Ответы к экзамену (1125682), страница 3

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 3)

Известны бактерии, образующиеплодовые тела (миксобактерии). !!15. Культивирование. Накопительные культуры и принцип селективности.Чистые культуры микроорганизмов. Методы получения и изучение. Основныетипы сред, используемые для культивирования микроорганизмов (по составуи физическому состоянию). Культивирование аэробных и анаэробныхмикроорганизмов, метод Хангейта. Поверхностное и глубинное выращивание.*При изучении свойств микроорганизмов, для получения биомассы необходиморазмножать и выращивать их в условиях лаборатории. Культивирование, иливыращивание, микроорганизмов возможно лишь при создании определенныхусловий для их жизнедеятельности. Из-за малых размеров микроорганизмовработа в лаборатории проводится не с одной особью, а с популяцией организмов,или культурой. Культура микроорганизмов, состоящая из клеток одного вида,называется чистой культурой.

Если число видов два или больше, что говорят осмешанной культуре. При выделении чистой культуру из природныхместообитаний на первом этапе обычно пользуются предложенным Виноградскимметодом получения накопительных культур, в которых преобладают организмыопределенной группы. Накопление желаемых микроорганизмов происходит за счетсоздания элективных условий культивирования, благоприятных для даннойгруппы. Другие организмы, также присутствующие в пробе, в этих условиях либо неразмножаются, либо характеризуются незначительным ростом.

После того какполучена накопительная культура, приступают к выделению чистой культуры. Онаможет быть получена из отдельной колонии или одной клетки. !Выделение из отдельной колонии: принцип Коха. Заключается в получении чистойкультуры из отедельной колонии. Неприменин для выделения организмов, которыене растут или плохо растут на плотных средах. Для выделения чистой кульутрыаэробных микроорганизмов накопительную культуру высевают на пов-ть плотнойсреды с помощью шпателя.

Этим же шпателем протирают пов-ть второй, третьей ичетвертой чашки. В последних чашках будет наблюдаться рост изолированныхколоний. Далее из этих накопительных культур рассевают еще в чашкибактериологической петлей. Чашки ставят в термостат. Выросшие изолированныеколонии отсевают петлей на пов-ть скошенной плотной среды в пробирке или вжидкую среду. Метод глубинного посева: изолированные колониимикроаэрофильных микроорг. и факультативных анаэробов чаще получают этимметодом. Плотную пит. среду разливают в пробирки и стерилизуют.

Потом средурасплавляют и проводят высев из разведений накопительной культуры встерильной водопроводной воде. В пробирку с расплавленной средой вносят 1 млодного из разведений накопит. культуры. Перемешивают и около пламени горелкивыливают содержимое пробирки в стерильную чашку Петри. Среды застывает,ставят в термостат.

Колонии вырезают стерильным скальпелем, извлекают ипереносят в жидкую среду, благоприятную для развития организмов. Методвращающихся пробирок: когда хотят получить изолированные колонии облигатныханаэробных бактерий, характеризующихся особенно высокой чувствительностью ккислороду, используют метод Хангейта. Расплавленный агар засевают бактериямипри постоянном токе через пробирку стерильного инертного газа, освобожденногоот примеси кислорода. Пробирку закрывают резиновой пробкой и помещаютгоризонтально в зажим, вращающий пробирку.

Среда равномерно распределяетсяи застывает тонким слоем. Тонкий слой среды позволяет получить изолированныеколонии, видные невооруженным глазом. !Выделение из одной клетки возможно двумя способами: капельным методом спомощью микроманипулятора или с помощью микроселектора. Капельный метод:используют при работе с крупными микроорганизмами. Накопительную культуруразводят в стерильной среде с расчетом на одиночные клетки. Затем на пов-тьнескольких стерильных стекол наносят по капле разведения.

Готовят препараты«висячая капля». Капли просматривают и отмечают те, в которых только однаклетка. Препарат помещают во влажную камеру. Через сутки опятьмикроскопируют. Капли, в которых образовались микроколонии, переносят впробирки. Микроманипулятор — прибор, позволяющий с помощью специальноймикропипетки извлекать из суспензии одну клетку. Микроселектор — почти то жесамое. !Основные типы сред (по составу и физическому состоянию).

Потребностимикроорганизмов в пит. в-вах чрезвычайно разнообразны и определяютсяособенностями их метаболизма. 1) Питательная среда должна включать доступныйдля клетки источник энергии (для одних - это свет, для других - органический илинеорг. субстрат. 2) Среда должна содержать все необходимые компоненты дляреализации конструктивных процессов в клетке. Потребности микроорг. внекоторых аминокислотах часто удовлетворяют добавлением к среде гидролизатбелка. Чаще всего используют гидролизат казеина. Наиболее требовательныеорганизмы культивируют на средах, содержащих белки или продукты их неполногорасщепления — пептоны.

Многие организмы требуют наличия в среде факторовроста, к которым относятся пурины, пирамилины и аминокислоты. Прототрофы ненуждаются в факторах роста, для ауксотрофов абсолютно необходимо наличие всреде одного или нескольких факторов роста. Микроорг. могут также нуждаться ввитаминах. Для построения в-ва клетки микроорганизмам необходимы фосфор,сера, калий и др. Нужны также металлы: калий, натрий, кальций, магний и другие,которые микрорг.

получают в виде катионов из солей. По составу среды длякультивирования микроорг. делят на натуральные (естественные) и синтетические.К натуральным относятся среды, состоящие из продуктов животного илирастительного происхождения: овощные или фруктовые соки, молоко, животныеткани, кровь, морская вода, отвары, экстракты. К натуральным относятполусинтетические среды, состоящие из природных продуктов в комбинации срыдом опр. хим. соединений. Синтетические среды представляют собой комплексопр. химически чистых соединений, взятых в точно указанных концентрациях.

Пофизическому состоянию среды могут быть жидкими, полужидкими, твердыми(плотными) и сыпучими. !!16. Рост микроорганизмов. Рост отдельных микроорганизмов и популяций(культур). Сбалансированный и несбалансированный рост. Возможныепричины несбалансированного роста.*Различают сбалансированный рост, когда увеличение всех веществ и структурпроисходит пропорционально. Если в среде есть нехватка или избыток чегонибудь, то рост становится несбалансированным, т.е. какие-то продуктыметаболизма могут преобладать. !!17.

Основные параметры роста культур: время генерации, удельная скоростьроста, выход биомассы, экономический коэффициент.*Чтобы правильно оценивать рост культуры, необходимы следующие простейшиепараметры:!• концентрация клеток, клеток/мл;!• время генерации — промежуток времени, за который число клеток удваивается;!• константа скорости деления — число удвоений в час;!• константа скорости роста.!Важной характеристикой культуры является константа скорости роста — «мю»,которая зависит от условий выращивания (если условия стандартные, то дляданной культуры она совершенно определенная).

Под выходом биомассыпонимают разность между максимальной и исходной массой бактерий (г сухого вва). Экономический коэффициент — отношение урожая клеток к количествупотребленного субстрата (г). !!18. Закономерности роста чистых культур при периодическомкультивировании. Кривая роста, особенности отдельных фаз. Ростмикроорганизмов при непрерывном культивировании.*Обычно при росте в жидких средах в закрытых сосудах определенного объемамикроорганизмы находятся в закрытой системе. Такое культивирование называютпериодическим, при этом популяция проходит разные фазы своей жизни. Каждаяфаза характеризуется определенными физиолог.

параметрами. !Лаг-фаза — фаза «привыкания» клеток к среде, при этом происходит индукциясоотв. ферментов, увеличение количества ДНК и РНК. В экпоненциальной фазеклетки растут и делятся с максимальной скоростью, их рост не ограничен. По мереисчерпания субстратов и накопления продуктов обмена скорость роста снижается(фаза замедления роста) и культура переходит в стационарную фазу, в течениекоторой процессы деления и отмирания клетов в популяции находятся вдинамическом равновесии. Когда исчерпание пит.

в-в и накопление продуктовметаболизма преодолеют некие пороговые концентрации, начинается фазаотмирания, которая иногда также имеет логарифмический характер. !Проточная система культивирования позволяет зафиксировать культуру в какойто определенной фазе (обычно экспоненциальной). При этом состав среды иусловия роста остаются постоянными.

Подача свежей среды и удаление частисуспензии (проток) происходит с той же скоростью, с какой растет культура.Существуют два принципиально разных типа непрерывных культур — хемостат итурбидостат. В хемостате фиксируется какой-нибудь химический параметрпроцесса (концентрация субстрата, кислорода). Эта концентрация являетсялимитирующей.

Работа турбидостата основана на поддержании постояннойплотности бактериальной суспензии. Фотоэлемент измеряет плотностьвытекающей суспензии и автоматически изменяет проток. !!19. Математическое выражение роста культур в непрерывных условиях.Значения непрерывного культивирования для изучения свойствмикроорганизмов и для их практического использования. Синхронныекультуры, способы получения и значение.*Проточная система культивирования позволяет зафиксировать культуру в какойто определенной фазе (обычно экспоненциальной).

При этом состав среды иусловия роста остаются постоянными. Подача свежей среды и удаление частисуспензии (проток) происходит с той же скоростью, с какой растет культура.Существуют два принципиально разных типа непрерывных культур — хемостат итурбидостат. В хемостате фиксируется какой-нибудь химический параметрпроцесса (концентрация субстрата, кислорода). Эта концентрация являетсялимитирующей. !(написать мат.

формулы!!!)*Работа турбидостата основана на поддержании постоянной плотностибактериальной суспензии. Фотоэлемент измеряет плотность вытекающейсуспензии и автоматически изменяет проток. !Иногда необходимо, чтобы все клетки в популяции делились одновременно(синхронно). Для этого используют различные приемы получения синхронныхкультур:!• получение клеток одного ращмера путем фильтрации или дифференциальногоцентрифугирования;!• резкое изменение температура инкубации;!• воздействие света.!При этом кривая роста получается ступенчатой.

Характеристики

Список файлов ответов (шпаргалок)