Raznye_bilety (1123251), страница 2
Текст из файла (страница 2)
Из них наибольший для исследователя интереспредставляют малые моноламеллярные везикулы (ММВ).ММВ можно получать несколькими способами: ультразвуковая обработка водныхдисперсий фосфолипидов, быстрое введение этанольного раствора липида вводную фазу, а также метод экструзииАдсорбированныйполимерможетнарушатьраспределениелипидоввлипосомальной мембране.
1)Метод микрокалориметрии :адсорбированныйполикатионспособенвызыватьлатеральнуюсегрегациюотрицательно заряженных липидов (образование кластеров) во внешнем слоелипидов.некоторые поликатионы способны индуцировать флип-флоп липидных молекул.Отрицательно заряженный липид перемещается из внутреннего слоя мембраны навнешний, а его место занимает электронейтральный липид.Образующаяся асимметрия липидного бислоя сохраняется только в присутствииадсорбированного поликатиона.
Удаление полимера с поверхности приводило квосстановлению равномерного распределения липидов во внешнем и внутреннмслоях липосом.Адсорбция может быть необратимой.Поликатион спосбен вызыватьне только нарушение целостности липосомальной мембраны, но и даже ееразрушение .2)спектротурбидиметрия и динамическое светорассеяниеМетод спектротурбидиметрии основан на определении спектральной зависимостиинтенсивности прошедшего через дисперсную систему света, ослабленного за счетрассеяния. Динамическое светорассеяние позволяет определить коэффициентдиффузии дисперсных частиц в жидкости путем анализа корреляционной функциифлуктуаций интенсивности рассеянного света.
Далее, из коэффициента диффузиирассчитывается радиус наночастиц.И др.....Билет 12, 16,. ХемилюминесценцияХемилюминесцентный анализ является одновременно разделом каталитических(кинетических) методов анализа с одной стороны, и люминесцентных - с другой. Оноснован на измерении интенсивности и суммы выделенного света в химическойреакции. К его преимуществам следует отнести низкие пределы обнаружениясоединений (10)^ -10 – (10)^-4 г/см3 при конечном объеме проб 2-5 см^3, достаточнаяточность определения, экспрессность, простота аппаратуры.Уровень хемилюминесценцииопределяется образованием свободных радикалов(СР) и зависит от наличия антиоксидантов (АО) в системе. Есть гипотеза, чторазвитие патологических процессов в организме связано с образованием СР приперекисном окислении липидов (ПОЛ), взаимодействие которых с белками вмембранах и другими важнейшими компонентами клеток и разных биологическихсистем может приводить к различным нарушениям.Сам метод: Регистрацию спонтанной (СХЛ) и индуцированной хемилюминесценции–наквантометрическойустановкесприменениемэлектронныхузловиусилительных схем.Для изучения фотохемилюминесценции (ФХЛ) образцы сыворотки крови с открытойповерхностью облучали широким спектром ультрафиолетового (УФ) света спомощью лампыв течение 1 мин на расстоянии от центра источника.
Затемоблученные образцы перемещали в измерительную ячейку полуавтоматическимспособом в течение 1-2 сек и регистрировали ФХЛ. Облучение проводили приразличной температуре.За это время температура испытуемого образца снижаласьдо 390С.Электрохемилюминесценцию (ЭХЛ) сыворотки крови исследовали с применениемплатиновых электродов врастворе KCl, при постоянном напряжении. Послеустановления стационарного уровня ЭХЛ раствора KCl в ячейку добавляли немногосыворотки крови, разбавленной раствором KCl в 50 раз. Изменение интенсивностиЭХЛ при добавлении сыворотки служило мерой для оценки антиоксидантной илипрооксидантнойактивности.ДляоценкиинтенсивностиСР-ныхпроцессовопределяли продукты ПОЛ.
И статистическая обработка данных.Билет 19, 34. Мембранный потенциал и ионные токиРегистрация биопотенциалов осуществляется с помощью специальных методовисследованияэлектровозбудимыхмембран,различающиесявне-ивнутриклеточными способами отведения мембранного потенциала.ИсследованияПДметодамивнеклеточногоотведениявнастоящеевремяпроизводятся редко, так как они имеют один существенный недостаток, мешающийрегистрироватьзначительномэлектрическиевнеклеточномпараметрыоднойшунтированииклетки.параметровОнпроявляетсяпотенциалавиз-занедостаточно плотного контакта регистрирующего устройства с биологическоймембраной.
С другой стороны, простота и доступность этого способа регистрацииэлектрических параметров позволило его широко использовать в диагностическойпрактике для регистрации суммарного потенциала электровозбудимых тканей (ЭКГ,ЭМГ, ЭЭГ и т.д.).Методсахарозногомостикаявляетсявнеклеточнымспособомрегистрациипараметров ПД. Использование изолирующих межклеточные участки сахарозныхпротоков (мостиков) позволяет ограничить внеклеточное шунтирование и достаточноуверенно регистрировать параметры биопотенциалов .Основное развитие в настоящее время получила техника внутриклеточногоотведения параметров биопотенциалов. С помощью микроэлектродов, многоменьших, чем гиганские одиночные клетки по размерам (0,5-1 мкм против 100 мкм),прокалываласьбиологическаямембрана,ирегистрировалисьэлектрическиепараметры внутриклеточного содержимого .Изменение материалов, из которых изготовлялись микроэлектроды, происходилоодновременно с техническим прогрессом по пути использования металлов, стекла,полимеров и снова стекла.
Применимость и точность этого способа регистрациимембранных потенциалов подтверждают уникальные эксперименты многократноговведения микроэлектродов внутрь одной клетки при незначительном изменениизначений биопотенциалов.Возможности микроэлектродной техники позволили регистрировать ионный ток,протекающий через мембрану в момент развития ПД. Для этого использовалсяметод фиксации потенциала (clamp-voltage), представляющий электронную схемуподдержания постоянного уровня мембранного потенциала за счет источникаобратной Э.Д.С., включенной через усилитель с обратной связью.
На Рис.9представлен один из вариантов такой схемы с соответствующими блоками иобъектом – биологической мембраной.Точные измерения значений ионных токов из-за своих малых величин при методеclamp-voltageосложнялисьвозможностьюихшунтированиянаграницемикроэлектрод-мембрана, существующей даже при достаточно высоком мегаомном((10)^6 Ом·см) удельном сопротивлении контакта с клеткой.Настоящий прорыв в данной области был совершен при достижении контакта склеткой гигоомных ((10)^9 Ом·см) значений удельного сопротивления контактамикроэлектрода и объекта. Особые материалы и способы заточки микроэлектродовпозволили регистрировать на целой клетке (whole cell) и на участках мембраны (pachclamp) динамику одиночных ионных токов.Билет 24, 27, 32.
Молекулярное моделирование белков(http://greenfuture.ru/profile/Homa/Молекулярное%20моделирование%20и%20конструирование/++tool++ecology5.jpg/)(http://www.workshop-misis.ru/documents/comp_model/ShaitanText.pdf)Существует несколько принципиально различающихся методов моделированияпространственной структуры белка, в частности:-Распознавание фолда (от англ. folding — укладка, упаковка) с использованиембиблиотеки известных фолдов. Это начальный этап моделирования структуры.
Оноприменяется, если не известны близкие гомологи моделируемой молекулы. Точностипостроенной на базе этого метода модели недостаточно, чтобы исследоватьмеханизмы функционирования макромолекулы и, в конечном счете, создаваемоймолекулярной системы.-Предсказание архитектуры белковой глобулы на основе знаний об атомныхвзаимодействиях.-Моделирование по гомологии.Некоторые методы:Метод молекулярной динамики (МД) позволяет моделировать детальнуюмикроскопическую картину внутренней подвижности макромолекулы. В его основележит расчет классических (ньютоновских) траекторий движения макромолекулы вфазовом пространстве координат и импульсов ее атомов. В МД молекуларассматривается как система взаимодействующих классических частиц.
Методмолекулярной динамики успешно используется в теоретических исследованияхструктуры и динамики биологических макромолекул, жидкостей, твердых тел идругих молекулярных систем.Наряду с методом молекулярной динамики используется еще одна группаквазидинамических методов, объединенных под общим названием «метод МонтеКарло». Метод Монте-Карло отличается от метода молекулярной динамики тем, чтокаждая следующая конформация молекулы определяется не путем решенияуравнений Ньютона, а как результат случайного процесса.В настоящее время лидирующим методом при изучении динамики макромолекулявляется молекулярное моделирование с использованием суперкомпьютерныхтехнологий.Дляизученияконформационныхдвиженийифункциональныхпроцессов, в которых участвуют тяжелые атомы (не водородные) с успехомприменяются методы классической молекулярной динамики.
Для процессов сучастием протонов и электронов необходимо использовать гибридные методыкв.мех. и мол.мех.В США была разработанасуперкомпьютерная системасо специальнойархитектурой процессоров, заточенной под определенные атомные силовые поля иалгоритмы вычислений, которая позволила дойти до сотен мкс, т. е. попасть вобласть физиологически значимых времен и моделировать весь цикл работыпотенциал-зависимогоионногоканала(включаяоткрытие-закрытиеканала).Особенно интересны функционально значимые крупномасштабные и относительномедленные коллективные движения, приводящие к открыванию и закрываниюканала.Однимизнаиболееудачныхметодовизученияфизикиконформационнойподвижности является мессбауэровская спектроскопия.
Дело в том, что формалинии мессбауэровского спектра напрямую связана с временной зависимостьюсреднего квадратичного смещения атомов, а параметры мессбауровского излучателяпопадают в очень удачный диапазон значений – длина волны около 1А, ахарактерное время движений, к которым чувствительна форма линии порядка 10 нс.Этообеспечиваетодновременнохорошеепространственноеивременноеразрешения для атомных смещений. Метод обладает рекордным энергетическимразрешением порядка нЭв и является уникальным инструментов для изучениятонких механизмов конформационных движений в макромолекулах.Одна проблема –источник мессбауэровского излучения был очень слаб и нужно было создаватьгамма-лазер.Билет 26, 22, 10.
Patch clampМетодика электрофизиологической регистрации активности клеток «Патчкламп», впервые была использована в 1976 году Неером и Сакманом. Данный методпозволяет регистрировать изменения потенциала и токов на мембране клетки, сразличных типов клеток, в т.ч. с одиночных каналов. Через контакт между кончикомстеклянного микроэлектрода и мембраной клетки, имеющим высокое сопротивление.Такое высокое сопротивление позволяет получать записи с небольшим уровнемшума. Достаточным, даже для регистрации токов с одиночных каналов, иприменяется для изучения их проводимости и кинетики.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
