Диссертация (1145852), страница 12
Текст из файла (страница 12)
Результатыисследований, приведенные выше, и полученные нами данные дают основаниепредполагать, что сниженный уровень белка АВСА1 является фактором рискразвития атеросклероза.Интересно, что в нашем исследовании в макрофагах пациентов сатеросклерозом было выявлено увеличение уровня экспрессии мРНК ABCA1 и в тоже время отмечалось снижение содержание белка ABCA1 по сравнению смакрофагами контрольной группы.
Необходимо отметить, что уровень экспрессиимРНК ABCA1 не всегда отражает уровень белка (Gygi et al., 1999). Было показано,что имеется несоответствие между уровнем мРНК ABCA1 и количеством белкаABCA1 в различных тканях животных, что предполагает наличие посттрансляционной регуляции белка ABCA1 in vivo (Wellington et al., 2002). Влитературе есть данные, аналогичные нашим, о том, что в атеросклеротических78бляшках человека на фоне увеличения содержания мРНК ABCA1 содержание белкаABCA1 существенно снижается по сравнению с неповрежденными артериями(Albrecht et al., 2004). В работе Liu и соавт.
также было продемонстрировануменьшенный уровень ABCA1 при увеличенном уровне экспрессии гена ABCA1 ватеросклеротических артериях по сравнению со здоровыми артериями (Liu et al.,2012).Исследования in vitro подтверждают, что белок ABCA1 подвержен посттрансляционной регуляции в основном через контроль уровня его деградации.Скорость деградации ABCA1 уменьшается при взаимодействии с апо АI истимулируется ненасыщенными жирными кислотами (Kang et al., 2010).
Такжестабильность белка ABCA1 контролируется внутриклеточными белками, такимикакоксистеролсвязывающийбелокиα1-синтрофин(Hsieh,2014)ифармакологическое ингибирование калпаин-опосредованной деградации белкаABCA1 увеличивало уровень ABCA1 и эффективность транспорта холестерина(Yokoyama et al., 2012). Таким образом, эти данные подтверждают возможностьконтроля уровня белка ABCA1 на посттрансляционном уровне независимо отуровня экспрессии ABCA1.Доказано, что состав и микроокружение атеросклеротической бляшки такжемогут влиять на деградацию белка ABCA1 (Albrecht et al., 2004). Следует отметить,что в макрофагах показан быстрый распад белка ABCA1 со временем полужизнименее 1 ч (Oram et al., 2000; Arakawa, Yokoyama, 2002) и при атеросклеротическомпоражении сосудов макрофаги имеют тенденцию накапливать большое количествосвободного холестерина (Tabas, 1997), которое ускоряет деградацию ABCA1 (Feng,Tabas, 2002).
Таким образом, аккумуляция холестерина в клетке может оказыватьдополнительное влияние на пост-трансляционный контроль уровня данного белкав клетке. В то же время, связывание ABCA1 с апо АI и апо АII замедляетдеградацию ABCA1 в THP-1 клетках, защищая ABCA1 в макрофагах отразрушения тиоловой и калпаиновой протеазами (Arakawa, Yokoyama, 2002; Wanget al., 2003).79Однако в недавнем исследовании было показано, что деградация ABCA1также может опосредоваться протеосомальным протеолизом и, что даженебольшое повышение уровня внутриклеточного холестерина ассоциировано созначительным уменьшением убиквитирования ABCA1 (Hsieh et al., 2014).
Это, всвою очередь, может отражать пострансляционные модификации, влияющие нанаблюдаемый нами повышенный уровень ABCA1 в группе контроля по сравнениюс группой пациентов. В работе Hsieh и соавт. было продемонстрированоувеличение содержания белка ABCA1 в нагруженных эфирами холестеринамакрофагах при отсутствии увеличения уровня экспрессии гена ABCA1 (Hsieh et al.,2014). Отмеченное в нашем исследовании увеличение уровня мРНК гена ABCA1 и,в то же время, снижение уровня белка ABCA1 в группе пациентов можетобъясняться нарушениями, происходящими на посттрансляционном уровне, что небыло отмечено в группе контроля.Таким образом, отмеченное снижение содержания белка ABCA1 вмакрофагахпациентов позволяет предположить,чтоважнымфактором,определяющим функции транспортера ABCA1 и эффективность ОТХ приатеросклерозе, является регулирование ABCA1 именно на посттранскрипционномуровне.3.4 Уровень мРНК гена MMP-9 в макрофагах, активированных М-CSF висследуемых группах.В нашем исследовании установлено повышенное содержания мРНК MMP-9(медиана 1.63 (мин-макс 0.97-2.37)) в макрофагах, активированных M-CSF, после5 суток культивирования у пациентов с атеросклерозом по сравнению сконтрольной группой (медиана 0.85 (мин-макс 0.61-1.66)) (p <0.001) (Рисунок 17).80Рисунок 17.
Относительный уровень мРНК гена MMP-9 в макрофагах,активированных M-CSF, после 5 суток культивирования у пациентов сатеросклерозом (N=15) и в контрольной группе (N=19), * p<0.001. Нормированиерезультатов проведено с помощью измерений соответствующих показателей длягена ß-актина. Ось абсцисс - исследуемые группы; ось ординат - относительныйуровень мРНК (отн. ед.).Ремоделирование внеклеточного матрикса играет важную роль в развитииразличных сосудистых патологий, включая прогрессирование атреросклероза,разрыв атеросклеротической бляшки и развитие повторного сужения сосудов(рестеноза) (Galis, Khatri, 2002).
Необходимо отметить, что активированныемакрофаги, продуцирующие металлопротеиназы и коллагеназу, способствуютраспаду коллагена в атеросклеротической бляшке и возникновению такого81осложнения, как разрыв бляшки, образование тромба, и развитию инфарктамиокарда.Одним из основных патогенетических механизмов ССЗ, в том числеатеросклероза, является нарушение функции эндотелия. Ранее было показано, чтоважнейшим звеном, регулирующим расщепление коллагена IV типа и обеспечениевозможностипроникнутьатеросклеротическогомоноцитампоражениясквозьсосудов,эндотелийявляетсякактивностьместуMMP-9,синтезируемой макрофагами (Mishra et al., 2013).
Кроме того, у пациентов состенозом сонных артерий уровень MMP-9 в плазме крови в 2 раза вышепопуляционного и ассоциируется с риском развития мозгового инсульта (Eldrup etal., 2006). Изложенные выше данные в настоящее время позволяют рассматриватьMMP-9каквесьмаперспективныйвотношениимониторированияпровоспалительный фактор кардиоваскулярного риска.Таким образом, возрастание экспрессии гена MMP-9 в макрофагах пациентовс атеросклерозом может ассоциироваться с тенденцией к нестабильностиатеросклеротической бляшки и прогрессированием атерогенеза.
Необходимоотметить, что ранее были получены данные, что гиперэкспрессия гена MMP-9 внестабильных атеросклеротических бляшках и повышенный уровень MMP-9 вплазме крови у пациентов с острым коронарным синдромом ассоциированы снестабильностью атероматозной бляшки (Inokubo et al., 2001).Полученные нами данные, также согласуются с результатами, в которыхпоказано повышение уровня мРНК MMP-9 у лиц с аневризмой сонной артерии и ватероcклеротических бляшках по сравнению с артериями лиц контрольной группы(Soumian et al., 2005).
Кроме того, в недавней работе Rao и соавт. было отмеченоувеличение уровня экспрессии гена MMP-9 в атеросклеротических бляшках упациентов с выраженными симптомами атеросклероза по сравниню с лицами, укоторых наблюдалось асимптомное течение заболевания (Rao et al., 2014).82В то же время в исследовании Gough и соавторов было отмечено, чтогиперэкспрессия MMP-9 у Апо Е -/ - мышей не имеет прямого эффекта на разрыватеросклеротической бляшки вследствие отсутствия MMP-9 активации.
При этомгиперэкспрессия активированной формы MMP-9 приводила к разрыву бляшки(Gough et al., 2006). Эти данные свидетельствуют, что при оценке влияния уровнямРНК MMP-9 на развитие атеросклеротического повреждения необходимоучитывать активацию данной металлопротеиназы.В настоящем исследовании впервые выявлена отрицательная корреляция (r=0.79, p<0.05) между уровнем ABCA1 и уровнем мРНК MMP-9 в группе пациентовс атеросклерозом (Рисунок 18).Рисунок 18.
Корреляция между уровнем мРНК гена MMP-9 и уровнем белкаABCA1 в макрофагах, активированных M-CSF, после 5 суток культивирования упациентов с атеросклерозом (N=15) (r = -0.79, p < 0.05).Можно предположить, что пути общей белковой деградации, включающиеMMP-9 и калпаин, могут быть вовлечены и в деградацию ABCA1, и в то же время83в уменьшение транспорта липидов. О поддержке данной гипотезы свидетельствуетранее показанный факт, что протеазы, такие как калпаин, вовлечены в деградациюбелка ABCA1 (Wang et al., 2003). В то же время в работах in vitro установлено, чтоMMP, отвечающие за расщепление белков внеклеточного матрикса, такжекоррелируют с калпаином (Soumian et al., 2005), что может объяснять показанное внастоящем исследовании снижение уровня ABCA1 и повышение уровнем мРНКMMP-9 в группе пациентов с атеросклерозом.
Эти данные также могут отражатьпричины снижения уровня белка ABCA1 при повышенной экспрессии гена ABCA1в группе лиц с атеросклерозом.Кроме того, было показано, что ядерные рецепторы LXRα/ LXRß и PPARγимеют антивоспалительную и анти-MMP активность (Soumian, 2005). Эти данныедаютвозможностьпредположить,чтоизменениеуровняэкспрессиивышеуказанных ядерных рецепторов в макрофагах могут вносить вклад вдестабилизацию атеросклеротической бляшки. Исходя из вышеизложенного, внашей работе мы также провели оценку уровня экспрессии генов LXRα/ LXRß иPPARγ.3.5 Уровень мРНК генов ядерных рецепторов LXRα, LXRβ, PPARγ вмакрофагах, активированных М-CSFНаши эксперименты продемонстрировали снижение содержания мРНК LXRß(медиана 0.42 (мин-макс 0.10-0.72)) (p<0.001) и мРНК PPARγ (медиана 0.30 (минмакс 0.13-0.81)) (p<0.001) в макрофагах, активированных колониестимулирующимфактором М-CSF, у пациентов с атеросклерозом по сравнению с контрольнойгруппой (медиана 0.67 (мин-макс 0.43-1.04) и медиана 1.36 (мин-макс 0.61-2.09),соответственно) (Рисунок 19-20).84Рисунок 19.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
