую функцию. Ставлю максимальную оценку.
Лучшая платформа для успешной сдачи сессии
Познакомился со СтудИзбой благодаря своему другу, очень нравится интерфейс, количество доступных файлов, цена, в общем, все прекрасно. Даже сам продаю какие-то свои работы.
Студизба ван лав ❤
Очень офигенный сайт для студентов. Много полезных учебных материалов. Пользуюсь студизбой с октября 2021 года. Серьёзных нареканий нет. Хотелось бы, что бы ввели подписочную модель и сделали материалы дешевле 300 рублей в рамках подписки бесплатными.
Отличный сайт
Лично меня всё устраивает - и покупка, и продажа; и цены, и возможность предпросмотра куска файла, и обилие бесплатных файлов (в подборках по авторам, читай, ВУЗам и факультетам). Есть определённые баги, но всё решаемо, да и администраторы реагируют в течение суток.
Маленький отзыв о большом помощнике!
Студизба спасает в те моменты, когда сроки горят, а работ накопилось достаточно. Довольно удобный сайт с простой навигацией и огромным количеством материалов.
Студ. Изба как крупнейший сборник работ для студентов
Тут дофига бывает всего полезного. Печально, что бывают предметы по которым даже одного бесплатного решения нет, но это скорее вопрос к студентам. В остальном всё здорово.
Спасательный островок
Если уже не успеваешь разобраться или застрял на каком-то задание поможет тебе быстро и недорого решить твою проблему.
Всё и так отлично
Всё очень удобно. Особенно круто, что есть система бонусов и можно выводить остатки денег. Очень много качественных бесплатных файлов.
Отзыв о системе "Студизба"
Отличная платформа для распространения работ, востребованных студентами. Хорошо налаженная и качественная работа сайта, огромная база заданий и аудитория.
Отличный помощник
Отличный сайт с кучей полезных файлов, позволяющий найти много методичек / учебников / отзывов о вузах и преподователях.
Отлично помогает студентам в любой момент для решения трудных и незамедлительных задач
Хотелось бы больше конкретной информации о преподавателях. А так в принципе хороший сайт, всегда им пользуюсь и ни разу не было желания прекратить. Хороший сайт для помощи студентам, удобный и приятный интерфейс. Из недостатков можно выделить только отсутствия небольшого количества файлов.
Спасибо за шикарный сайт
Великолепный сайт на котором студент за не большие деньги может найти помощь с дз, проектами курсовыми, лабораторными, а также узнать отзывы на преподавателей и бесплатно скачать пособия.
Популярные преподаватели
Добавляйте материалы
и зарабатывайте!
Продажи идут автоматически
6606
Авторов
на СтудИзбе
296
Средний доход
с одного платного файла
Обучение Подробнее