Автореферат (1139916), страница 3
Текст из файла (страница 3)
Животных из экспериментальных групп помещали на поверхность,имеющую равномерно распределенные отверстия диаметром в 1 см. Попыткаживотного изучить отверстие расценивалась как проявление норкового рефлекса, апринятие животным вертикального положения служило подтверждением рефлексавертикальной стойки.Все полученные данные были обработаны в программе Statistica 10 (StatSoft,США). Статистическую значимость отличий количественных показателей независимыхвыборок определяли с помощью непараметрических критериев для парного имножественного сравнения (U-критерий Манна-Уитни, критерий Краскела-Уолиса,критерий Данна). Статистически значимыми считали отличия при p<0,05.РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕВлияниегликозидовМДПнацитотоксическуюактивностьмононуклеарных лейкоцитов кровиПри коинкубации МНК с β-гликозидами МДП с алифатическими агликонамиили референс-контролем в концентрации 1 мкмоль/мл не обнаружено статистическизначимого изменения цитотоксической активности клеток.
Среди гликозидов сциклическими агликонами только β-циклооктилгликозид МДП в этой концентрацииповышал NK-зависимую цитотоксичность, а β-адамантилгликозид МДП снижал ее.11ПривнесениивкультуруМНКнемодифицированногоМДПиβ-гептилгликозида МДП в концентрации 10 мкмоль/мл зафиксировано существенное ипримерно одинаковое повышение цитототоксической активности в сравнении сконтролем. β-Адамантилгликозид МДП снижал NK-активность лейкоцитов, а другие βгликозиды МДП в этой же концентрации не оказывали значимого влияния наспособность МНК лизировать NK-чувствительные клетки-мишени (рис. 1).***Рисунок 1. Влияние гликозидов МДП в концентрации 10 мкмоль/мл нацитотоксическую активность мононуклеарных лейкоцитов крови по отношениюк клеткам линии К562*– р<0,05 по сравнению с контролемСреди всех исследованных соединений только немодифицированный МДП и βгептилгликозид МДП в концентрации 100 мкмоль/мл статистически значимо ипримерно в равной степени увеличивали NK-активность мононуклеарных лейкоцитов.Другие гликопептиды в этой дозе не влияли на NK-зависимую цитотоксичностьмононуклеаров (рис.
2).Вызванный МДП и β-гептилгликозидом МДП цитолиз NK-чувствительныхклеток мононуклеарными лейкоцитами коррелировал с усилением контактов клетокэффекторов и клеток-мишеней. В контрольных лунках МНК и клетки линии К562 при12инкубации в среде без добавления мурамилпептидов образовывали в поле зрения лишьединичные конгломераты, состоящие из 3-5 клеток.**Рисунок 2. Влияние гликозидов МДП в концентрации 100 мкмоль/мл нацитотоксическую активность мононуклеарных лейкоцитов крови по отношениюк клеткам линии К562*– р<0,05 по сравнению с контролемВлияние гликозидов МДП на фагоцитарную активность нейтрофиловОценивали изменение способности нейтрофилов цельной крови человека кфагоцитозу гранул латекса после инкубации с испытуемыми гликозидами МДП вконцентрации 10 мкмоль/мл и МДП в такой же концентрации в качестве референсконтроля.Из исследуемых соединений только β-гептилгликозид МДП вызывал повышениефагоцитарного индекса в сопоставимой степени с референс-препаратом.
В остальныхслучаях отличия от контроля отсутствовали (рис. 3).Фагоцитарное число нейтрофилов крови здоровых доноров статистическизначимо не изменялось в ответ на воздействие тестируемых веществ в концентрации 10мкмоль/мл. Вместе с тем следует отметить тенденцию к повышению фагоцитарногочисла при внесении в культуральную среду немодифицированного МДП, а также тренд13к снижению этого показателя при использовании β-адамантилгликозида и βциклодецилгликозида МДП.**Рисунок 3.
Фагоцитарный индекс нейтрофилов крови, инкубированных сгликозидами МДП* – р<0,05 по сравнению с контролемВлияние МДП и β-гептилгликозида МДП на экспрессию маркеровактивации дендритными клетками человекаОпределено количество и соотношение CD1a+, CD40+, CD80+, HLA+, CD86+,CD14+, СD83+ клеток в общей популяции ДК, инкубированных с β-гептигликозидомМДП в концентрации 10 мкмоль/мл в течение 48 часов. В качестве референс-контроляиспользовали показатели экспрессии этих молекул ДК, подвергнутыми инкубации снемодифицированным МДП в той же концентрации.При культивировании ДК в среде с добавлением МДП или β-гептигликозидаМДП отмечалось формирование конгломератов CD14+-клеток.Оба мурамилпептида увеличивали количество CD14+-клеток в общей клеточнойпопуляции.В то же время МДП и β-гептилгликозид МДП не вызывали статистическизначимых изменений экспрессии клетками других изучаемых маркеров (табл.2).14Таблица 2Влияние МДП или β-гептилгликозида МДП на экспрессию мембранноассоциированных молекул ДКДоля ДК, экспрессирующих мембранно-ассоциированный маркер (%)Контроль2±0,201,4±0,12,4±1,50,5±0,201,6±0,301,5±0,30,6±0,506,4±3 16,2±2*02,1±0,401,4±0,14,6±1011,9±3 9,9±1,1* 0,7±0,8 1,5±0,2β-ГептилгликозидМДП0МДПCD1а CD40 CD1а+ CD80 HLA-DR CD80+ CD86 CD14 CD86+ CD83CD40HLA-DRCD1413±22,2±1,22,3±1,1 0,9±0,20,9±11,7±0,1* – р<0,05 по сравнению с контролемТакимобразом,культивированиедендритныхклетокмононуклеарногопроисхождения в среде, содержащей МДП или β-гептилгликозид МДП, вызывалосущественное повышение экспрессии CD14, но не оказывало статистически значимоговлияния на экспрессию других мембранно-ассоциированных маркеров, характерныхдля созревающих и зрелых дендритных клеток.Следует отметить наличие тенденции к увеличению экспрессии СD83 подвлиянием обоих гликопептидов, HLA-DR – под действием β-гептилгликозида МДП, атакже тенденцию к снижению экспрессии молекул HLA-DR и СD86 – под влияниемМДП, комбинаций молекул CD80+HLA-DR и CD86+CD14 – под действием обоихгликопептидов.Влияние внутрибрюшинного введения МДП и β-гептилгликозида МДП наконцентрацию цитокинов в сыворотке крови мышей C57BL/6Для оценки влияния β-гептилгликозида МДП на продукцию цитокинов in vivoэто соединение или МДП в качестве референс-контроля вводили внутрибрюшинномышам линии C57BL/6 в дозе 10 мкг/животное с последующим забором крови через 1,8 и 24 часа.15Введениеβ-гептилгликозидаМДПвызывалочерез1часповышениеконцентрации IL-1β, IL-6, IFN-γ, TNF-α, GM-CSF, IL-4 и IL-10 в сыворотке крови, приэтом β-гептилгликозид МДП в большей степени увеличивал уровень IL-1β, TNF-α, GMCSF, IL-4 и IL-10 по сравнению с немодифицированным МДП (табл.
3).Таблица 3Изменение концентрации цитокинов в сыворотке крови мышей послеβ-гептилгликозид всравнении с МДПβ-гептилгликозидМДП в сравнении сконтролемβ-Гептилгликозид МДПМДПИсследуемыйцитокин/времяКонтроль (0,9%раствор NaCl)Концентрация цитокинов (пг/мл)МДП в сравнении сконтролемвнутрибрюшинного введения МДП или β-гептилгликозида МДП1ч10,1±1,110,6±0,516,9±0,4↑↑8ч14,4±219,6±2,417,9±1,2↑↑IL-124 ч10,7±2,514,3±1,715,4±1,1↑1ч1,4±0,21,7±0,42,2±0,4↑8ч1,76±0,41,6±0,71,8±0,3IL-224 ч1,0±0,31,7±0,21,7±0,4↑↑1ч3,4±0,63,4±0,33,9±0,5IL-58ч2,8±0,411,9±0,856,3±3,8↑↑24 ч3,2±0,56,4±0,46,4± 0,4↑↑1ч15,4±1,218,2±1,630,6 ±1,85↑↑IL-68ч13,0±0,630,6±1,8541,5±5,37↑↑↑24 ч15,4±1,216,8±0,920,5±1,83↑↑1ч83,1±15,283,1±15,2163±11,7↓↑↑IL-108ч125,3±29,1406,4±24,4612±45,9↑↑↑24 ч250,0±25,7721±41,2223,9±23,7↑↓1ч3,0±0,416,4±0,413,9±0,3↑↑↓IFN-γ8ч3,0±0,517,2±0,416,4±0,6↑↑24 ч17,6±0,618,5±0,417,6±0,6↑↓1ч18,5±1,769,9±5,846±4,9↑↑↑TNF-α8ч19,0±1,183±6,654,7±4,4↑↑↓24 ч32,1±3,159,2±3,934,2±3,3↑↓1ч3,9±0,410,8±0,916,9±0,7↑↑↑GM8ч14,8±1,412,8±0,314,8±1,4↓↓↑CSF24 ч10,8±1,613,3±1,411,9±1,31ч3,3±0.25,6±0,44,7±0,3↑↑↑IL-48ч5,6±0,45,3±0,54,2±0,3↓↓24 ч4,0±0,54,7±0,183,9±0,4↑↓Примечание: стрелками в таблице обозначены статистически значимые (p<0,05)различия.16Через 8 часов после введения исследуемых соединений в экспериментальнойгруппе концентрации IL-5, IL-6, IL-10, IFN-γ, TNF-α, GM-CSF, IL-4 и IL-17 превышалитаковые в группе контроля.
В этот период β-гептилгликозид МДП индуцировалбольший подъем сывороточного содержания IL-5, IL-10, TNF-α и GM-CSF, чемреференс-препарат. Через 24 часа после введения β-гептилгликозид МДП вызывалповышение концентрации IL-5, IL-6 и IL-17 в сыворотке крови. Уровень IL-6 вэкспериментальной группе был выше, чем в группе референс-контроляПовышение концентрации провоспалительных цитокинов IL-1β и IL-6, а такжеGM-CSF через 1 час после введения β-гептилгликозида МДП указывает на активациюмоноцитов/макрофагов. Высокий уровень IL-6 сохранялся спустя 24 часа послевведения препаратов, что может отражать не только высвобождение этого и некоторыхдругих цитокинов под влиянием иммуностимулятора, но и стимуляцию их синтеза denovo.Повышение концентрации IL-10 после введения препарата можно трактоватькак активацию и запуск компенсаторного противовоспалительного каскада.Рост уровня IFN-γ через 1 час у животных экспериментальной группы указываетна раннюю активацию клеточных механизмов противовирусной защиты.Содержание IFN-γ снизилось до значений, равных показателям контрольнойгруппы, через 24 часов после введения β-гептилгликозида МДП, что говорит отранзиторномхарактереусилениясинтезаилитолькоовысвобождениивнутриклеточного пула этого цитокина, синтезированного ранее.Рост концентрации IL-4 и IL-5 в сыворотке крови отражает потенцированиекомпонентов гуморального иммунного ответа, зависимых от Th2- и ILC-2-клеток.
В тоже время отсутствие статистически значимых изменений уровня IL-2 указывает нанеполную стимуляцию B-клеточных реакций.Повышение содержания IL-17, вызванное введением β-гептилгликозида МДП,говоритопотенциалеэтогогликопептидастимулироватьTh17/ILC-17-ассоциированные мобилизацию и активацию нейтрофильных гранулоцитов.Действиеβ-гептилгликозидаМДПнаростмеланомыB16ипродолжительность жизни мышей-опухоленосителейОднократное внутрибрюшинное введение β-гептилгликозида МДП в диапазонедоз от 1 до 25 мкг/животное за 24 часа до прививки меланомы B16 не вызывалостатистически значимого изменения средней продолжительности жизни мышейопухоленосителей (табл.
4). Статистически значимое увеличение продолжительностижизни на 28% было зарегистрировано в группе мышей с привитой меланомой B16,17получавших β-гептилгликозид МДП в дозе 5 мкг/животное в терапевтическом режиме.В других дозах исследуемый гликопептид не влиял на продолжительность жизнимышей-опухоленосителей.Таблица 4Влияние β-гептилгликозида МДП на среднюю продолжительность жизниживотных с привитой меланомой B16Группа/доза препаратаСредняяИзменениепродолжительностьпродолжительностижизни (сутки)жизни (%)Контроль27,3±1,6–β-Гептилгликозид МДППрофилактический режим1мкг/мышь (50 мкг/кг)27,8± 1,3+15мкг/мышь (250 мкг/кг)26,9 ± 0,9‒1,425 мкг/мышь (1,25 мг/кг)28,0± 1,7+2Терапевтический режим1мкг/мышь (50 мкг/кг)27.6 ± 1,2+15 мкг/мышь (250 мкг/кг)38,4 ±3,0*+28*25 мкг/мышь (1,25 мг/кг)25,2 ± 1,1‒7* – р<0,05 по сравнению с контролемОднократное профилактическое введение β-гептилгликозида МДП в дозах 1, 5 и25 мкг/мышь не изменяло объем растущего опухолевого узла ни на 10-е, ни на 15-е, нина 20-е сутки после инокуляции клеток меланомы (табл.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
