Диссертация (1140928), страница 11
Текст из файла (страница 11)
Согласно работе Alan Storey [116], Wang N.[130], призлокачественной трансформации экспрессия белка p53 увеличивается. Нами былиполучены новые данные о том, что р53 положительные клетки сосредоточены восновном в СЭМС 2 вида (10%) и в большей степени в СЭМС 3 вида (70%),относящихсякраковымподтверждениемразвитияСЭМС.Последнеезлокачественнойможетбытьтрансформациивкосвеннымклеткахспризнаками стволовости, экспрессирующих Oct-4, р16 и Ki67.Рисунок 29 Экспрессия р53 в раковом СЭМС при микроинвазивном раке, ИГХ сиспользованием антител к маркеру р53, ×60092Рисунок 30 Экспрессия р53 в раковом СЭМС при микроинвазивном раке, ИГХ сиспользованием антител к маркеру р53, ×600P53 в эпителии слизистой шейки матки100.00%90.00%80.00%70.00%52.50%60.00%50.00%40.00%30.00%20.00%10.00%7.50%0.00%0.00%0.00%ChCerЦИН<IIЦИН≥IIДиаграмма 14 Экспрессия p16/Ki67 в эпителииВПЧ-ассоциированной патологии шейки матки.MSCCслизистойшейкиматкипри93P53 в окружающем сфероиды ткани100.00%80.00%60.00%35.00%40.00%20.00%0.00%0.00%5.00%0.00%ChCerЦИН<IIЦИН≥IIMSCCДиаграмма 15 Экспрессия p53 в окружающем сфероиды ткани шейки матки приВПЧ-ассоциированной патологии шейки матки.Изучение HIF-1 и VEGFОдновременно с р53 нами были исследованы экспрессия маркеров HIF-1 иVEGF.
Известно, что р53 оказывает влияние на HIF-1 и VEGF, в результате чегоможет стимулировать процесс ангиогенеза при новообразованиях шейки матки[108, 102]. В ходе исследования в СЭМС 1 вида экспрессия р53 не выявлялась, нообнаруживалась экспрессия HIF-1 в 25% клеток и экспрессия VEGF в 35%; вСЭМС 2 вида экспрессия р53 была выявлена у 10% клеток, HIF-1 - в 60% и VEGF– в 50%; и в СЭМС 3 вида, р53 экспрессировали 70% клеток, HIF-1 и VEGFэкспрессировали 70% и 92,5% соответственно (Диаграмма 11,16,17).При иммуногистохимическом исследовании материала с использованиемантител к HIF-1 было обнаружено мембранное и диффузное ядерное окрашиваниев слизистой шейки матки как в эпителиальных клеток СЭМС, так и вокружающем сфероиды эпителии (рис.31, 32). Результаты, представленные вдиаграммах 16 – 17, показали, что при увеличении степени злокачественности94отмечается повышение экспрессии HIF-1 не только внутри, но и вне СЭМС - вслизистой шейки матки, в окружающем СЭМС ткани шейки матки.HIF-1 в слизистой шейки матки100.00%80.00%67.50%80.00%60.00%45.00%45.00%40.00%20.00%0.00%ChCerЦИН<IIЦИН≥IIMSCCДиаграмма 16 Экспрессия HIF-1 в слизистой шейки матки при ВПЧ-ассоциированнойпатологии шейки матки.Рисунок 31 Экспрессия HIF-1 в репаративном СЭМС при хроническом цервиците,ИГХ с использованием антитела к HIF-1, ×60095Рисунок 32 Экспрессия HIF-1 в раковом СЭМС при ЦИН≥II, ИГХ сиспользованием антител к HIF-1, ×600HIF-1 в окружающем сфероиды ткани100.00%90.00%90.00%80.00%70.00%75.00%65.00%60.00%60.00%50.00%40.00%30.00%20.00%10.00%0.00%ChCerЦИН<IIЦИН≥IIMSCCДиаграмма 17 Экспрессия HIF-1 в окружающем сфероиды ткани шейки матки приВПЧ-ассоциированной патологии шейки матки.96При иммуногистохимическом исследовании экспрессии VEGF в наблюдаемыхнамислучаяхвыявлялосьгранулярноеокрашиваниецитоплазмывэндотелиальных клетках.
Было отмечено повышение экспрессии VEGF приЦИН≥II и при микроинвазивной плоскоклеточной карциноме (рис.33,34). ПомимоСЭМС, VEGF также определяются в слизистой шейки матки (Диаграмма18) и вокружающем сфероиды ткани в 22.5%, 18.5%, 37.5% и 75.0% от всех клеток прихроническом цервиците, ЦИН<II, ЦИН≥II и микроинвазивной плоскоклеточнойкарциноме шейки матки соответственно (Диаграмма 19).Полученные в исследовании данные имеют соответствующие подтвержденияв научной литературе [69, 83] о том, что ангиогенеза в слизистой, а также всфероидах начинается даже при хроническом цервиците, и прогрессируется сувеличением степени злокачественности патологии.Рисунок 33 Экспрессия VEGF в репаративном СЭМС при хроническом цервиците, ИГХ сиспользованием антител к HIF-1, ×60097Рисунок 34 Экспрессия VEGF в раковом СЭМС при микроинвазивной плоскоклеточнойкарциноме шейки матки, ИГХ с использованием антител к VEGF, ×600VEGF в слизистой шейки матки100.00%88.75%90.00%80.00%70.00%60.00%50.00%40.00%48.75%33.75%29.25%30.00%20.00%10.00%0.00%ChCerЦИН<IIЦИН≥IIMSCCДиаграмма 18 Экспрессия VEGF в слизистой шейки матки при ВПЧ-ассоциированнойпатологии шейки матки.98VEGF в окружающем сфероиды ткани100.00%90.00%75.00%80.00%70.00%60.00%50.00%37.50%40.00%30.00%22.50%18.50%20.00%10.00%0.00%ChCerЦИН<IIЦИН≥IIMSCCДиаграмма 19 Экспрессия VEGF в окружающем сфероиды ткани шейки матки приВПЧ-ассоциированной патологии шейки матки.Изучение экспрессии ALDH 1 и CD34Помимо OCT4 нами также была изучена экспрессия и других маркеровстволовости - ALDH1, CD34.
При этом было выявлено, что многие СЭМСлокализуются в зоне трансформации шейки матки, являющейся нишей стволовыхклеток, и располагаются преимущенно на базальном слое слизистого эпителияшейки матки.Внаблюдаемых нами случаях, обнаруживалась диффузная экспрессияALDH1 в отдельных клетках СЭМС в виде гранулярной окрашенной цитоплазмы(Рис.35,36).
Экспрессия CD34 отмечалась в эндотелии капилляров СЭМС,продукт реакции локализовался в цитоплазме эндотелиальных клетках в центреСЭМС или в инвагинированных кровеносных капиллярах вблизи базальной99мембраны (Рис.37, 38). Клетки, экспрессирующие маркеры стволовости, былиобнаружены в зонах СЭМС разного вида: ALDH была обнаружена в 0.25%клеток СЭМС 1 вида, в СЭМС 2 вида - в 30%, в СЭМС 3 вида - в 40%(диаграмма 21). В эпителиальных клетках репаративных и неопластическихСЭМС экспрессия CD34 не определялась, в то время как экспрессия CD34 враковых СЭМС определялась не только в эндотелиальных клетках, но и в 50%эпителиальных клеток раковых СЭМС (Диаграмма 23, 24).В окружающем сфероиды эпителии, ALDH 1 и CD34 почти не определяютсяпри хроническом цервиците и ЦИН<II. При ЦИН≥II, маркер ALDH 1экспресировался в 20% клеток, CD34 экспрессировался в 10% клеток.
Примикроинвазивнойплоскоклеточнойкарциномешейкиматки,ALDH1определялся в 35% клеток, а CD34 в 55% клеток. В целом, в отношении всегопласта слизистой, при хроническом цервиците и ЦИН<II ALDH 1 и CD34 имелинизкую экспрессию (＜10% всех клеток), высокая экспрессия (＞30% клеток)наблюдалась при ЦИН≥II и микроинвазивной плоскоклеточной карциноме шейкиматки (Диаграмма 20,22).Влитературеобсуждаетсярольклеток,экспрессирующихмаркерыстволовости, например, универсального маркера костномозговых стволовыхклеток, таких как АLDH1 [74] и СD34 [26, 136] в развитии предрака и ракаразличных органов и тканей,.
На основе наших данных, клетки со свойствамистволовости появляются на стадии ЦИН≥II, а, значит, в предраковом периодечасть из них уже завершает злокачественную трансформацию.100Рисунок 35 Экспрессия ALDH в неопластическом СЭМС при ЦИН≥II, ИГХ сиспользованием антител к ALDH, ×600Рисунок 36 Экспрессия ALDH в раковом СЭМС при микроинвазивнойплоскоклеточной карциноме шейки матки, ИГХ с использованием антител кALDH, ×400101Рисунок 37.
Экспрессия CD34 в репаративном СЭМС при хроническом цервиците,ИГХ с использованием антител к CD34, ×400Рисунок 38 Экспрессия CD34 в раковом СЭМС при микроинвазивнойплоскоклеточной карциноме шейки матки, ИГХ с использованием антител к CD34,×400102ALDH в слизистой шейки матки100.00%90.00%80.00%70.00%60.00%50.00%40.00%32.50%30.00%30.00%20.00%1.25%10.00%3.75%0.00%ChCerДиаграмма20.ЭкспрессияЦИН<IIALDHЦИН≥II1вMSCCслизистойшейкиматкиприВПЧ-ассоциированной патологии шейки матки.Экспрессия ALDH в эпителиальных клеткахСЭМС разных видов100%90%80%70%60%50%40%30%20%10%0%40%30%0.25%репаративные СЭМСнеопластические СЭМСраковые СЭМСДиаграмма 21.
Экспрессия ALDH в эпителиальных клетках СЭМС разныхвидов103CD34 в слизистой шейки матки100.00%90.00%80.00%70.00%52.50%60.00%50.00%40.00%30.00%12.50%20.00%5.75%10.00%7.25%0.00%ChCerЦИН<IIЦИН≥IIMSCCДиаграмма 22. Экспрессия CD34 в эпителии слизистой шейки матки приВПЧ-ассоциированной патологии шейки матки.Экспрессия CD34 в эпителиальных клеткахСЭМС разных видов100%90%80%70%60%50%40%30%20%10%0%50%0%репаративные СЭМС0%неопластические СЭМСраковые СЭМСДиаграмма 23. Экспрессия CD34 в эпителиальных клетках СЭМС разных видов104Изучение экспрессии VimВ СЭМС 1 вида Vim определяется в 40% клеток, в СЭМС 2 вида определяетсяв 70% клеток и СЭМС 3 вида определяется в 75% клеток (Диаграмма 24, Рис. 39).При оценке всего эпителиального пласта было установлено, что Vim определялсяв 21.5% клеток при хроническом цервиците, в 32.5% клеток при ЦИН<II, в 38.5%клеток при ЦИН≥II, а при микроинвазивной плоскоклеточной карциноме шейкиматки - в 45% клеток всего эпителиального пласта.В окружающем сфероиды ткани Vim почти не определялся (Диаграмма 25).100%100.00%100%100%90.00%ALDH80.00%75%70%CD3470.00%Vim60.00%50%ост-450.00%40%40%40.00%30%30.00%20.00%0%10.00%0.25%0%0.00%репаративные СЭМСнеопластические СЭМСраковые СЭМСДиаграмма 24.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
