Диссертация (1140928), страница 12
Текст из файла (страница 12)
Экспрессия маркѐров стволовости в СЭМС разных видов.105Рисунок 39. Экспрессия Vim в раковом СЭМС при микроинвазивной плоскоклеточнойкарциноме шейки матки, ИГХ с использованием антител к Vim, ×100Vim в окружающем сфероиды ткани100.00%80.00%60.00%40.00%20.00%3.00%5.00%7.00%15.00%0.00%ChCerЦИН<IIЦИН≥IIMSCCДиаграмма 25. Экспрессия Vim в окружающем сфероиды ткани шейки матки приВПЧ-ассоциированной патологии шейки матки.106Изучение экспрессии NFKBЭкспрессия NFKB при ВПЧ-ассоциированных патологиях шейки маткиразной степени почти не отличается друг от друга, так, в СЭМС разных видов иво вне сфероидных зонах имеется его высокая экспрессия. Результатыпредставлены на рисунке 40 и в диаграммах 26,27,28.NFKB в слизистой шейки матки100.00%95.00%92.50%80.00%67.50%80.00%60.00%40.00%20.00%0.00%ChCerЦИН<IIЦИН≥IIMSCCДиаграмма 26.
Экспрессия NFKB в слизистой шейки матки при ВПЧ-ассоциированнойпатологии шейки матки.Рисунок 40. Экспрессия NFKB в репаративном СЭМС при хроническом цервиците, ИГХ сиспользованием антител к NFKB, ×400107NFKB в сфероидах100.00%90.00%85.00%90.00%90.00%80.00%65.00%70.00%60.00%50.00%40.00%30.00%20.00%10.00%0.00%ChCerЦИН<IIЦИН≥IIMSCCДиаграмма 27.
Экспрессия NFKB в сфероидах при ВПЧ-ассоциированнойпатологии шейки матки.NFKB в окружающем сфероиды ткани100.00%95.00%95.00%90.00%70.00%80.00%75.00%70.00%60.00%50.00%40.00%30.00%20.00%10.00%0.00%ChCerЦИН<IIЦИН≥IIMSCCДиаграмма 28. Экспрессия NFKB в окружающем сфероиды ткани шейки маткипри ВПЧ-ассоциированной патологии шейки матки.108В ходе нашего исследования оценивалась диагностическая значимостьВПЧ-тестированияметодомПЦР-НВ,жидкостнойцитологииприВПЧ-ассоциированной цервикальной патологии у женщин до 30 лет и старше.Эффективность выявления ЦИН2+ у пациенток до 30 лет и старше 30 лет сиспользованием ДНК ВПЧ-тестирования составила: чувствительность - 81,8% и90,5%, специфичность - 30,4% и 47,2 %; с использованием жидкостной цитологии:чувствительность - 65,5% и 71,4%, специфичность - 100,0% и 97,2 %.
Такжеоценивалась эффективность двойного окрашивания p16/Ki67 в сочетании сжидкостной цитологией и ВПЧ тестированием при выявлении цервикальнойинтраэпителиальной неоплазии шейки матки. Максимальная эффективностьцитологического метода была выявлена при диагностировании ЦИН ≥ II(чувствительность 95,31% и специфичность 100%), ВПЧ-тестирования - ЦИН <II(97,14%, 50,0%), ЦИН ≥ II (98,48%, 100,0%), ИЦХ – при диагностированиихронического цервицита (92,68%, 100,00%), ЦИН<II (94,73%, 100,00%), ЦИН ≥ II(98,48%,100,00%).Эффективностьметодавыявленияпатологии–этосовокупность чувствительности и специфичности. Наше исследование показало,что для молодых женщин до 30 лет цитологический метод исследования болееспецифичен, чем ВПЧ тестирование, но из-за низкой чувствительности иногдавыдает ложно отрицательные результаты.
Этого можно избежать, еслииспользовать комплекс данных методов. В последнее время в мире практикуютпересмотр цитологических препаратов после положительного ВПЧ теста, чтопозволяет значительно повысить эффективность выявления цервикальной109патологии [22]. Появился новый термин «информированная» цитология —проведение цитологического исследования после ВПЧ тестирования, что такжеповышает эффективность диагностики патологии шейки матки [24].Наше исследование также показало, что двойное окрашивание р16/Ki-67имеет большую эффективность с высокой чувствительностью и высокойспецифичностью, чем обычная жидкостная цитология и ДНК ВПЧ-тестирование ввыявлении эпителиальных поражений шейки матки высокой степени тяжести(ЦИН ≥ II).
Количество позитивных р16/Ki-67 атипичных клеток ассоциируется сгистологическойстепеньютяжестицервикальногоинтраэпителиальногопоражения. р16/Ki-67 - маркер нарушения регуляции клеточного цикла инеконтролируемойдиспластическихклеточнойклетках,пролиферации,которыеонподверглисьнаблюдаетсятольковВПЧ-ассоциированнойтрансформации. Выявленная нами эффективность метода имеет такую же высокуючувствительность и специфичность, как и эффективность двойного окрашивания,выявленнаядругимиисследователями[106,89,111].Присравненииэффективности метода двойного иммуноокрашивания с ВПЧ-тестированиемгруппой исследователей [128] было выявлено, и нами также подтверждено, чтоИЦХ анализ с помощью CINtec PLUS более специфичный, так как мы видим нетолько присутствие вируса, но и ответ клеток эпителия шейки матки на еговторжение.Изучались морфологические и иммунофенотипические особенности СЭМСпри ВПЧ-ассоциированном плоскоклеточном предраке и раке шейки матки. В110ходе гистологического и ИГХ исследований были выявлены разные виды СЭМСпо экспрессии Oct-4.
По структурными особенностями и экспрессии биомаркѐровСЭМС были разделены на три вида: репартивные, неопластические, раковые.Проведенное исследование также показало, что в образовании СЭМСпринимают участие клетки, сохраняющие экспрессию маркеров стволовости(Oct-4,ALDH,CD34,Vim),т.е.клеткинеполностьюиличастичнодифференцированные. При этом можно предположить, что в репаративныхСЭМС речь идет о потомках нормальных стволовых клеток, тогда как, внеопластических и раковых СЭМС, построенных из атипичных клеток,экспрессирующих одновременно онкомаркеры (р16, р53, с-myc) и маркерыстволовости (Oct-4, ALDH, Vim), можно предположить, что данные клеткиявляются потомками трансформированной нормальной стволовой клетки, илираковых стволовых клеток.
Следовательно, можно предположить, что раковыестволовые клетки могут образовываться уже на стадии ЦИН<II, что важноучитывать при лечении предрака шейки матки.ЗАКЛЮЧЕНИЕРШМ является одной из наиболее распространенных форм онкологическойпатологии женщин, занимая 7-е место среди всех злокачественных опухолей.Среди злокачественных опухолей у женщин частота РШМ составляет 9,8% [16].Многолетними исследованиями установлено, что в этиологии предрака и ракашейки матки большое значение имеет ВПЧ, принадлежащий к семейству papovaviridae и имеющий тропность к многослойному плоскому эпителию [25].111Большинство ученых считают, что при ВПЧ-инфекции онкобелки вируса Е6 и Е7приводят к генетической нестабильности и эпигенетическим нарушенияминфицированных клеток, вследствие чего запускается процесс канцерогенеза иразвития РШМ [126].
ВПЧ был обнаружен практически в 99.8% случаевинвазивной карциномы шейки матки и более чем в 60% случаев ЦИН [127]. Отмомента первичной вирусной инфекции до развития РШМ проходит достаточнодлительный срок – 5–10 лет, поэтому профилактику РШМ можно проводить нетолько путѐм предотвращения заражения ВПЧ-инфекцией (вакцинацией), но ипутѐм ранней диагностики предраковых процессов и системного скрининга. В техстранах, где проводится вакцинация, где качество и распространенностьскрининга высоки, отмечается снижение частоты развития инвазивного ракашейки матки на 90% [5]. На сегодняшний день вопросы о периодичностипроведения скрининга, использования маркѐров и методов диагностики РШМ,особенно при транзиторной инфекции, остаются открытыми. Американскоеобщество по кольпоскопии и патологии шейки матки рекомендует начинатьпрограмму скрининга РШМ с возраста женщин от 21 года.
В Дании возрастначала скрининга РШМ составляет 23 год, во Франции – 25 лет, в Финляндии – 30лет. Вопрос об особенностях проведения скрининга РШМ у женщин до 30 лет истарше 30 лет остается дискуссионным. Для проведения эффективногоскринингового теста и ранней диагностики РШМ необходимо найти методы,обладающие высокой специфичностью и чувствительностью. В странах сорганизованнымскринингомРШМ,основаннымнацитологическом112исследовании, было показано снижение заболеваемости и смертности от РШМ[21]. Однако при цитологическом исследовании обнаруживается большоеколичество пациентов с клеточными аномалиями, такими как ASC-US и L-SIL, сотносительно низким риском, с поражениями высокой степени, в результате чеготребуется дальнейшее обследование [60]. ВПЧ-тестирование показало своюэффективность в скрининге женщин с ASC-US и L-SIL.
Было обнаружено, чтобольшинство ВПЧ-инфекций носит транзиторный характер [83, 131]. Дляэффективного скрининга и ранней диагностики РШМ необходимо найти методы сдостаточной специфичностью и чувствительностью. Канцерогенез РШМ внастоящее время рассматривается с точки зрения образования раковых стволовыхклеток, а также образования сфероидных структур in vitro и in vivo. Сфероидныеструктуры впервые были описаны в культурахстволовых клеток и активноиспользуются в тканевых принтерах для воссоздания тканей. В 1992г. клетки,выделенные из полосатого тела головного мозга мышей, пролиферировали in vitroпод воздействием фактора роста, путѐм образования сфероидных структур [98].Похожие сфероидныеэпителиально-мезенхимальные структуры, включающиераковые стволовые клетки, обнаруживаются in vivо при предраке и раке учеловека.
Также было обнаружено формирование СЭМС в плоском эпителии приВПЧ-ассоциированном хроническом цервицитеиЦИН,клеткикоторыхэкспрессируют маркер эмбриональных стволовых клеток Oct-4 [12].Целью исследования явилось Оценить эффективность цитологического,иммуноцитохимического методов и ВПЧ-тестирования для выявления предрака и113рака шейки матки, а также изучить патологические, морфологические имолекулярно-генетические особенности процессов репарации и злокачественнойтрансформации эпителия шейки матки на фоне ВПЧ-инфекции.Для решения данного вопроса, были сформированы следующие задачи:1) Сравнить чувствительность и специфичность цитологического метода иВПЧ-тестирования методом ПЦР-НВ при ранней диагностике предрака и ракашейки матки у женщин до и после 30 лет.2) Оценить эффективность комплекса методов ранней диагностики предрака иракашейкиматкиуженщин:жидкостнойцитологии,двойногоиммуноокрашивания p16/Ki67 и ВПЧ-тестирования методом ПЦР-НВ.3) Оценить морфологические и иммуногистохимические характеристики СЭМСразныхвидов,обнаруженныхприрепаративныхипредраковыхВПЧ-ассоциированных патологических процессах в шейке матки.4) Определить наиболее значимые дифференциренциально-диагностическиеморфологические признаки и молекулярные маркеры репаративных ипредраковых процессов на фоне ВПЧ-инфекции.Наше исследование позволило выяснить связь между СЭМС, канцерогенезоми раковыми стволовыми клетками и найти эффективные методы для раннейдиагностики, скрининга РШМ.Проведенное исследование показало, что канцерогенез и морфогенезВПЧ-ассоциированногоплоскоклеточногоракашейкиматки-этомногостадийный процесс, который связан с последовательным развитием114структурных изменений, характеризующихся образованием Оct4-позитивныхрепаративных, неопластических и раковых СЭМС.Репаративные СЭМС встречаются при хроническом цервиците и ЦИН<II,характеризуются отсутствием клеточного атипизма и экспрессии р16, р53, CD34,выявляется низкая экспрессия маркера пролиферации Ki67, маркера стволовостиALDH1, и умеренная экспрессия Vim, онкомаркера C-MYC, а также маркерагипоксии HIF-1.Неопластические СЭМС встречаются при ЦИН<II и ЦИН≥II, их клеткихарактеризуются признаками клеточного атипизма, отсутствием экспрессии CD34,низкойэкспрессиейонкомаркерар53,умереннойэкспрессиеймаркерапролиферации Ki67, онкомаркерар16, маркера стволовости ALDH1, и высокойэкспрессией C-MYC, Vim, маркера гипоксии HIF-1.Раковые СЭМС обнаруживаются при микроинвазивной плоскоклеточнойкарциноме, они формируются вне зависимости от расположения сосудов инередко сливаются в крупные конгломераты.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
