Автореферат (1141408), страница 3
Текст из файла (страница 3)
Эпидерма плода представлена окончатыми клетками, длина12которых составляет 15-50 мкм, ширина не превышает 30 мкм. На эпидермисе редкорасполагаются устьица аномоцитного типа. В районе расположения черешка иотпавшего цветка изредка можно обнаружить одиночные простые волоски.Колленхима плодов представлена 2-3 рядами клеток. Клетки мезокарпия имеютвыраженную неправильную форму и заметно разрастаются к середине плода.Эндокарпий представлен несколькими слоями волокон, часто собранных в пучки ирасполагающихся в разных направлениях, содержит друзы и призматическиекристаллы.Эпидермисверхней стороны листамногоугольнымиклетками,представлен довольно крупнымиантиклинальныестенкикоторыхобладаютчетковидными утолщениями.
Над жилками клетки эпидермиса имеют болеевытянутуюформу,основнаямассаизодиаметрические.Клеткинижнегоэпидермиса более мелкие извилистые. На верхней стороне листа устьицавстречаются изредка и окружены 4-5 околоустьичными клетками. Устьицакрупные, овальной формы, сильно приподнятые, аномоцитного типа. На нижнейстороне листа они многочисленные, кутикула образует вокруг устьиц радиальнуюскладчатость.Верхняямногочисленнымисторонапростымилистапочтиизвилистымиголая,нижняямногоклеточнымипокрытаволосками,заостренными на конце, слегка расширенными у основания с тонкими стенками игладкой поверхностью. Основание волоска прикрепляется к небольшой поразмерам, несколько приподнятой клетке эпидермиса, расположенной на стыкенескольких эпидермальных клеток, ориентированных вокруг места прикрепленияпо радиусу и покрытых кутикулой, обладающей радиальной складчатостью.Мезофилл листа рыхлый, изредка встречаются друзы кальция оксалата.Проводящая система листа образует развитую сеть жилок, снабженныхкристаллоносной обкладкой.13Рис.
1Фрагмент верхнегоэпидермисаУв×400Рис. 5.Фрагментпроводящегопучка.Рис.3. Друзыоксалата кальцияУв×1000Рис.2 Фрагмент нижнегоэпидермисаУв×400Рис. 7.Эндокарпий.Механическиеволокна. Ув×400Рис.6.Клетки мезокарпия.Кубические кристаллыоксалата кальция. Ув×1000Рис. 4Кристаллоносная обкладкапо жилке листа вполяризованном светеУв×400Рис. 8. Эндокарпий споверхности. Ув×400Анализ данных микроскопического исследования листьев яблони леснойсвежих, высушенных и замороженных показал идентичность выявленныхпризнаков, среди которых диагностическое значение имеют: размер и формаклеток эпидермиса, тип устьичного комплекса, расположение и строение волосков,наличие друз кальция оксалата в мезофилле и кристаллоносная обкладка по жилкелиста.
Аналогичная ситуация наблюдается при анализе плодов. В измельченном ипорошкованном сырье – листья, плоды яблони лесной наблюдаются отдельныеразрозненные диагностические признаки, в своей совокупности, позволяющиеидентифицировать сырье.ФИТОХИМИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ЛИСТЬЕВ И ПЛОДОВ ЯБЛОНИЛЕСНОЙДля проведения исследований химического состава плодов и листьев яблонилесной мы получали водные и водно-спиртовые извлечения. С полученнымиизвлечениями проводились качественные реакции для идентификации основных14групп БАВ (флавоноидов, дубильных веществ, полисахаридов, аскорбиновойкислоты, фенолкарбоновых кислот, арбутина и аминокислот).Качественный анализ извлечений из листьев и плодов яблони лесной,проводимыйметодомТСХвэкспериментальноотобранныхсистемахрастворителей позволил осуществить идентификацию арбутина, флавоноидов,органических кислот, фенолкарбоновых кислот и аскорбиновой кислоты.
Отличийв количестве зон адсорбции БАВ на хроматограммах свежих, замороженных ивысушенных листьев и плодов не наблюдали. Присутствие арбутина ифлавоноидов, фенолкарбоновых кислот, дубильных веществ было подтвержденотакже методом ВЭЖХ, в ходе которого были определены следующие соединенияпри280нм(арбутин,изорамнетин-3-галактозид,кверцитин-3-глюкозид,кверцитин-3рутинозид, флоридзин, флоретин, кверцитин) и 370 нм (кофейнаякислота, галловая кислота, цикоревая кислота, катехин, эпикатехин, хлорогеноваякислота, виценин, неохлорогеновая кислота, рутин, кумарин, эллаговая кислота,кверцитин, флоретин, флоридзин, коричная кислота, апигенин. Общий видхроматограмм представлен на рисунках 9,10.
Условия анализа: Колонка KromasilC18 размером 4,6 х 250 мм, размер частиц 5 мкм, используемая подвижная фазаметанол-вода-кислота фосфорная концентрированная (400:600:5) в условияхизократического элюирования. Анализ осуществляли при комнатной температурен 1 1 .5 6 5И з о р а м н е т и н -3 -г 1 5 . 9 3 8при скорости подачи элюента 0,8 мл/ мин. Продолжительность анализа 70 мин.К в е р ц е т и н - 3 - гл к 1 5 .9 9 0К в е р ц е т и н - 3 - р у т 2 4 .8 6 7Детектирование проводилось с использованием УФ-детектора «GILSTON»3020100ch12468гал(14,09);(мин): арбутин(5,27); изорамнетин-3-кверцитин-3-глюк(20,07);кверцитин-3рутинозид (21,45); флоридзин (24,09); флоретин (30,53);н 6.68 6н 3.63 4н 2.19 8н 0.46 740удерживаниян 0.99 450яблони лесной методом ВЭЖХ. При 280 нм. Временан 0.60 760Рис 9.
– Хроматограмма спиртового извлечения из листьевн 4.75 6mVн 5.88 0А р б у т и н 6 .4 1 8UV/VIS МОДЕЛЬ 15110 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 46 48кверцитин (35,22)мин15н 1 0 .3 0 5ор и чн а я к- т а 0 .02 80 .0.0 02 400пн и н 0.0 090и.0г1е 8кислота (5,317); цикоревая кислота (5,62); катехин (7,16);эпикатехин (7,69); хлорогеновая кислота (8,51); виценин(9,06); неохлорогеновая кислота (9,59); рутин (10,22);КннАннФ 0л.25 и9орн 0 .28 5 дз и н 0.3 64н 0 .0 0 3удерживания (мин): кофейная кислота (4,46); галловаян 0 .0 0 00К в е р ц е т и н 0 .3 0 2Ф л о р е т и н 0 .1 2 650н 0 .6 0 8н 0 .8 1 6100Э Г К Г 0.1 31150К у м а р и н 0 .1 2 2200Рис.
10– Хроматограмма спиртового извлечения из листьевяблони лесной методом ВЭЖХ при 370 нм. ВременаР у т и н 1 .2 6 2250К а т е х ин 2 .41 9Э п ик а т е хи н 2 .90 6300Х л о р о ге но в а я к т 0 .4 6 0В иц е н ин 0.8 09Н е о х л о р о г е н о в а я 0 .2 1 2К о ф е й н а я к - т а 0 .1 2 0н 0 .0 7 2Г а л л о в а я к- т а 0.0 89Ц и ко ри е в а я к- т а 2 .89 9mVкумарин (11,84); эллаговая (12,56); кверцитин (17,90);ch145678910 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24минфлоретин (18,14); флоридзин (21,22); коричная кислота(23,65); апигенин (24,49)С использованием аминокислотного анализа был установлен составаминокислот листьев и плодов яблони лесной, представленный глутаминовой,аспарагиновой кислотами, глицином, пролином, серином, аланином, лизином,лейцином,валином,треонином,аргинином,изолейцином,гистидином,метионином, тирозином, фенилаланином. При изучении состава полисахаридногокомплекса нами установлено присутствие в нем пектина.Анализ основных групп БАВ в сырье проводили по фармакопейнымметодикам.
Определение данных групп БАВ осуществляли для свежих,замороженных и высушенных образцов сырья. Результаты количественногоопределения представлены в таблице 1.Таблица 1. Содержание БАВ в исследуемых листьях и плодах яблони леснойИсследуемое ЛРСПолисахаридыЛистьяЯблониЛесной(Инстринскийрайон)ЛистьяЯблониЛесной(Чеховскийрайон)Содержание %Органичес- Арбутин Дубильныекие кислотвеществаФлавоноидыАскорбиновая кислотасвежие5,341,513,899,572,510,12Замороженные5,201,353,549,232,310,10Высушенныесвежие4,870,982,387,251,150,075,221,484,029,642,480,11ЗамороженныеВысушенные5,151,293,689,372,150,104,770,962,517,401,050,0616ПлодыЯблониЛесной(Инстринскийрайон)ПлодыЯблониЛесной(Чеховскийрайон)свежие12,686,711,165,010,940,32Замороженные12,385,451,074,670,710,30Высушенныесвежие11,784,300,853,980,210,1112,556,341,094,740,920,30ЗамороженныеВысушенные12,155,210,934,200,680,2911,654,150,763,780,200,12Анализируя экспериментальные данные по содержанию полисахаридов,органических кислот, дубильных веществ, арбутина, флавоноидов, аскорбиновойкислоты в свежих, высушенных и замороженных листьях и плодах яблони лесной,следует отметить, что максимальное содержание изучаемых групп БАВ в свежемсырье.
Так, замораживание листьев яблони лесной привело к снижениюсуммарного содержания полисахаридов, составившему 1,3-2,6 %, снижениесодержания органических кислот составило 10,6-12,8%, потеря содержаниядубильных веществ составила 2,8- 3,5%, флавоноидов 8,0-13,3%, арбутина 8,49,0%. Анализ замороженных плодов яблони лесной показал также снижениесодержания полисахаидов, составившему 2,4-3,2 %, снижение содержанияорганических кислот составило 17,8-18,9%, потеря содержания дубильных веществсоставила 6,8-11,4%, флавоноидов 24,4-26,1%, арбутина 7,8%.ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПОКАЗАТЕЛЕЙ КАЧЕСТВА ПЛОДОВ И ЛИСТЬЕВЯБЛОНИ ЛЕСНОЙДля стандартизации и оценки качества плодов и листьев яблони лесной былиопределены следующие показатели: влажность, зола общая, зола, нерастворимая в10% HCl, экстрактивные вещества, извлекаемые водой, экстрактивные вещества,извлекаемые 70% этиловым спиртом, определение содержания флавоноидов ипроведена оценка микробиологической чистоты.
Результаты представлены втаблице 2.17Таблица 2. Определение числовых показателей и микробиологической частоты в плодах и листьяхяблони леснойПолученные данные были использованы для нормирования числовыхпоказателей в разрабатываемой нормативной документации на исходноелекарственное растительное сырье.Учитывая данные о широком спектре фармакологического действия веществфлавоноидной природы, а также учитывая их достаточно высокое содержание висследуемых объектах, стандартизацию листьев и плодов яблони лесной, на наш,взгляд целесообразно проводить по суммарному содержанию флавоноидов впересчетенарутинспектрофотометрическимметодомсприменениемобщеизвестной реакции комплексообразования с алюминия хлоридом.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
