Автореферат (1141350), страница 2
Текст из файла (страница 2)
Grapp, K. Hasegawa, N. Negreira, А.Б. Мелентьева, С.С.Катаева, А.Р. Асадуллина и др. в области анализа новых ПАВ. В работе учтенытребованияирекомендациинормативныхдокументовМинистерстваздравоохранения Российской Федерации, регламентирующих проведение ХТИ исудебно-химических экспертных исследований.В диссертационной работе проведены выборочные и экспериментальныеисследования, применялся иммунохроматографический анализ, метод газовойхромато-масс-спектрометрии, математико-статистические методы исследования.Достоверность научных положений и выводовДостоверность результатов диссертационного исследования подтверждаетсядостаточнымметодамиколичествомисследования,наблюдений,выполненнымисовременныминафизико-химическимимодификацияханалитическогооборудования, разрешенного для применения в медицинской практике.
Выводы иположения,выносимыеназащиту,обоснованыилогичны;подкреплены7убедительными фактическими данными, наглядно представленными в приведенныхтаблицах и рисунках.Апробация результатов исследованияОсновные положения диссертации были доложены и обсуждены на IIМеждународнойнаучно-практическойконференции«Современнаяхимико-токсикологическая экспертиза» International scientific conference ACTE’2015 06октября 2015 г., Москва.
На XXI Международной выставке средств обеспечениябезопасности государства «Интерполитех-2017» 18-20 октября 2017 г., Москва.Апробация работы проведена на заседании кафедры аналитической и судебномедицинской токсикологии Института трансляционной медицины и биотехнологииФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России (СеченовскийУниверситет) 26 февраля 2019 года.Личный вклад автораАвтору принадлежит ведущая роль в постановке цели и задач исследования,выборе и сборе объектов для анализа, проведении всех этапов экспериментальнойчасти работы.
Автор самостоятельно проводила иммунохроматографические ихромато-масс-спектрометрические исследования образцов мочи. Диссертантомпроведен ROC-анализ, анализ кривых распределения с учетом преваленса, рассчитануровень порогового значения («cut-off») для исследуемых реагентов, а также написанряд публикаций по теме исследования. Научные результаты, обобщенные вдиссертационной работе, получены автором самостоятельно и непосредственновнедрены в практику.Внедрение результатов исследованияРезультатыисследованийиспользуютсявхимико-токсикологическойлаборатории ГБУ Республики Марий Эл «Республиканский наркологическийдиспансер» (акт внедрения от 25 июня 2018 года); в судебно-химическом отделенииОГБУЗ «Бюро судебно-медицинской экспертизы Томской области» (акт внедрения№ 115 от 22 июня 2018 года).СоответствиедиссертациипаспортунаучнойспециальностиДиссертационная работа является прикладным исследованием для решениязадач судебно-химического и химико-токсикологического анализов.
Научные8положениядиссертациисоответствуютформулеспециальности14.04.02–фармацевтическая химия, фармакогнозия (фармацевтические науки). Результатыпроведённого исследования соответствуют области исследования специальности,конкретно пункту 4 паспорта специальности.Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наукДиссертационная работа выполнена в рамках комплексной темы кафедрыаналитической и судебно-медицинской токсикологии Института трансляционноймедицины и биотехнологии ФГAОУ ВО Первый МГМУ им.
И.М. СеченоваМинздраваРоссии(СеченовскийУниверситет)«Исследованиявобластианалитической и биохимической токсикологии наркотических, сильнодействующихи ядовитых веществ» (№ государственной регистрации 01200110469).Объем и структура диссертацииДиссертация изложена на 130 страницах машинописного текста и состоит извведения, обзора литературы, экспериментальной части, общих выводов, спискалитературы из 108 источников (78 из которых зарубежные), списка используемыхсокращений и приложений. Работа иллюстрирована 37 рисунками и включает 27таблиц.ПубликацииПо теме диссертации опубликовано 7 работ, в том числе 3 статьи в изданиях,рекомендуемых ВАК РФ, из них 1 статья опубликована в зарубежном издании,индексированном в международной базе данных Scopus.ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫМатериалы и методы исследованияДанные эксперимента, представленные в настоящей работе, получены наклинических образцах мочи, содержащие исследуемые соединения (их метаболиты)отлиц,проходившихосвидетельствованиенасостояниеопьянениявнаркологических диспансерах и кабинетах наркологических экспертиз, собранные ипроанализированные за период зима-весна 2017 года.Наоснованииполученныхрезультатовлитературногопоискабылоустановлено, что α-PVP и MDPV являются наиболее распространенными и9токсикологически значимыми представителями дизайнерских наркотиков из группысинтетических катинонов (рис.
1).Экспериментальнаяоценкаиммунохроматографическихреагентовваппаратно-программном исполнении была осуществлена в соответствии с ГОСТ Р51352–2013 «Медицинские изделия для диагностики ин витро. Методы испытаний»(п. 5.4.7).α-PVP(1-фенил-2-(пирролидин-1ил)пентан-1-онMDPV(1-(бензо-[d][1,3]диоксол-5-ил)-2(пирролидин-1-ил)пентан-1-онРисунок 1 – Токсикологически значимые синтетические производные катинонаИХА отобранных образцов мочи осуществлялся с применением анализаторадля химико-токсикологических исследований IK 200609 T&D Innovationen GmbH(Германия), серийный номер 1633; комплекта экспериментальных диагностическихреагентов – иммунохроматографический тест R1 – AMP, катиноны – MDPV, α-PVP,α-PHP, T&D Innovationen GmbH, лот 15120003.
Проведение исследования наанализаторе осуществлялось согласно инструкции производителя.Для статистической обработки данных и установления уровня пороговыхзначений («сut-off») были рассчитаны операционные характеристики методадиагностики, после чего проведен информативный метод анализа ROC-кривых –операционных кривых наблюдателя (Receiver Operating Characteristic curves). ROCанализпредставляетанализироватьсобойисследовательскийвзаимоотношениячувствительностиинструмент,ипозволяющийспецифичностиметодаисследования в бинарной классификации.
Кроме того, были построены гистограммыраспределения числа лиц по диапазонам концентрации, полученные по результатамизмерений ИХА, и проведен их анализ с учетом преваленса.Для подтверждения результатов анализа, полученных на предварительной10стадии исследования, был применен метод ГХ-МС с использованием газовогохромато-масс-спектрометра Shimadzu GCMS-QP2010Ultra (Япония).Оценкаиммунохроматографическихреагентовдляобнаружениясинтетических катиноновОбъекты перед ИХА исследованием первоначально были разделены на дверавные группы: по 65 образцов мочи с достоверно доказанным наличием(«положительные» пробы) и отсутствием («отрицательные» пробы) в нихсинтетических катинонов (их метаболитов) методом ГХ-МС (референтный метод).
Вдвух исследуемых группах биообъектов в ряде образцов мочи было такжеподтверждено наличие других наркотических средств, сильнодействующих ипсихотропных веществ, а также лекарственных препаратов. В 37% из 65«положительных» проб мочи содержались только α-PVP и его метаболиты. В 30% из65 «отрицательных» проб мочи наличие контролируемых психоактивных веществреферентным методом не было установлено.Анализатордляхимико-токсикологическихисследованийIK200609поставляется с заводской калибровкой от производителя по соединению MDPV,записанной на микрочипе. Микрочип закреплен на тубе, содержащей внутриреагенты для обнаружения катинонов. Для проведения научного исследованияприбор был перекалиброван по образцам с заведомо известной концентрациейMDPV, представленными производителем, на всем диапазоне измерений (20, 60, 120,300, 500, 800, 1000 нг/мл).После анализа проб с целью обнаружения синтетических катинонов методомИХА было зафиксировано семь ложноположительных и три ложноотрицательныхрезультатов(табл.1).Результатырасчетааналитическиххарактеристикпредставлены в таблице 2.
Учитывая, что согласно ГОСТ Р 51352-2013 оптимальнымпорогомявляетсядостижениечувствительностисвыше90%,методпредварительного скрининг-исследования, реализуемый в указанном аппаратнопрограммном исполнении, соответствует предъявляемым требованиям; параметрыспецифичности, согласно полученным данным, практически близки к уровнючувствительности, особенно с учетом прогностичности получаемых результатов.11Таблица 1 – Результаты обнаружения синтетических катинонов методом ИХА вобразцах мочи на анализаторе IK 200609Факт употребления катинонов(ГХ-МС)ТЕСТВсегоПрисутствиеОтсутствиеПоложительные62 (TP)7 (FP)69Отрицательные3 (FN)58 (TN)61Всего6565130Примечание.
TP – истинно положительный результат, результат совпал в двух методах. FP – ложноположительныйрезультат, результат референтного метода отрицательный. FN – ложноотрицательный результат, результатреферентного метода положительный. TN – истинно отрицательный результат, результат совпал в двух методах.Таблица 2 – Операционные характеристики метода диагностикиРасчетные параметры метода диагностикиЗначение, %Расчет чувствительности (Se):95,4%Расчет специфичности (Sp):89,2%Расчет точности (Ac):92,3%Прогностичность положительного результата (PV+):89,9%Прогностичность отрицательного результата (PV-):95,1%Отношение правдоподобия положительного результата (Lr+)8,83Отношение правдоподобия отрицательного результата (Lr-)0,05Построение ROC-кривой согласно распределению по категориям решенийДля этой цели две верифицированные группы проб от обследуемых лиц(употреблявшие и не употреблявшие синтетические катиноны) распределили внесколько подгрупп (по диапазону концентраций). В нашем случае в группах былопо 65 проб.
Затем составили таблицу распределения по диапазону концентраций(табл. 3) и рассчитывали значения точек для построения ROC-кривой (рис. 2).Анализ площади под ROC-кривой (AUC) позволяет сделать вывод, чтокачество модельного теста можно отнести к категории «отличное» (0,97).12Таблица 3 – Распределение по категориям оценокФактическоесостояниеУпотребляликатиноныНеупотребляликатиноныКатегории решений341Нетданных251-10 нг/мл10-100нг/мл100-1000нг/мл>1000нг/мл1254611653916100065ВсегоРисунок 2 – ROC-кривая согласно распределению по категориям решений (по оси ординатистинно положительные, т.е.
чувствительность, по оси абсцисс ложноположительные,или 1 – специфичность)Установление уровня пороговых значений («cut-off»)Одним из способов определения оптимального значения порогового значенияявляется графическое представление «cut-off» в виде точки пересечения двух кривыхчувствительности и специфичности по результатам расчетов операционныххарактеристик диагностического метода исследования. В нашем случае, по даннымпроведенного ROC-анализа получается, что «cut-off» должен составлять 15,8 нг/мл.Но данная методика не учитывает преваленс синтетических катинонов в реальнойвыборке.Поэтомунамибылоприняторешениепостроитьгистограммыраспределения числа лиц по диапазонам концентрации, полученные по результатамизмерений ИХА (рис.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
